朱亞平 周 雨 劉 靜 王 樂 凌 暉

(邵陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，湖南 邵陽 422001)

胃癌是世界上居第二位致死性的惡性腫瘤〔1〕，其發(fā)生、發(fā)展與多種致癌基因、細(xì)胞凋亡基因密切相關(guān),其中細(xì)胞凋亡的失衡起著重要的作用。凋亡主要通過內(nèi)在和外在的凋亡通路進(jìn)行誘導(dǎo)。內(nèi)在的通路是激活線粒體相關(guān)信號,而外在的通路以死亡受體活化為特點(diǎn)〔2〕，外在凋亡通路的死亡受體屬于腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族,包括Fas、TNF受體1(TNFR1)、凋亡相關(guān)蛋白死亡受體3(DR3)、DR4、DR5、DR6〔3〕。本文主要檢測不同胃組織中DR5與白介素1β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白(c-FLIP)的表達(dá)情況，了解在疾病中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 組織制備選用胃腺癌組織60例,32例癌旁正常胃黏膜和26 例慢性胃炎標(biāo)本。其中男37例,女23 例,年齡61～77〔平均(68.25±4.72)〕歲，其中高分化腺癌 20 例、中分化腺癌 21 例和低分化腺癌19 例。所有患者術(shù)前均未接受化、放療。

1.2切片制作及免疫組化染色〔4,5〕將樣本切片放入溫箱烘片后,經(jīng)二甲苯脫蠟和梯度酒精逐級水化,蒸餾水沖洗3 min,磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗5 min×3次。把切片浸入拘椽酸鹽抗原修復(fù)液中,修復(fù)20 min,然后置于新鮮配制的3%H2O2中浸泡30 min,先滴加一抗(DR5 1∶1 000,c-FLIP 1∶200)于切片上 ,4℃冰箱過夜后滴加二抗工作液,孵育25 min。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉素卵白素工作液,37℃濕盒內(nèi)孵育20 min。各步間PBS水洗,二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色,蘇木素復(fù)染。使用梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.3觀察指標(biāo) 觀察不同性別、年齡及胃組織中DR5及c-FLIP的表達(dá)，不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表達(dá)，以及DR5及c-FLIP的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)用 Spearman分析。

2 結(jié) 果

2.1DR5及c-FLIP在不同性別、年齡及胃組織中的表達(dá) DR5與c-FLIP蛋白表達(dá)與年齡、性別無明顯相關(guān)性，各組DR5在胃癌組織中陽性表達(dá)率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。各組c-FLIP在胃癌組織中陽性表達(dá)率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。見表1。

表1 DR5及c-FLIP在不同性別、年齡及胃組織中的表達(dá)情況〔n(%)〕

2.2不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表達(dá) DR5蛋白在高、中、低分化腺癌中的表達(dá)率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。c-FLIP在高、中、低分化腺癌中的表達(dá)率比較差異有顯著性意義(P<0.05)。即分化程度越低,DR5與c-FLIP 蛋白表達(dá)越高。見表2。

表2 不同分化程度的胃腺癌中DR5及c-FLIP的表達(dá)〔n(%)〕

2.3DR5及c-FLIP的關(guān)系 51例 c-FLIP 蛋白陽性表達(dá)的胃癌標(biāo)本中有35例DR5呈陽性表達(dá)，DR5 與 c-FLIP 蛋白之間的關(guān)系表現(xiàn)為正相關(guān)性(r=0.93)。

3 結(jié) 論

胃癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤，其中癌基因、抑癌基因、凋亡制基因之間的失調(diào)在疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。死亡受體是外源性凋亡通路的重要調(diào)節(jié)器,激活某些死亡受體如DR5，通過誘導(dǎo)凋亡選擇性殺死癌細(xì)胞,TNF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)死亡受體已經(jīng)逐漸成為一種重要的癌癥治療靶點(diǎn),DR5高表達(dá)于多種腫瘤組織中〔6～8〕。 研究表明，在非小細(xì)胞肺癌中,DR5表達(dá)與死亡風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)〔9〕。乳腺癌中DR5表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，與預(yù)后相關(guān)〔10〕。c-Flip蛋白是細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子與增殖誘導(dǎo)劑。c-Flip常通過阻止半脫氨酸蛋白酶(caspase-8)活化抑制凋亡，能夠抑制fas、TNFR-1、DR3、TRAILR介導(dǎo)的凋亡〔11～13〕。

DR5在胃癌組織中大部分為陽性表達(dá)，可利用其作為TRAIL的受體,研發(fā)胃癌的治療藥物〔14〕。c-FLIP 在胃癌組織高表達(dá),且顯著高于正常胃黏膜,c-FLIP 表達(dá)可能與胃癌細(xì)胞增殖相關(guān)〔15〕。DR5 與 c-FLIP 蛋白之間的關(guān)系表現(xiàn)為正相關(guān)性。一方面可以作為胃癌早期診斷的檢測指標(biāo);另一方面可以根據(jù)其表達(dá)判斷胃癌組織分化程度，兩者起到協(xié)同作用。

4 參考文獻(xiàn)

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