才保加 祁玉娟 周 為 王曉龍 馬玉斌 馬曉明

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸外科，青海 西寧 810001)

胃腺癌病變進(jìn)展快，多數(shù)患者預(yù)后較差。老年患者由于常伴有退行性改變及萎縮性變化，因此其癌變過(guò)程多是基因和蛋白異常表達(dá)引起的。研究認(rèn)為多種蛋白表達(dá)增高是促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的重要因素〔1〕。胚胎特異性基因Nanog和Oct-4均為同源域轉(zhuǎn)錄因子，在多種生物細(xì)胞的分化中起重要作用〔2〕。研究顯示Nanog和Oct-4基因的成人干細(xì)胞可能是癌變起源的靶細(xì)胞之一，即Nanog和Oct-4蛋白表達(dá)升高時(shí)，可能對(duì)促進(jìn)腫瘤發(fā)生有一定作用〔3〕。Furin是蛋白前體加工酶家族中的重要成員，與腫瘤的轉(zhuǎn)化發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔4〕。本研究旨在探討老年胃腺癌患者癌組織Nanog、Oct-4和Furin的表達(dá)及臨床意義。

1 材料和方法

1.1臨床資料 2009年1月至2013年6月在我院行胃腺癌根治手術(shù)的老年患者140例作為觀察組，術(shù)后常規(guī)留取新鮮組織，并置于-80°冰箱中凍存。均符合世界衛(wèi)生組織中的診斷和分型標(biāo)準(zhǔn)。其中男80例，女60例，年齡60～82歲，平均(68.9±5.9)歲。其中高分化20例，中分化30例，低分化90例。術(shù)前均未進(jìn)行放、化療。同時(shí)選取部分病例的切端，經(jīng)病理證實(shí)為正常胃黏膜，共95例作為對(duì)照組，其中男50例，女45例，年齡60～81歲，平均(68.7±6.4)歲。兩組一般臨床資料無(wú)明顯差別(P>0.05)，具有可比性。

1.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Nanog、Oct-4和Furin蛋白的表達(dá) Nanog、Oct-4和Furin蛋白的濃縮液均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。依不同比例進(jìn)行稀釋，并應(yīng)用免疫組化法進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇最佳配比濃度進(jìn)行流式細(xì)胞的正式實(shí)驗(yàn)。制備1×106的單細(xì)胞懸液，取1 ml，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟加入一抗蛋白和二抗后，上機(jī)檢測(cè)，應(yīng)用美國(guó)BD公司的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，設(shè)陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照，應(yīng)用系統(tǒng)自帶的軟件分析。嚴(yán)格質(zhì)量控制，減少人為誤差。

1.3Nanog、Oct-4和Furin結(jié)果的判定方法 應(yīng)用熒光指數(shù)(FI)表示Nanog、Oct-4或Furin蛋白表達(dá)的相對(duì)含量。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組Nanog、Oct-4和Furin蛋白表達(dá)量的比較 觀察組中Nanog、Oct-4和Furin蛋白的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(P<0.000 1)，見(jiàn)表1。

2.2觀察組不同臨床特征Nanog、Oct-4和Furin蛋白表達(dá)的比較 觀察組Nanog、Oct-4和Furin的表達(dá)量與腫瘤的浸潤(rùn)深度、臨床分期、分化程度、腫瘤最大徑均密切相關(guān)。見(jiàn)表2。

2.3觀察組Nanog、Oct-4和Furin表達(dá)相關(guān)性 Nanog和Oct-4的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.45，P=0.035 1)。而Nanog、Oct-4和Furin的表達(dá)均未見(jiàn)明顯相關(guān)性(P>0.05)。

表1 兩組Nanog、Oct-4和Furin蛋白表達(dá)的比較

表2 觀察組不同臨床特征Nanog、Oct-4和Furin蛋白表達(dá)的比較

3 討 論

老年人胃腺癌發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚。多項(xiàng)研究認(rèn)為癌基因和干細(xì)胞的活化可以促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展〔5〕。Nanog是胚胎干細(xì)胞中特異表達(dá)的基因，是維持干細(xì)胞自我增殖和多能性的關(guān)鍵因子〔6〕。Nanog屬于ANTP類NK家族基因，在人類定位于12號(hào)染色體12p13區(qū)，大小為7.84 Mb。Nanog的cDNA由2 184個(gè)核苷酸組成，包含一個(gè)開(kāi)放閱讀框，編碼305個(gè)氨基酸〔7〕。有觀點(diǎn)認(rèn)為Nanog是多能性轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)的核心元素，是干細(xì)胞增殖所必需的，也是保持分化潛能的重要因子〔8,9〕。Oct-4基因是參與調(diào)控胚胎干細(xì)胞自我更新和維持其全能性的最重要的轉(zhuǎn)錄因子之一〔10〕，也是細(xì)胞外基質(zhì)全能性標(biāo)志，能有效地維持細(xì)胞外基質(zhì)正常的未分化狀態(tài)并促進(jìn)細(xì)胞的增殖反應(yīng)〔11,12〕。Furin參與許多重要的生理過(guò)程，如多肽與蛋白質(zhì)激素的合成與分泌、膜受體的成熟、血漿蛋白前體的激活等〔13〕。這些蛋白質(zhì)在發(fā)揮活性之前需經(jīng)蛋白轉(zhuǎn)化酶對(duì)其前體進(jìn)行切割〔14〕。Furin在多種組織中均有表達(dá)，在細(xì)胞內(nèi)主要定位于反式高爾基體，在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中也有一定的分布，并在這些部位參與多種底物分子的加工活化〔15〕。在其眾多底物中，有許多與腫瘤的轉(zhuǎn)化、發(fā)展浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此探討Furin與腫瘤的關(guān)系有重要意義〔16〕。

本研究結(jié)果提示Nanog高表達(dá)是促進(jìn)腫瘤發(fā)生和進(jìn)展的因素，還證明了胃腺癌中存在一種干細(xì)胞樣的腫瘤細(xì)胞，但是不能就此斷定表達(dá)Nanog的細(xì)胞就是胃腺癌的干細(xì)胞，還需要更多的證據(jù)證明腫瘤作為干細(xì)胞起源及對(duì)腫瘤發(fā)生的影響作用。Nanog、Oct-4和Furin 3種蛋白參與腫瘤的浸潤(rùn)性生長(zhǎng)、分化過(guò)程及腫瘤進(jìn)展。聯(lián)合檢測(cè)3種蛋白的表達(dá)可能對(duì)判斷預(yù)后有一定影響，即Nanog、Oct-4和Furin高表達(dá)提示不良預(yù)后。Nanog和Oct-4二者可能具有協(xié)同正向作用，而Nanog和Oct-4與Furin均為不同調(diào)節(jié)的通路。也有觀點(diǎn)認(rèn)為Nanog和Oct-4在自我增殖中起關(guān)鍵性作用，多條通路如WNT、SHH和NOTCH等可能與Nanog、Oct-4的調(diào)節(jié)有關(guān)〔9〕。但是其具體調(diào)節(jié)通路需要更多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。Nanog、Oct-4和Furin高表達(dá)時(shí)，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)快，體積增大，侵襲能力增加〔17～19〕。

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