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新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000

HPLC法測(cè)定維吾爾藥驅(qū)白艾力勒思亞散中沒(méi)食子酸的含量

沙吉旦·阿不來(lái)提熱孜萬(wàn)古麗·阿不都熱依木

新疆維吾爾自治區(qū)喀什地區(qū)藥品檢驗(yàn)所，新疆 喀什 844000

目的測(cè)定驅(qū)白艾力勒思亞散中沒(méi)食子酸的含量。方法采用高效液相色譜法，Pheomenex luna C18色譜柱(250(4.60mm，5μm)柱溫35℃，流動(dòng)相為甲醇- 0.2%磷酸(5∶95)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm，流速為1.0ml/min。結(jié)果沒(méi)食子酸在11.05～55.25 μg/ml間呈良好的線性關(guān)系，r=0.9994，平均回收率為105.15 %，RSD為1.6 %。結(jié)論該方法具有操作簡(jiǎn)單，靈敏，準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，分離效果顯著，可用于余甘子的含量測(cè)定和本產(chǎn)品質(zhì)量控制。

驅(qū)白艾力勒思亞散；HPLC；沒(méi)食子酸；含量測(cè)定

驅(qū)白艾力勒思亞散在維吾爾醫(yī)臨床上為常用藥，由西青果、余甘子、訶子肉、黑種草子、巴旦任等5味藥組成，具有熟化異常粘液質(zhì)，溫膚著色，養(yǎng)肝膽，振食欲，用于白熱斯(白癜風(fēng))和頭發(fā)胡須，食欲不振、胃痛、消化不良、神經(jīng)衰弱等治病，臨床療效好[1]。由于基礎(chǔ)研究薄弱，原標(biāo)準(zhǔn)僅有揮發(fā)油和沒(méi)食子酸的薄層鑒別，專(zhuān)屬性比較差，缺乏方中主要指標(biāo)成分的含量測(cè)定[2]。為了更好地控制驅(qū)白艾力勒思亞散的質(zhì)量，我們對(duì)驅(qū)白艾力勒思亞散的沒(méi)食子酸進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器及材料

1.1 儀器 日本島津LC20AT高效液相色譜儀；SPD-M20型檢測(cè)器SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器CTO-10ASVP型柱溫箱Pheomenex luna C18色譜柱(250×4.60mm，5μm)；BP-211D 1/10萬(wàn)電子分析天平(德國(guó)Sartorius)；Mettler AE-240型電子天平；超聲波溶解儀；超純水機(jī)。

1.2 材料 沒(méi)食子酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：MUST-11122813 )；驅(qū)白艾力勒思亞散(喀什地區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)分別為：201102024，201104018，201201020)。甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Pheomenex luna C18色譜柱(250(4.60mm，5μm)；柱溫35℃；流動(dòng)相為甲醇-0.2%磷酸溶液(5∶95)；檢測(cè)波長(zhǎng)為273nm；流速為1.0ml/min。分別取樣品溶液，陰性樣品溶液和對(duì)照品溶液各10μl按上述色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，繪制色譜圖，結(jié)果理論板數(shù)按沒(méi)食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 取沒(méi)食子酸對(duì)照品11.05mg，置100ml量瓶中，用50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，在精取1ml置10ml量瓶中用50%甲醇稀釋制成每1ml中含25μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品粉末(過(guò)三號(hào)篩)精密稱(chēng)定2g，置具錐形瓶中，精密加入50% 甲醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理30分鐘，冷卻，再稱(chēng)定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系的考察 精密量取沒(méi)食子酸對(duì)照溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml置10ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻注入液相色譜儀，測(cè)定。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=238803x-32570，R2=0.9997，沒(méi)食子酸在11.05～55.25 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 陰性試驗(yàn) 按樣品工藝制備缺余甘子的陰性對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法操作，進(jìn)樣10μl，結(jié)果在HPLC圖譜中，與余甘子相應(yīng)位置上沒(méi)有吸收峰，表明其他成分對(duì)余甘子測(cè)定干擾不明顯。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取同一對(duì)照品溶液( 25μg /ml)，重復(fù)進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣10μl，求得沒(méi)食子酸RSD= 0.15 % 。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(批號(hào)：201102024)樣品5份，按樣品處理方法平行提取并同法測(cè)定沒(méi)食子酸的含量，RSD= 0.18 %，表明重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性 取同一批號(hào)(批號(hào)201102024)在配制2、4、8、12、24h后進(jìn)行含量測(cè)定，重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算沒(méi)食子酸峰面積，RSD為0.14%，表明在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.9 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取供試品(批號(hào)：201102024)2g，制備供試品溶液，精取供試品溶液5.0ml，共7份，置10ml容量瓶中，第1，2份作為空白回收，其余5份分別加入濃度為0.1105mg /ml的沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液5.0ml，并進(jìn)樣10μl測(cè)定含量。結(jié)果沒(méi)食子酸平均回收率為105.15%，RSD=1.6%；

樣品的取樣量樣品中沒(méi)食子酸的含量(mg)沒(méi)食子酸對(duì)照品加入量(mg)實(shí)測(cè)總量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)2 22753 5510 55254 208104 652 23773 4990 55254 240105 912 23673 5570 55254 346102 55105 151 62 23523 4270 55254 254105 702 23523 5030 55254 336106 92

2.10 樣品的含量測(cè)定 分別精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μl，依擬定色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果批號(hào)為201102024，201104018，201201020的樣品中含量平均為3.438mg，RSD為0.5%。

3 討論

余甘子是大戟科植物干燥成熟果實(shí)，是維吾爾醫(yī)藥中一味重要的藥材。研究表明余甘子有免疫調(diào)節(jié)，解毒，防癌，抗誘變，抗致畸，抗炎，降血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化，抗氧化，抗衰老，保肝，抗?jié)?，抗腹瀉等作用。沒(méi)食子酸作為一種有效成分，生長(zhǎng)環(huán)境以及不同生長(zhǎng)階段對(duì)其含量有較大的影響。

用HPLC法測(cè)定驅(qū)白艾力勒思亞散中沒(méi)食子酸的含量，取得了較為滿(mǎn)意的結(jié)果，該方法靈明度、重現(xiàn)性較好，樣品處理簡(jiǎn)單，為余甘子的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了快捷、有效的檢測(cè)方法。本品為復(fù)方制劑，藥味復(fù)雜，本文供試品溶液的制備及波長(zhǎng)的選擇均參照《中國(guó)藥典》2010年版一部中“余甘子”含量測(cè)定項(xiàng)下的方法和條件。筆者結(jié)合給樣品的特點(diǎn)對(duì)供試品的提取條件進(jìn)行了考察，藥典規(guī)定要求含量測(cè)定用50%甲醇回流提取一個(gè)小時(shí)，為了省事省時(shí)間采用超聲處理方法。同一提取方法測(cè)定同一樣品，超聲提取時(shí)間分別為30，40，60min,結(jié)果含量基本相同，所以使用30min超聲提取。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(維吾爾藥分冊(cè))[S]．烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999，111．

ObjectiveTo determinate the contents of pyrogallic acid in Qubai Aililesiya powder.MethodAn HPLC method was used and Pheomenex luna C18 was selected (250×4.60mm×5micron), a column temperature was 35℃, methyl alcohol-0.2% Phosphoric acid (5∶95) were mobile phase, the detecting wavelength and velocity were 273 nm and 1.0ml/min respectively.ResultsThere were established a good linear relation between 11.05～55.25 μg/ml of pyrogallic acid, r= 0.9994, the average recovery was 105.15 %, RSD was 1.6 %.ConclusionThe methods had the advantages of simple and easy operation, sensitive and accurate and exhibited a good separation effect. The methods were can be used to determination of contents and quality control of the fructus phyllanthi.

Qubai Aililesiya powder; HPLC; pyrogallic acid Content determinatio

R29；R284.1

A

1007-8517(2014)08-0004-02

2014.02.10)