張 彤

(南陽(yáng)醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校,河南 南陽(yáng) 473061)

抑郁癥是以“三低一少”，即情感低落、思維遲緩、言語(yǔ)動(dòng)作減少、遲緩為主要癥狀的綜合征候群。近年來(lái)由于社會(huì)各方面壓力如空巢家庭、提早退休等因素的影響，其發(fā)病年齡多見(jiàn)于老年患者〔1〕。抑郁癥患者邊緣系統(tǒng)部分腦區(qū)出現(xiàn)包括結(jié)構(gòu)改變、功能受損等神經(jīng)可塑性變化，而已有的抗抑郁藥如氟西汀的抗抑郁效應(yīng)可通過(guò)增加海馬新生神經(jīng)元的存活和數(shù)量、提高神經(jīng)再生而實(shí)現(xiàn)〔2〕。本研究探討老年抑郁癥大鼠神經(jīng)可塑性變化以及溫膽湯對(duì)其影響效果。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物及分組 體質(zhì)量160～220 g的清潔級(jí)SD雄性大鼠〔動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(津)2010-0002〕90只，20月齡，由南陽(yáng)市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將大鼠隨機(jī)分成空白組、模型組、中藥組，每組30只。每日早晨8： 00開(kāi)始，中藥組予胃飼溫膽湯1.8 mg/kg，模型組、空白組均胃飼生理鹽水2 ml/kg，連續(xù)灌胃21 d。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

1.2.1實(shí)驗(yàn)儀器 H-7650型透射電子顯微鏡(日本日立生產(chǎn))；Q550CW圖形信號(hào)采集分析系統(tǒng)(德國(guó)Leica公司生產(chǎn))。Image-Pro Plus多功能真彩色細(xì)胞圖像分析管理系統(tǒng)(美國(guó)Media Cybernetics 公司生產(chǎn))。

1.2.2實(shí)驗(yàn)試劑 BrdU、抗BrdU抗體、多聚賴氨酸均購(gòu)自sigma公司；一抗：兔Anti-NeuN/Cy3(貨號(hào)：bs-1613R-Cy3)、鼠Anti-BrdU/FITC 熒光素(貨號(hào)：bs-0917M-FITC)均購(gòu)自北京博奧森公司。2.5%戊二醛溶液、鋨酸、丙酮、二甲砷酸鈉緩沖液均由中國(guó)中醫(yī)研究院中藥研究所提供。

1.3孤養(yǎng)結(jié)合慢性應(yīng)激抑郁模型 參照文獻(xiàn)〔3〕中的相關(guān)方法進(jìn)行。

1.4檢測(cè)指標(biāo)與處理方法 海馬區(qū)突觸相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)：采用常規(guī)透射電鏡進(jìn)行標(biāo)本制作，利用Q550CW圖形信號(hào)采集分析系統(tǒng)對(duì)突觸照片進(jìn)行分析，測(cè)量活性區(qū)長(zhǎng)度、突觸前后膜致密物質(zhì)的厚度及突觸間隙寬度。熒光雙標(biāo)細(xì)胞表達(dá)變化：取BrdU標(biāo)記大鼠，根據(jù)操作步驟依次斷頭、取腦組織，依據(jù)試劑盒說(shuō)明依次進(jìn)行，而后用多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU陽(yáng)性細(xì)胞。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS12.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

實(shí)驗(yàn)第16天，模型組死亡1只大鼠，經(jīng)解剖未發(fā)現(xiàn)，死亡原因不明。

2.1各組大鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)的體視學(xué)變化 21 d，各組出現(xiàn)較大差異，與空白組比較，模型組的突觸活性區(qū)長(zhǎng)度、突觸后致密物質(zhì)厚度均明顯減少(P<0.01)，突觸間隙寬度增加(P<0.01)；與模型組比較，中藥組突觸活性區(qū)長(zhǎng)度、突觸后致密物質(zhì)厚度均增加明顯，突觸間隙寬度明顯減少(P<0.01或P<0.05)。見(jiàn)表1～表3。

2.3各組大鼠海馬CA3區(qū)熒光雙標(biāo)細(xì)胞表達(dá)變化 21 d時(shí)，各組之間出現(xiàn)較大差異：與空白組比較，模型組的NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均明顯減少(P<0.01)；與模型組比較，中藥組增加明顯(P<0.05)。見(jiàn)表4，表5。

表1 抑郁形成不同時(shí)間段各組大鼠突觸活性區(qū)長(zhǎng)度比較±s，nm)

表2 各組大鼠在抑郁形成不同時(shí)間段突觸后致密物質(zhì)厚度比較±s，nm)

表3 各組大鼠在抑郁形成不同時(shí)間段突觸間隙寬度比較±s，nm)

表4 各組大鼠抑郁形成不同時(shí)間段NeuN/BrdU雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較±s，n/mm2)

表5 各組大鼠抑郁形成不同時(shí)間段β-tubulinⅢ/BrdU雙標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比較±s，%)

3 討 論

近年來(lái)經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)25%的老年人有程度不同的精神障礙，其中65歲以上老年人情緒障礙發(fā)病率約占12%～25%〔4〕?？梢?jiàn)，探索老年抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)而尋找有效治療藥物，是現(xiàn)今需要解決的問(wèn)題。

海馬CA3區(qū)上的錐體神經(jīng)元對(duì)應(yīng)激和腎上腺糖皮質(zhì)激素非常敏感〔3〕。作為與情緒、認(rèn)知、行為密切相關(guān)的重要腦區(qū)，慢性應(yīng)激均引起海馬CA3區(qū)神經(jīng)元萎縮〔5〕，而突觸結(jié)構(gòu)是保證神經(jīng)元獲得、傳遞、加工和貯存信息，并使上述得以順利進(jìn)行的重要基礎(chǔ)，這與突觸是神經(jīng)元之間結(jié)構(gòu)和功能的接觸點(diǎn)密切相關(guān)〔6〕。大多學(xué)者認(rèn)為神經(jīng)傳導(dǎo)和學(xué)習(xí)記憶過(guò)程的影響因素為：突觸活性帶較長(zhǎng)，可增加突觸傳導(dǎo)過(guò)程中遞質(zhì)數(shù)量，以及囊泡的接觸面積，進(jìn)而提高神經(jīng)信息傳遞和學(xué)習(xí)記憶的有效性〔2〕。本研究結(jié)果提示，老年抑郁癥患者中存在海馬神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)損傷、神經(jīng)元再生減少等可塑性變化，溫膽湯可通過(guò)逆轉(zhuǎn)上述變化而發(fā)揮其抗抑郁效應(yīng)。

4 參考文獻(xiàn)

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