吳慶蓮 舒 暢

(大慶油田總醫(yī)院集團(tuán)龍南醫(yī)院，黑龍江 大慶 163453)

喉癌是威脅人類生命的重要疾病，在癌癥發(fā)病之前或早期及時(shí)采取必要的預(yù)防和治療措施是攻克癌癥的一大貢獻(xiàn)〔1〕。隨著對(duì)喉癌發(fā)病機(jī)制的深入研究，基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)MMP-2、MMP-9被證實(shí)與喉癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔2〕。本研究應(yīng)用雙抗體夾心法檢測(cè)不同時(shí)期喉癌患者血清中MMP-2、MMP-9含量變化，旨在為人喉癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后判斷提供客觀指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1材料 68例喉癌患者血清均為我院住院病人提供，均有病理及CT影像診斷，其中男45例，女23例，中位年齡56歲，全部病例為喉鱗狀細(xì)胞癌。根據(jù)美國抗癌協(xié)會(huì)第7版TNM分期T116例，T224例，T318例，T410例。病理分級(jí)：I級(jí)18例，Ⅱ級(jí)26例，Ⅲ級(jí)24例， MMP-2、MMP-9試劑購于北京中山生物試劑公司。

1.2方法 取-70℃冰箱內(nèi)凍存的人喉癌血清做1∶100稀釋，分別加入含有MMP-2、MMP-9抗體的酶標(biāo)板內(nèi)，100 μl/孔，4復(fù)孔，置37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)反應(yīng)60 min,取出后磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3次，5 min/次,每孔內(nèi)加入酶標(biāo)抗體工作液100 μl，置37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)靜止60 min,取出后甩干，PBS洗3次，加入鄰苯二胺工作液100 μl，避光保溫10 min，每孔內(nèi)加入終止反應(yīng)液50 μl，立即于酶標(biāo)儀波長492 nm處測(cè)OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上作圖，查出MMP-2、MMP-9含量，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)即為MMPs含量。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清中MMP-2、MMP-9含量比較 喉癌病人血清中MMP-2、MMP-9含量表達(dá)與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，尤其是喉癌轉(zhuǎn)移組含量升高非常明顯。見表1。

表1 喉癌病人與對(duì)照組血清中MMP-2、MMP-9含量表達(dá)比較

2.2喉癌病人血清中MMP-2、MMP-9含量與病理分級(jí)關(guān)系 喉癌病人血清中MMP-2、MMP-9與病理分級(jí)呈正相關(guān)，即病理分級(jí)越高，MMP-2、MMP-9含量亦升高明顯，Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)之間相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 喉癌病人血清中MMP-2、MMP-9含量表達(dá)與病理分級(jí)的關(guān)系

2.3喉癌患者血清中MMP-2、MMP-9含量表達(dá)與臨床分期的關(guān)系 MMP-2、MMP-9含量與臨床分期有關(guān)，T1、T2兩組間MMP-2、MMP-9含量接近，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而T1、T2分別與T3、T4相比差異非常顯著。見表3。

表3 喉癌病人血清中MMP-2、MMP-9含量表達(dá)與臨床分期的關(guān)系

3 討 論

喉癌的浸潤和轉(zhuǎn)移是多步驟的復(fù)雜過程，首先是癌細(xì)胞自原發(fā)灶脫落，然后進(jìn)入血道或淋巴道，從而形成遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，但基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的降解是其中的必要條件，而MMP-2、MMP-9是一類鋅離子依賴性激酶，幾乎能降解細(xì)胞外基質(zhì)的所有成分及基底膜，從而為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和新生血管的延伸創(chuàng)造必要條件〔3〕，因而成為腫瘤治療的靶點(diǎn)。因?yàn)楹戆┑呐R床分期是制定臨床決策的主要因素，如果臨床分期錯(cuò)誤，特別是分期低估可造成嚴(yán)重后果〔4〕。所以，準(zhǔn)確的臨床分期及選擇合理的治療顯得尤為重要，MMPs含量檢測(cè)可作為臨床分期的參考指標(biāo)。

文獻(xiàn)〔5〕報(bào)道，腫瘤組織類型和分化程度決定腫瘤行為及預(yù)后的關(guān)鍵因素。因此，掌握喉癌組織病理學(xué)和分子生物學(xué)特征，將有助于選擇早期篩查腫瘤標(biāo)志物和有針對(duì)性的治療方案尤顯重要。

總之，MMP-2、MMP-9含量變化與喉癌臨床分期及病理分級(jí)有密切關(guān)系，臨床分期及病理分級(jí)越高，表明腫瘤浸潤范圍擴(kuò)大，而MMPs活性也隨之升高，可準(zhǔn)確反映喉癌的發(fā)生、發(fā)展情況，動(dòng)態(tài)檢測(cè)其含量對(duì)喉癌的預(yù)后判斷有一定臨床意義。

4 參考文獻(xiàn)

1李萌碩，陳俊輝.外周血管表達(dá)譜在腫瘤診斷中的應(yīng)用〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志，2013；40(10)：745-8.

2Langenskiold M,Holmdahl L，F(xiàn)alk P,etal.Increased plsama MMP-2 protein expression in lymph node-positive patients with colorectal cancer〔J〕.Int J Colorectal Dis，2005;20(3):245-52.

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4Perigny M,Bairati I,Harvey I,etal.Role of immunohistochemical overexpression of matrix metalloproteinases MMP-2 and MMP-11 in the prognosis of death by ovarian cancer〔J〕.Am J Clin Pathol,2008；129(2):226-31.

5El-Kenawy Ael-M,Lotfy M,El-Kott A,etal.Significance of matrix metalloproteinase 9 and CD34 expressions in esophageal carcinoma；correlation with DNA content〔J〕.J Clin Gastroenterol,2005;39(9)：791-4.