鐘云華 宋 波 劉 俊 鄭 梅 陳 滟 叢樹(shù)園 孫 睿

(云南省第一人民醫(yī)院內(nèi)科干部保健科，云南 昆明 650032)

非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中多種基因和蛋白異常表達(dá)，使腫瘤的侵襲性增加。微小染色體維持蛋白7(MCM7)屬于MCM蛋白家族，是啟動(dòng)DNA復(fù)制起始點(diǎn)的復(fù)制準(zhǔn)許因子之一，參與DNA的合成，促進(jìn)細(xì)胞的增殖〔1〕?；罨鞍准っ窩受體-1(RACK1)屬于天冬氨酸/色氨酸-40結(jié)構(gòu)域蛋白家族成員，能與多種重要的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和信號(hào)分子形成協(xié)同作用，調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、周期演進(jìn)、細(xì)胞生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng)等功能〔2〕。本文關(guān)注MCM7和RACK1在非小細(xì)胞肺癌中的作用及二者的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1臨床資料 選取2011年1月至2012年12月在我院確診為非小細(xì)胞肺癌的患者98例作為觀察組，均行手術(shù)治療，術(shù)后標(biāo)本均應(yīng)用甲醛溶液固定。均符合WHO中非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男50例，女48例，年齡52～73(平均67.5)歲。選取70例腫瘤切除后肺組織的切緣組織作為對(duì)照組，并嚴(yán)格經(jīng)病理醫(yī)師證實(shí)為正常的肺組織，男35例，女35例，年齡53～72(平均66.7)歲。

1.2MCM7和RACK1蛋白檢測(cè) MCM7和RACK1蛋白的濃縮液均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，按不同比例進(jìn)行稀釋進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最理想的濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。蛋白的檢測(cè)應(yīng)用免疫組化SP法、DAB染色，嚴(yán)格質(zhì)量控制，減少各種誤差。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) MCM7陽(yáng)性部位為細(xì)胞核，RACK1陽(yáng)性部位為細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)細(xì)胞，選擇10個(gè)400倍視野并計(jì)數(shù)，以陽(yáng)性率≥25%為陽(yáng)性，以陽(yáng)性率<25%為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)或相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1MCM7和RACK1在觀察組與對(duì)照組中表達(dá)陽(yáng)性率的比較 MCM7和RACK1在觀察組中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 MCM7和RACK1在兩組中表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

2.2觀察組中MCM7和RACK1的表達(dá)在不同臨床病理特征中的關(guān)系 觀察組中MCM7和RACK1的表達(dá)均與腫瘤的最大徑、胸膜侵犯、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤(rùn)密切相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 觀察組中MCM7和RACK1的陽(yáng)性表達(dá)

2.3觀察組中MCM7和RACK1表達(dá)的相關(guān)性分析 觀察組中MCM7和RACK1(r=0.48，P=0.041 0)的表達(dá)具有正相關(guān)性。

3 討 論

非小細(xì)胞肺癌發(fā)展過(guò)程中可以表現(xiàn)出明顯的侵襲和轉(zhuǎn)移，多種蛋白的變化促進(jìn)了此過(guò)程。在真核細(xì)胞中，DNA復(fù)制合成起始于一個(gè)特定的起始復(fù)制點(diǎn)，這個(gè)位點(diǎn)是保證基因組在每個(gè)細(xì)胞周期僅復(fù)制1次的必要條件〔3〕。正常情況下MCM7參與完成正常的準(zhǔn)許功能，當(dāng)MCM7表達(dá)失調(diào)時(shí)可以引起染色體的缺損，促使腫瘤發(fā)生〔4〕。當(dāng)腫瘤發(fā)生后，MCM7的異常表達(dá)還可以破壞細(xì)胞骨架和改變細(xì)胞凋亡等參與腫瘤的進(jìn)展〔5〕。RACK1含有7個(gè)高度保守的結(jié)構(gòu)域，作為活化蛋白激酶(PKC)的錨定蛋白，能將PKC從胞質(zhì)轉(zhuǎn)位到胞膜而發(fā)揮對(duì)PKC的調(diào)節(jié)作用〔6，7〕。有學(xué)者認(rèn)為RACK1表達(dá)上調(diào)時(shí)可導(dǎo)致腫瘤的化療受阻，其機(jī)制是定位于溶酶體的RACK1與PKC結(jié)合，使真核細(xì)胞翻譯起始因子磷酸化，再使細(xì)胞生長(zhǎng)因子與生存的蛋白因子翻譯，引起化療的抵抗〔8，9〕。因此RACK1不僅對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展有影響，還對(duì)治療有明顯的影響。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示MCM7和RACK1在腫瘤的形成和進(jìn)展中具有重要作用。在此過(guò)程中MCM7異常表達(dá)使細(xì)胞正常復(fù)制的位點(diǎn)發(fā)生變化，引起腫瘤的失控性增生。而且MCM7可以調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和連接蛋白，調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子的生物利用度，使腫瘤細(xì)胞具有侵襲性。RACK可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝而影響細(xì)胞之間的信息傳遞〔10〕。RACK還可以調(diào)節(jié)細(xì)胞分化及遷移，進(jìn)而可能影響腫瘤的生物學(xué)行為，這與Nagashio等〔11〕認(rèn)為RACK1是肺癌新的重要生物標(biāo)志物的結(jié)論相同。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示MCM7和RACK1可能具有通路作用，由于RACK1/MCM7在腫瘤中表達(dá)增高，其促癌作用明顯，此過(guò)程活化后，可以激活其相應(yīng)的靶蛋白，引起腫瘤的快速生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示MCM7和RACK1參與腫瘤的浸潤(rùn)、脈管侵犯和淋巴累犯。由于以上因素均與預(yù)后相關(guān)，因此應(yīng)用免疫組化檢測(cè)MCM7和RACK1的表達(dá)可能對(duì)判斷非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后有一定臨床意義。

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