中國人民解放軍第三0三醫(yī)院藥劑科,廣西 南寧 530021

HPLC法測定跌打生骨膠囊中丹參酮ⅡA的含量

莫宣忠唐蓮芳質(zhì)吳龍云

中國人民解放軍第三0三醫(yī)院藥劑科,廣西 南寧 530021

目的建立用HPLC法測定跌打生骨膠囊中丹參酮ⅡA的含量及含量均勻度的方法。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6×250mm，5μm)，以甲醇-水(80∶20)為流動相；柱溫為室溫，流速為1ml/min，檢測波長為270nm，進(jìn)樣量為20μl。結(jié)果以丹參酮ⅡA對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，丹參酮ⅡA對照品峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程為：Y=2.78×106C-1.43×104r=1.0000，結(jié)果表明丹參酮ⅡA在進(jìn)樣量3.011～66.27μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)論該方法簡便、準(zhǔn)確，可用于跌打生骨膠囊中丹參酮ⅡA的質(zhì)量控制。

丹參酮ⅡA；跌打生骨膠囊；HPLC；含量測定

跌打生骨膠囊由衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑跌打生骨片改劑而成的膠囊，是由戰(zhàn)骨、腫節(jié)風(fēng)、自然銅、丹參、延胡索、牛膝、杜仲等七味藥組成的復(fù)方制劑，具有活血祛瘀、消腫止痛、強(qiáng)筋健骨的功效，用于骨折等癥。為控制跌打生骨膠囊質(zhì)量，保證藥品的安全、有效，本文采用HPLC法測定了丹參中主要成份丹參酮ⅡA的含量及含量均勻度。

1 儀器與試藥

LC-10AP型高效液相色譜儀(日本島津公司)；SPD-10Avp紫外-可見檢測器；LC-10ATVP7725(i)型手動進(jìn)樣器；威瑪龍色譜數(shù)據(jù)工作站；Aglient 8456紫外可見分光光度計；kh-250db型超聲處理器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

丹參酮ⅡA(批號：100047-201001，中國藥品生物制品檢定所)；跌打生骨膠囊(購自A廠，共10批)；甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)；流動相：甲醇-水(80∶20)；流速：1ml/min；檢測波長：270nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20μl，理論塔板數(shù)按丹參酮Ⅱ峰計算不低于5000。在上述色譜條件下，供試品中丹參酮Ⅱ能完全分離,對照品與陰性對照品溶液中沒有峰重疊。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取丹參酮ⅡA對照品10mg，置50ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得(每1ml中含丹參酮ⅡA16μg)。精密稱取綠原酸對照品10.48mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，作為對照品儲備溶液。精密量取該液5ml加甲醇稀釋至25ml，制成每1ml約含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 避光操作。取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.75g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，通過已處理好的中性氧化鋁柱(100～200目，3g，內(nèi)徑8～10mm)，再用甲醇20ml洗脫，合并洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并移至10ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

取本品10包，研細(xì)，精密稱定，稱取適量(約相當(dāng)0.28g)，置50ml的容量瓶中，加入甲醇約35ml，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測定，根據(jù)丹參酮ⅡA面積，以外標(biāo)法計算供試品中丹參酮ⅡA含量。

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱密量取丹參酮ⅡA對照品11.82mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精取1、2、5、2、3、4ml，分別加甲醇稀釋至50、50、50、10、10、10ml，分別精密吸取上述對照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，按擬定的條件測定。以丹參酮ⅡA對照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，丹參酮ⅡA對照品峰的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程為：Y=2.69×106C-1.43×104，r=1.0000，結(jié)果表明丹參酮ⅡA在進(jìn)樣量3.011～66.27μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液(批號20100601)，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定丹參酮ⅡA的峰面積。6次測定結(jié)果RSD為0.38%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液(批號：20100602)10μl，分別于0、4、8、12、24小時進(jìn)行測定，其峰面積RSD為0.45%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 陰性對照試驗(yàn) 按處方比例制成缺丹參的陰性樣品，按上述供試品制備方法制成缺丹參陰性溶液。按上述色譜條件進(jìn)行測定，結(jié)果在丹參酮ⅡA出峰位置無其它干擾峰，表明處方中其它成分對測定無干擾。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取樣品(批號：20100602)按樣品溶液制備項(xiàng)下的方法制備供試品溶液6份，進(jìn)樣20μl，按上述色譜條件測定，計算含量，求得丹參酮ⅡA平均含量為16.77 mg/g，RSD為1.35%(n=6)，表明重復(fù)性良好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收試驗(yàn)的方法。取20100601批供試品，研細(xì)，備用。精密稱取上述細(xì)粉約0.375g共9份，置具塞錐形瓶中，依次精密加入丹參酮ⅡA對照品溶液(24.03μg/ml)3、3、3、5、5、5、7、7、7ml，再依次精密加入甲醇的溶液27、27、27、25、25、25、23、23、23ml，密塞，稱定重量，照上述測定法測定丹參酮ⅡA的含量，計算回收率。由表1可得，本方法測定丹參酮ⅡA的含量準(zhǔn)確度高。

2.11 樣品中丹參酮ⅡA的含量測定 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液3批，按上述色譜條件測定，以外標(biāo)法計算，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量及含量均勻度測定結(jié)果

2.12 樣品中丹參酮ⅡA的含量均勻度測定 取樣品3批，按供試品溶液制備方法提取，以上述色譜條件依法測定丹參酮ⅡA含量均勻度，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 波長的選擇 依據(jù)《中國藥典》2010年版一部，丹參酮ⅡA在本品中270nm[1]有最大吸收波長；故選擇270nm作為本品的檢驗(yàn)波長。

3.2 流動相的選擇 本品為復(fù)方制劑，含有多種成分，雜質(zhì)組分較多，曾采用甲醇-水(85∶15)[2]作為流動相，但分離效果不理想，后采用甲醇-水(80∶20)作為流動相，結(jié)果表明丹參酮ⅡA的峰型和分離度較好。

[1]國家藥典委員會.中國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]譚生建，陳培讓，王建社，等.RP-HPLC法測定抗栓保心片中丹參酮ⅡA的含量[J].中國中藥雜志，1999，24(3)：154.

DetermthecontentanduniformityoftanshinoneuⅡAinDiedashengguCapsulesbyHPLC

MO Xuan-zhong, TANG Lian-fangzhi, WU Long-yun

ObjectiveTo establish method for determining the content and uniformity of tanshinonellⅡA in Dieda shenggu Capsules by HPLC.MethodsThe Agilent Eclipse XDB-C18(4.6×250mm, 5μm) was used and mobile phase was methanol: water (80∶20), and its temperature was used at room temperature, with the flow rate of 1.0ml/min and the wavelength of detection of 270 nm, and the injection amount of 20μl.ResultsTanshinonellⅡA maleat showed a good linear relationship in the range of 3.011-66.27μg/ml, Y=2.78×106C-1.43×104r=1.0000.ConclusionsThe method is simple, accurate, and can be used to determine the content assaying of TanshinonellⅡA in Dieda shenggu Capsules.

莫宣忠，主管藥師，主要從事醫(yī)院藥學(xué)研究。E-mail：13471002169@163.com

R284.1

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1007-8517(2014)12-0012-02

2014.03.25)