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1.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 亳州 236800；2.畢節(jié)學(xué)院，貴州 畢節(jié) 551700

制何首烏顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王慶1薛天樂1*葉敏2

1.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 亳州 236800；2.畢節(jié)學(xué)院，貴州 畢節(jié) 551700

目的對制何首烏顆粒進(jìn)行質(zhì)量控制考察。方法采用TLC法對處方中的制何首烏進(jìn)行定性鑒別, 用HPLC法測定制何首烏中二苯乙烯苷的含量。結(jié)果在TLC 圖譜中能檢出制何首烏，二苯乙烯苷在0.0296g/L-0.148g/L的范圍內(nèi)線性良好(r=0.9942), 平均加樣回收率為99.63%，RSD 為1.1%。結(jié)論所建立方法簡便可行, 重現(xiàn)性好, 可用于制何首烏顆粒的質(zhì)量控制。

制何首烏顆粒； 薄層色譜法； 二苯乙烯苷； 高效液相色譜法

制何首烏為何首烏(Polygonum multiflorum Thunb.)的炮制加工品，具有補(bǔ)肝腎，益精血，烏須發(fā)，強(qiáng)筋骨，化濁降脂的作用[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明制何首烏及其所含的二苯乙烯苷具有提高免疫力、抗衰老、保肝及防治動(dòng)脈硬化等作用，臨床上主要用于防治高脂血癥、高血壓病、慢性氣管炎、糖尿病等疾病，療效顯著[2]。本實(shí)驗(yàn)采用醇提法提取制何首烏,配以適宜輔料制備制何首烏顆粒,并對其進(jìn)行質(zhì)量控制考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 WMK-02型電熱恒溫干燥箱，由天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)；HB-8數(shù)顯恒溫水浴鍋，由上海梅香儀器有限公司生產(chǎn)；SHZ-C型循環(huán)水式多用真空泵，由鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，由上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司生產(chǎn)；FA1004型電子分析天平，由上海分析儀器總廠生產(chǎn)；751G型紫外可見分光光度計(jì)，由上海分析儀器總廠生產(chǎn)；Waters2695型高效液相色譜儀，由美國Waters公司生產(chǎn)。

1.2 試藥 制何首烏，購自亳州和義堂中藥材公司；二苯乙烯苷標(biāo)準(zhǔn)品，由中國食品藥品檢定研究院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 制首烏顆粒劑的制備 取制何首烏藥材，粉碎，加7倍重量40%的乙醇，于70℃的條件下，提取2次，每次80分鐘，過濾，合并濾液，濾液濃縮至相對密度為1.30的稠膏。按照重量份配比，取制何首烏稠膏10份、甘露醇10份、乳糖29.9份、安賽蜜0.1份混合均勻，加入95%的乙醇制軟材，軟材用16目篩網(wǎng)篩制粒，干燥，10目和65目網(wǎng)篩篩選，分裝即得。

2.2 定性鑒別 取制何首烏顆粒劑適量置燒瓶中，加乙醇20ml,加熱回流50min,濾過,濾液濃縮至1ml作為供試品溶液；處方除制何首烏外按制何首烏顆粒劑的工藝制備顆粒,按上述供試品溶液制備方法,制備陰性對照液；取何首烏對照藥材適量,置燒瓶中，加乙醇20ml,加熱回流50min,制成溶液,濾過,濾液濃縮至1ml作為對照藥材溶液。分別取上述3種溶液各5μL,分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上,醋酸乙酯-丙酮-水-甲苯(6.5∶5.5∶1.2∶0.7)混合溶液的上層溶液為展開劑展開,取出,晾干。365nm紫外燈下檢識,供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)位置上出現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn),陰性對照無干擾，結(jié)果見圖1。

1 缺制何首烏藥材的陰性對照；2 制何首烏對照藥材；3 制何首烏顆粒

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：HypersilC18(150mm ×4.6mm)；流動(dòng)相：乙腈-水(25∶75)；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：320nm；進(jìn)樣量：10μl。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取二苯乙烯苷對照品5.92mg，置于10ml容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度，得對照品母液。精密吸取二苯乙烯苷對照品母液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，定容于10ml量瓶中，分別得到0.0296g/l、0.0592g/l、0.0888g/l、0.1184g/l、0.1480g/l的對照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱定何首烏顆粒劑1.16g，精密加入稀乙醇25ml，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

2.3.4 陰性對照品的制備 按制何首烏顆粒劑處方及制備工藝制備不含制何首烏的陰性樣品,精密稱取陰性對照品1.02克，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備陰性對照溶液。

2.3.5 干擾實(shí)驗(yàn) 分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液10μl在“2.3.1”項(xiàng)條件下記錄色譜峰的流出曲線,結(jié)果見圖2、3、4,陰性對照溶液在與二苯乙烯苷保留時(shí)間相同位置無色譜峰出現(xiàn),表明對測定結(jié)果無影響。

圖2 對照品溶液的高效液相色譜圖

圖3 供試品溶液的高效液相色譜圖

圖4 陰性對照溶液的高效液相色譜圖

2.3.6 線性關(guān)系考察 精密吸0.0296g/L、0.0592g/L、0.0888g/L、0.1184g/L、0.1480g/L的對照品溶液各10μl，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件測定。以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo),對照品溶液濃度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,結(jié)果如下。

圖5 對照品溶液的線性回歸

2.3.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取0.0888g/L的對照品溶10μl，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，結(jié)果見表1，RSD=1.1%(n=6),表明精密度良好。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)

2.3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取0.0592g/L的對照品溶液,分別于0、2、4、6、8、12、24、48 h按上述色譜條件進(jìn)樣10μl,測定峰面積。結(jié)果見表2，RSD=0.92%(n=8)，表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.9 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取同一批何首烏顆粒劑,按“2.3.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液,按上述色譜條件進(jìn)樣測算。結(jié)果見表3，RSD=1.7%，表明重現(xiàn)性良好。

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

表3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

2.3.10 加樣回收率試驗(yàn) 精取已知含量的樣品溶液6份,每份10ml,精密稱定,分別精密加入二苯乙烯苷對照品適量,照“2.3.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液,按上述色譜條件,計(jì)算加樣回收率,結(jié)果見表4，RSD%=1.1%(n=6)，表明加樣回收率良好。

2.3.11 樣品含量測定 按制首烏顆粒的處方及制備工藝制備5批制首烏顆粒，分別按“2.3.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，進(jìn)樣量10μl，按上述色譜條件,測算二苯乙烯苷的含量，結(jié)果見表5。

表4 加樣回收率試驗(yàn)

表5 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 筆者曾以二苯乙烯苷的含量為指標(biāo)對制何首烏進(jìn)行了提取方法的考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其最佳提取工藝為：7倍量40%的乙醇，70℃，提取2次，每次80min[3]。筆者也曾通過實(shí)驗(yàn)對制何首烏顆粒劑的輔料及其配比進(jìn)行篩選，結(jié)果表明：何首烏稠膏∶甘露醇∶乳糖∶安賽蜜=10份∶10份∶29.9份∶0.1份為最優(yōu)的輔料篩選方案。

3.2 采用上述方法對制何首烏顆粒劑進(jìn)行薄層色譜鑒別, 重現(xiàn)性好, 陰性實(shí)驗(yàn)無干擾, 經(jīng)多批樣品鑒別, 均能檢出與對照相同的斑點(diǎn)，可以作為制何首烏顆粒的定性鑒別標(biāo)準(zhǔn)。HPLC 法測定制何首烏顆粒中二苯乙烯苷的含量, 無雜質(zhì)峰干擾,方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好,可用于制何首烏顆粒劑的含量測定。

[1]國家藥典委員會. 中國藥典[S]. 中國醫(yī)藥科技出版社. 2010年版(一部).

[2]吳曉青. 何首烏化學(xué)成分與藥理活性的研究進(jìn)展[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥,2009(01):146-147.

[3]薛天樂，王慶，葉敏.何首烏二苯乙烯苷的提取工藝研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013，22(213)：39-41.

TheQualityStandardofPreparedfleeceflowerrootgranule

WANG Qing1XUE Tian-le1*YE Min2

1.Bozhou Vocational and Technical College,Anhui Province,Haozhou 236800,China;2.Bijie University,Guizhou Province,Bijie 551700,China

ObjectiveInvestigate Prepared fleeceflower root granule quality.MethodsPrepared fleeceflower root was identified by TLC, and content of 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside was determined by HPLC.ResultsPrepared fleeceflower root could be identified by TLC. 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside showed a good linear relationship at a range of 0.0296g/L-0.148g/L (r=0.9942), the average recovery was 99.63%, and RSD was 1.1%.ConclusionThe established method is simple, feasible and reproducible and it can be used as the quality standards for Prepared fleeceflower root granule.

Prepared fleeceflower root Granule; TLC; 2,3,5,4'-tetera-hydroxystilb-ene-2-O-β-D-glucoside; H PLC

安徽省教育廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目，編號：KJ2012B112。

王慶(1982-)，女，講師，安徽亳州人，碩士，研究方向: 天然藥物活性成分分離純化。

薛天樂(1981-)，男，講師，安徽亳州人，碩士， 研究方向: 中藥活性成分提取分離，E-mail: 84181713@ qq.com。

R284.1

A

1007-8517(2014)08-0027-03

2014.02.10)