才保加 祁玉娟 周 為 王曉龍

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸外科，青海 西寧 810001)

腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中基因和蛋白表達(dá)的失調(diào)對(duì)腫瘤的進(jìn)展有重要作用。增殖活躍是腫瘤生長(zhǎng)和侵襲性強(qiáng)的重要標(biāo)志〔1〕。TPX2是一種微管相關(guān)蛋白，對(duì)于有絲分裂紡錘體的穩(wěn)定有重要作用〔2〕。相關(guān)研究認(rèn)為其高表達(dá)可能是腫瘤進(jìn)展的重要因素〔3〕。PTEN是一種腫瘤抑制基因，定位于人染色體10q23。PTEN編碼的磷酸酶可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期和凋亡進(jìn)程〔4〕。Ki67是與細(xì)胞周期密切相關(guān)的細(xì)胞增殖標(biāo)志物，G1、S、G2和M期有表達(dá)，G0期無(wú)表達(dá)〔5〕。研究認(rèn)為Ki67表達(dá)的增殖指數(shù)與許多腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)〔6〕。本文關(guān)注結(jié)腸腺癌中TPX2、PTEN和Ki67蛋白的表達(dá)特征、相關(guān)性及臨床意義。

1 材料和方法

1.1材料 選取2010年1月至2013年6月在我院行結(jié)腸腺癌根治術(shù)的患者122例作為觀察組，納入均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)中關(guān)于結(jié)腸腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中男62例，女60例，年齡50～70〔平均(65.7±7.6)〕歲。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76例。選擇本組中部分病例切端經(jīng)病理證實(shí)為正常的結(jié)腸黏膜組織73例作為對(duì)照組，其中男43例，女30例，年齡53～69〔平均(65.1±7.0)〕歲。兩組一般臨床資料無(wú)明顯差別(P>0.05)，具有可比性。

1.2TPX2、PTEN和Ki67蛋白的檢測(cè) TPX2、PTEN和Ki67蛋白濃縮液的試劑盒均購(gòu)自基因科技(上海)有限公司。按不同比例進(jìn)行稀釋后先行預(yù)實(shí)驗(yàn)，并由病理醫(yī)師判斷，選取最理想的配比濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。TPX2、PTEN和Ki67蛋白的檢測(cè)應(yīng)用免疫組化SP法，均采用手工染色法，DAB染色，操作均由同一病理技師完成，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，嚴(yán)格質(zhì)量控制，減少人為誤差。

1.3結(jié)果判定方法 TPX2的陽(yáng)性部位為細(xì)胞核，PTEN的陽(yáng)性部位為細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核，Ki67的陽(yáng)性部位為細(xì)胞核，均為出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞，選擇腫瘤細(xì)胞集中區(qū)域的10個(gè)400倍視野進(jìn)行計(jì)數(shù)后合并計(jì)算陽(yáng)性率。以陽(yáng)性細(xì)胞≥25%為陽(yáng)性，以<25%為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2或相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1TPX2、PTEN和Ki67在兩組中表達(dá)陽(yáng)性率的比較 觀察組中TPX2和Ki67表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組，PTEN表達(dá)的陽(yáng)性率明顯低于對(duì)照組(P<0.01)。見(jiàn)表1。

2.2觀察組中TPX2、PTEN和Ki67的表達(dá)在不同臨床病理特征中的比較 觀察組中TPX2、PTEN和Ki67表達(dá)的陽(yáng)性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)深度和臨床分期密切相關(guān)。見(jiàn)表2。

表1 兩組TPX2、PTEN和Ki67表達(dá)陽(yáng)性率比較〔n(%)〕

表2 觀察組中TPX2、PTEN和Ki67的陽(yáng)性表達(dá)在不同臨床病理特征中的關(guān)系〔n(%)〕

2.3觀察組中TPX2、PTEN和Ki67表達(dá)的相關(guān)性 觀察組中TPX2和Ki67(r=0.45，P=0.043 2)的表達(dá)呈正相關(guān)，而PTEN和Ki67(r=-0.48，P=0.030 4)的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

3 討 論

結(jié)腸腺癌病變發(fā)展是高增殖的過(guò)程，其中伴有異常增生、分化障礙等生物學(xué)行為過(guò)程。在此過(guò)程中，與增殖相關(guān)的蛋白常對(duì)病變發(fā)展有重要影響。TPX2是一個(gè)分子量是100 kD的核增殖相關(guān)蛋白，其基因定位于人染色體20q11.2，其表達(dá)受細(xì)胞周期的調(diào)控，有研究顯示TPX2只在G1～S交界期中表達(dá)，而當(dāng)細(xì)胞分裂完成后就消失〔7〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為在S期和G2期，人TPX2分布在細(xì)胞核，而在分裂期TPX2的表達(dá)與有絲分裂的紡錘體分布密切相關(guān)，此時(shí)TPX2的靶向作用附著于紡錘體的微管，有效地保證了正常的紡錘體的極性〔8，9〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為T(mén)PX2還可能對(duì)核因子、增殖細(xì)胞核抗原有重要的調(diào)控作用〔10，11〕。PTEN對(duì)腫瘤的發(fā)生具有明顯的抑制作用，PTEN也具有磷酸酯酶活性〔12〕，其不僅能通過(guò)脫磷酸化的途徑對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)進(jìn)行影響，還可以對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖和黏附起到明顯的作用〔13〕。也有觀點(diǎn)認(rèn)為PTEN可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，有效抑制細(xì)胞的失控性增生〔14〕。近來(lái)的多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，在人類多種腫瘤和遺傳性腫瘤易感綜合征疾病中存在PTEN的缺失和突變，在不同腫瘤中PTEN的表達(dá)與病人的預(yù)后有一定的相關(guān)性〔15，16〕。Ki67存在于細(xì)胞周期的G1、S、G2和M期，其蛋白表達(dá)在細(xì)胞核中，其功能與細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)〔17〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示TPX2和Ki67高表達(dá)、PTEN低表達(dá)是促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的重要因素。Ki67作為標(biāo)記腫瘤增殖的重要蛋白，高表達(dá)時(shí)提示腫瘤處于進(jìn)展期，并具有高增殖的特征。而TPX2作為微管相關(guān)蛋白，是微管組裝、紡錘體形成的關(guān)鍵蛋白，TPX2高表達(dá)使腫瘤的惡性生物學(xué)行為和促使細(xì)胞周期失調(diào)的功能明顯增強(qiáng)，加速腫瘤的進(jìn)展。PTEN是腫瘤抑制蛋白，其表達(dá)丟失是腫瘤進(jìn)展的重要因素。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示3種蛋白異常表達(dá)可以加速腫瘤的進(jìn)展。由于以上因素均為判斷腫瘤生物學(xué)行為、惡性程度及預(yù)后的重要指標(biāo)，因此聯(lián)合檢測(cè)TPX2、PTEN和KI67的表達(dá)可以在一定程度上反映腫瘤的預(yù)后。TPX2的作用是通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖起作用的，PTEN抑癌作用是通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞增殖發(fā)揮其生物學(xué)功能的。

總之，結(jié)腸腺癌中TPX2和Ki67高表達(dá)、PTEN低表達(dá)時(shí)對(duì)病變的發(fā)生和進(jìn)展均具有重要促進(jìn)作用。對(duì)增殖的影響可能是TPX2和PTEN作用的主要方式。后續(xù)研究可以關(guān)注TPX2、PTEN和Ki67對(duì)結(jié)腸腺癌的預(yù)后判斷的作用，不僅可以為臨床提供有效依據(jù)，還可能成為治療的靶點(diǎn)。

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