張煥鑫 張宏考 高宇勤 肖俊會(huì) 黃玉蘭

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院心血管內(nèi)科，湖北 十堰 442000)

擴(kuò)張型心肌病(DCM)目前尚無特效的治療方法和藥物〔1〕。本實(shí)驗(yàn)擬通過觀察炙甘草湯對DCM SD大鼠治療前后心臟超聲心動(dòng)圖改變及心肌組織病理學(xué)的改變，初步探討生脈保元湯對DCM大鼠的治療作用及可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 SPF級(jí)成年雄性SD大鼠40只，體重(220±31.4)g，由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物在屏障系統(tǒng)環(huán)境下飼以專用飼料 (購自湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)和滅菌水分籠飼養(yǎng)。

1.2試劑和藥品 大鼠血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、腦鈉肽(BNP)ELISA試劑盒由上海生科生物科技有限公司提供；10%水合氯醛,蘇木素、0.5%水溶型伊紅液、0.5%鹽酸酒精分化液、10%甲醛(均由湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院臨床研究所提供)；生脈保元湯(人參、麥冬、五味子、黃芪、甘草)由湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院制劑室制備，每毫升含生藥量1 g，高壓滅菌后，保存于4℃冰箱。多柔比星粉劑由浙江海正藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

1.3主要儀器 德國Leica病理切片機(jī)、美國GE-VIVID7型彩色多普勒(超聲探頭頻率7MHz)、奧地利酶標(biāo)儀檢、國產(chǎn)400倍普通光鏡及無菌操作臺(tái)。

1.4方法

1.4.1動(dòng)物分組與模型復(fù)制 40只大鼠隨機(jī)分為治療組(n=20)和對照組(n=20)，依照文獻(xiàn)報(bào)道〔2〕，多柔比星用生理鹽水配成1 mg/ml,分別給予腹腔注射,每周2 mg/kg，連續(xù)8 w，復(fù)制DCM模型。經(jīng)超聲心動(dòng)圖檢測左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)，心率(HR)明顯降低，心室的收縮功能與心腔的擴(kuò)張程度負(fù)相關(guān)，改變符合DCM的影像學(xué)改變，造模過程中共有7只大鼠死亡，其中治療組4只，對照組3只，可能與多柔比星心臟毒性及DCM所致心力衰竭有關(guān)。

1.4.2給藥方案 各組均于實(shí)驗(yàn)第9周開始灌胃。根據(jù)公式換算(成人用量×0.018×5=大鼠用量g/kg)，結(jié)合前期研究結(jié)果〔3〕，治療組給予生脈保元湯(40 g/kg)，2次/d、0.2 ml/次灌胃，對照組按同法灌以同體積的蒸餾水，療程4 w。

1.4.3指標(biāo)觀測 大鼠在用藥前及第9周時(shí)用10%水合氯醛麻醉后,胸骨旁左心室長軸超聲心動(dòng)圖測量左室收縮末期容積(LVES)、舒張末期容積(LVED)、左室收縮末期內(nèi)徑(SD)、左室舒張末期內(nèi)徑(DD)、左室內(nèi)徑縮短率(FS)、LVEF，并測量體重(BW)、HR。各組大鼠麻醉后從球后靜脈取血3 ml，分別處理后用ELISA測定AngⅡ、BNP，處死后剪開左心室取心肌組織，10%甲醛固定后石蠟包埋，5 μm切片HE染色，光鏡下觀察心肌組織病理形態(tài)變化。

2 結(jié) 果

2.1一般情況 治療過程中，對照組大鼠不同程度出現(xiàn)精神不振、厭食、活動(dòng)減少、肢體水腫、體重下降、腹瀉等表現(xiàn)，并陸續(xù)有8只大鼠死亡，死亡率47.06%；治療組大鼠以上癥狀較輕，部分動(dòng)物少動(dòng)，先后有3只動(dòng)物死亡，死亡率18.75%。死亡大鼠行尸體解剖發(fā)現(xiàn)，存在肝大、腹水、胸水等現(xiàn)象。

2.2兩組動(dòng)物BW、HR及超聲心動(dòng)圖檢測結(jié)果 與對照組相比，治療組BW、LVEF顯著增加(P<0.01)；HR、LVES顯著降低(P<0.01)，LVED、SD、DD、FS 明顯下降(P<0.05)。見表1。彩超發(fā)現(xiàn)對照組有兩只動(dòng)物出現(xiàn)少-中量心包積液，1只動(dòng)物出現(xiàn)大量心包積液，而治療組大鼠則未見心包積液。

2.3兩組動(dòng)物的血漿AngⅡ、BNP濃度檢測結(jié)果 治療組大鼠血漿AngⅡ、BNP濃度明顯低于對照組(P<0.05，P<0.01)。見表2。

2.4兩組動(dòng)物心肌組織的病理改變 HE染色見對照組大鼠心肌細(xì)胞有不同程度的顆粒變性，部分空泡樣變性，細(xì)胞質(zhì)自溶，組織間質(zhì)水腫，細(xì)胞間隙增寬，心肌膠原纖維增生明顯。治療組大鼠心肌病變較對照組明顯減輕，心肌細(xì)胞數(shù)目明顯增多，可見顆粒變性和空泡樣變性，細(xì)胞間隙相對正常，心肌間膠原沉積少于對照組。見圖1。

表1 兩組動(dòng)物BW、HR及心臟彩超檢測結(jié)果

表2 兩組動(dòng)物的血漿AngⅡ、BNP濃度檢測結(jié)果

對照組

治療組

3 討 論

中醫(yī)認(rèn)為，DCM屬中醫(yī)“喘證”、“水腫”、“心悸”等范疇，多從陽虛水泛立論，認(rèn)為基本病機(jī)是由于陽氣虛衰，溫煦失職，導(dǎo)致陰寒內(nèi)盛，水濕、瘀血內(nèi)停，形成本虛標(biāo)實(shí)之證。DCM具有喘、悸 、腫 、瘀、虛之臨床特點(diǎn)，其病位在心，涉及肺、腎、脾、肝及三焦諸臟腑，尤其與心、腎、肺關(guān)系密切。心腎虛衰，臟腑失調(diào)是本病的病理基礎(chǔ)，三焦氣化不利，水濕內(nèi)停，瘀血阻滯，水火逆亂，熱毒浸淫是其中心病理環(huán)節(jié)。本虛標(biāo)實(shí)，寒熱錯(cuò)雜是其病機(jī)特點(diǎn)。

生脈保元湯為李杲《內(nèi)外傷辨惑論》之方，由生麥飲(人參、麥冬、五味子)加黃芪、甘草五味組成，主治暑熱汗多，耗氣傷陰及久咳肺虛，氣陰兩傷之證，具有益氣生津、養(yǎng)陰安神之功效。方中人參大補(bǔ)元?dú)?，是為君藥；黃芪補(bǔ)氣固表、利水退腫，麥冬養(yǎng)陰生津、強(qiáng)心利尿，二者共為臣藥；五味子斂陰、滋腎、生津，可收斂耗散之心氣，甘草益氣、強(qiáng)心、復(fù)脈，共為佐使之品。諸藥合用，共奏調(diào)益氣養(yǎng)陰、生津安神、調(diào)節(jié)免疫之功。

腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的激活是造成心力衰竭惡性循環(huán)的主要原因之一〔4〕。心力衰竭時(shí)超生理濃度的AngⅡ通過交感神經(jīng)系統(tǒng)引起兒茶酚胺釋放，使心肌細(xì)胞肥大，促進(jìn)心室擴(kuò)大和重建，加重心力衰竭〔5〕。BNP釋放量與心室容積擴(kuò)大和壓力負(fù)荷過重有關(guān)，具有利尿利鈉效應(yīng)，可舒張血管，抑制醛固酮分泌和腎素活性〔6〕。BNP與 CHF的嚴(yán)重程度相關(guān)，BNP水平在一定程度上可以及時(shí)反映 CHF病程中心臟的結(jié)構(gòu)異常，治療降低了BNP水平可以認(rèn)為是阻止了DCM 的進(jìn)展，逆轉(zhuǎn)了心肌重構(gòu)〔7〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，多柔比星可導(dǎo)致DCM大鼠血清BNP、AngⅡ水平明顯升高，說明血清BNP、AngⅡ水平與DCM大鼠心力衰竭密切相關(guān)，而經(jīng)生脈保元湯干預(yù)后，BNP、AngⅡ水平明顯下降，且心率明顯下降，左室收縮末期容積明顯降低，心肌膠原沉積減少，提示生脈保元湯可通過抑制AngⅡ、BNP的生成，抑制RAAS系統(tǒng)的過度激活，延緩心肌重構(gòu)，從而達(dá)到改善心功能、減輕DCM大鼠的心肌病理改變，降低動(dòng)物死亡率。因此，本研究結(jié)果為進(jìn)一步評價(jià)生脈保元湯臨床治療DCM提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。但生脈保元湯能否常規(guī)用于臨床DCM患者、改善病人的心功能、提高生存質(zhì)量，以及治療的最佳藥物劑量尚待更進(jìn)一步地深入研究。

4 參考文獻(xiàn)

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