王虎平 邢喜平 張?chǎng)┚?吳紅彥

(甘肅中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 甘肅省中藥新產(chǎn)品創(chuàng)新工程實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000)

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，阿爾茨海默病(AD)發(fā)病可能與基因突變、神經(jīng)遞質(zhì)改變、免疫功能紊亂、神經(jīng)生長(zhǎng)因子缺失等諸多因素有關(guān)，相應(yīng)的治療多為膽堿酯酶抑制劑、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、興奮性氨基酸等對(duì)癥給藥，不能從根本上解除患者的病苦。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，AD總屬本虛標(biāo)實(shí)，虛責(zé)之于年老體弱、精虧髓空、腦失所養(yǎng)；實(shí)責(zé)之于氣滯血瘀、痰濁內(nèi)阻、蒙蔽清竅，多以補(bǔ)益心腎，益髓填精，祛濁化痰，開竅醒神為治。本課題組認(rèn)為，肝主疏泄而暢情志，又主藏血而養(yǎng)神魂，亦主筋而司運(yùn)動(dòng)，這恰恰與AD情志及行為的失常密切相關(guān)，因此，我們提出了從肝論治AD的科研假說并以調(diào)肝名方逍遙散開展相關(guān)干預(yù)實(shí)驗(yàn)研究并取得了一定的進(jìn)展〔1～4〕。本研究以逍遙散干預(yù)氫溴酸東莨菪堿致AD小鼠模型，探討逍遙散防治AD的作用及其機(jī)制。

1 材料與方法

1.1主要材料 Y型水迷宮由甘肅中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心自制；逍遙散組成各生藥均購于甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院；氫溴酸東莨菪堿注射液由上海禾豐制藥有限公司提供，批號(hào)：100101；膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)試劑盒、乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒、單胺氧化酶(MAO)試劑盒及考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)試盒均為南京建成生物化學(xué)試劑有限公司提供，批號(hào)：20100522。SPF級(jí)KM小鼠50只，體重(20±2)g，雌、雄各半，由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK(甘)2004-0006-0000994。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物分組與給藥 SPF級(jí)KM小鼠50只，隨機(jī)分為空白組、模型組、逍遙散低、中、高劑量組，每組10只?？瞻捉M與模型組小鼠每天灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g，逍遙散低、中、高劑量組小鼠每天灌胃對(duì)應(yīng)藥物水煎液0.2 ml/10 g。逍遙散方中各藥的劑量均按照2005版《中華人民共和國藥典》中逍遙丸〔5〕劑量換算得到，以藥典中逍遙散原方劑量作為本實(shí)驗(yàn)中劑量，原方1/2劑量為低劑量，原方2倍劑量為高劑量。以人與小鼠體表面積體重比換算得到實(shí)驗(yàn)劑量，即逍遙散低、中、高劑量組小鼠每天灌胃生藥量分別為1.243，2.485，4.970 g/kg。連續(xù)灌胃給藥10 d。

1.2.2模型復(fù)制 給藥第6、8、10天，除空白組小鼠于灌胃1 h后腹腔注射生理鹽水0.2 ml/10 g外，其余組小鼠分別于灌胃1 h后腹腔注射氫溴酸東莨菪堿0.02 mg/10 g復(fù)制AD模型。

1.2.3Y型水迷宮實(shí)驗(yàn) 給藥第6、8天，各組小鼠分別于腹腔注射20 min后使用Y型水迷宮進(jìn)行學(xué)習(xí)能力訓(xùn)練；給藥第10天，各組小鼠分別于腹腔注射20 min后進(jìn)行記憶能力測(cè)試。水迷宮實(shí)驗(yàn)中，小鼠從入水臂直接游至安全臂停靠臺(tái)為正確，進(jìn)入另一臂為錯(cuò)誤。學(xué)習(xí)能力以達(dá)到連續(xù)9次正確所需的次數(shù)為指標(biāo)，超過30次計(jì)為30，每次達(dá)到安全臺(tái)所需的時(shí)間為潛伏時(shí)間；記憶能力以15次中正確的次數(shù)為指標(biāo)，并記錄每次的潛伏時(shí)間〔6〕。

1.2.4腦組織勻漿AchE、ChAT及MAO活性的測(cè)定 第10天記憶能力測(cè)試結(jié)束后，處死動(dòng)物，迅速取出腦組織，以生理鹽水制成10%的腦組織勻漿，用低溫離心機(jī)3 000 r/min離心15 min，吸取上清液，按試劑盒要求測(cè)定小鼠腦組織勻漿ChAT、AchE及MAO活性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1逍遙散對(duì)AD模型小鼠學(xué)習(xí)能力及學(xué)習(xí)潛伏時(shí)間的影響 與空白組相比，模型組小鼠學(xué)習(xí)能力低下、潛伏時(shí)間較長(zhǎng)(P<0.01)。與模型組相比，逍遙散各劑量組均能提高小鼠學(xué)習(xí)能力、降低其潛伏時(shí)間(P<0.01或P<0.05)，但以高劑量組最為明顯，與低、中劑量組相比有顯著性差異(P<0.05)。見表1。

2.2逍遙散對(duì)AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時(shí)間的影響 與空白組相比，模型組小鼠記憶能力低下、潛伏時(shí)間較長(zhǎng)(P<0.01)。與模型組相比，逍遙散各劑量組均能提高小鼠記憶能力、降低潛伏時(shí)間(P<0.01或P<0.05)，在數(shù)值上以高劑量組最明顯，但與低、中劑量組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表1 逍遙散對(duì)AD模型小鼠學(xué)習(xí)能力及學(xué)習(xí)潛伏時(shí)間的影響

2.3逍遙散對(duì)AD模型小鼠腦組織ChAT、AchE及MAO活性的影響 與空白組相比，模型組小鼠腦組織ChAT活性降低，AchE及MAO活性增高(P<0.01)。與模型組相比，逍遙散各劑量組均能提高小鼠腦組織ChAT活性、降低AchE及MAO活性(P<0.01或P<0.05)，但以高劑量組最為明顯，與低、中劑量組相比有顯著性差異(P<0.05)。見表3。

表2 逍遙散對(duì)AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時(shí)間的影響

表3 逍遙散對(duì)AD模型小鼠腦組織勻漿ChAT 、AchE及MAO活性的影響

3 討 論

經(jīng)云：“肝者，將軍之官，謀慮出焉” (《素問·靈蘭秘典論》)，“肝者，罷極之本，魂之居也” (《素問·六節(jié)藏象論》)，性喜調(diào)達(dá)主疏泄，藏血而主魂，體陰而用陽，為神魂之居，其華在筋，主司運(yùn)動(dòng)，為行為之主，這恰恰與AD的主要表現(xiàn)即精神與行為失常密切相關(guān)。據(jù)此，我們提出了AD從肝論治的假說并確立了以“調(diào)肝”為中心的治法開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。

逍遙散以調(diào)肝為核心，以疏肝、養(yǎng)血、健脾為基礎(chǔ)。方中柴胡、薄荷辛散行走，疏肝理氣，調(diào)氣機(jī)，暢情志，啟清竅，醒腦神，悅神魂，怡精神；當(dāng)歸、白芍陰柔滋補(bǔ)，益陰養(yǎng)血，補(bǔ)陰血，藏肝魂，柔肝體，舒筋脈，又可補(bǔ)肝體，助肝用，協(xié)柴、薄疏肝暢情，還可養(yǎng)血補(bǔ)精，填髓益智；白術(shù)、茯苓、煨姜、甘草直入中焦，投脾所好，去脾所惡，健運(yùn)脾土，陪補(bǔ)后天之本，滋生氣血之源，既可補(bǔ)陰血，強(qiáng)肝體，又可健中土，抑肝木，還可泄?jié)岫?，解蒙蔽。全方雖由疏肝、養(yǎng)血、健脾配伍組成，但三組密切協(xié)作，互為促進(jìn)，氣血同調(diào)，體用并治，補(bǔ)瀉兼施。如此，肝疏氣行則情暢神安，血充精足則筋柔神怡，邪去蔽解則腦醒神清，具有很好的防治AD的理論基礎(chǔ)。藥理研究表明，逍遙散具有抗自由基氧化、營(yíng)養(yǎng)保護(hù)神經(jīng)元、調(diào)節(jié)免疫、提高多巴胺等神經(jīng)受體含量、抗焦慮及抗抑郁、雌激素樣等作用〔7～12〕，體現(xiàn)了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療AD的多種手段，具有防治AD的藥理學(xué)基礎(chǔ)。本研究表明，逍遙散可提高AD模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力，降低潛伏時(shí)間，可提高腦組織勻漿ChAT活性，降低AchE及MAO活性，能較好改善AD模型小鼠學(xué)習(xí)記憶能力及神經(jīng)遞質(zhì)活性，對(duì)AD具有較好的防治作用。至于其深層機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

4 參考文獻(xiàn)

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