田相利+何瑞鵬+錢圓+臧元奇+董雙林

摘要：研究了不同溫度（4、8、12、16、20、24 ℃和溫度突變）下干露對(duì)刺參體壁非特異性免疫的影響。結(jié)果表明，在溫度20和24 ℃條件下干露24 h后，刺參全部死亡，其余處理組刺參成活率為100%。刺參體壁水解酶類和抗氧化指標(biāo)對(duì)于不同溫度下干露脅迫具有不同的響應(yīng)：(1) 在本研究的溫度范圍內(nèi)，刺參體壁酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）活性總體隨溫度升高而增高，隨干露時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降；(2)刺參體壁中超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和總抗氧化（T-AOC）活性等抗氧化指標(biāo)呈現(xiàn)隨溫度的升高先增強(qiáng)，再逐漸下降的趨勢(shì)，以16 ℃為最高。對(duì)于干露脅迫時(shí)間的響應(yīng)，抗氧化酶活性等則在低溫時(shí)（4～16 ℃）呈現(xiàn)先升高，然后逐漸下降的趨勢(shì)，在高溫（20和24 ℃）干露脅迫下，則呈現(xiàn)持續(xù)下降的趨勢(shì)。（3）而模擬干法運(yùn)輸?shù)拇虆⒎翘禺愋悦庖咧笜?biāo)的響應(yīng)，總體上與12～16 ℃下干露脅迫相當(dāng)，而且4～24 h之內(nèi)，其AKP、SOD活性和T-AOC和MDA數(shù)值基本保持穩(wěn)定。本研究結(jié)果表明，刺參干法運(yùn)輸中保持適當(dāng)?shù)牡蜏乜捎行Ы档痛虆⒌拿{迫反應(yīng)，提高刺參運(yùn)輸?shù)某苫盥省?/p>

關(guān)鍵詞：刺參；溫度；干露；非特異性免疫

一般來(lái)說(shuō)，水生生物在其生活史中，主要生活在水體里。但是對(duì)于潮間帶生物來(lái)說(shuō)，可能會(huì)經(jīng)常面臨不同時(shí)間的離水環(huán)境條件，而多數(shù)情況下，這種干露一般很少對(duì)其生命活動(dòng)造成較大傷害。然而，大部分水生生物一般不能直接利用空氣中的氧氣，這種短時(shí)間的干露條件對(duì)于其體溫的維持和氧氣的獲得必然會(huì)產(chǎn)生很大影響。這樣，在干露條件下，這些水生生物必須通過(guò)一系列機(jī)體生理生化活動(dòng)的調(diào)整來(lái)適應(yīng)環(huán)境的變化。

刺參(Apostichopus japonicus)，屬于棘皮動(dòng)物門(Echinodermata)、海參綱(Holothuroidea)，具有很高的營(yíng)養(yǎng)保健和醫(yī)用價(jià)值，是我國(guó)北方重要的增養(yǎng)殖種類之一。在養(yǎng)殖生產(chǎn)過(guò)程中，刺參經(jīng)常會(huì)遭遇干露條件，主要有兩種情況：一種是在春秋季節(jié)，一定的水溫條件下，許多刺參會(huì)爬到池塘淺水處，經(jīng)常因換水過(guò)程或池塘的滲漏而干露在空氣中一段時(shí)間；另一種是在干法運(yùn)輸過(guò)程中，刺參苗種和成參也可能經(jīng)歷一段時(shí)間長(zhǎng)短不一的干露過(guò)程。盡管國(guó)內(nèi)外對(duì)于刺參的生理生態(tài)學(xué)已有很多研究，但對(duì)于干露狀態(tài)下刺參的非特異性免疫能力的狀況尚未見研究。

刺參缺乏抗體介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，主要以非特異性免疫來(lái)識(shí)別異己物質(zhì)、抵御病原體的侵襲。在逆境脅迫下會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體生理機(jī)能的損傷和免疫機(jī)能的破壞［1］。為了及時(shí)消除病原感染和環(huán)境脅迫的影響，維持細(xì)胞的正常代謝，生物體經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期進(jìn)化形成了完善而復(fù)雜的酶類和非酶類抗氧化保護(hù)系統(tǒng)［2］。酸性磷酸酶(ACP)和堿性磷酸酶(AKP)是動(dòng)物體內(nèi)參與免疫防御等活動(dòng)的兩種重要水解酶［3］。超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）是抗氧化系統(tǒng)的關(guān)鍵酶［4］，可用來(lái)評(píng)判機(jī)體的非特異性免疫能力［5］。總抗氧化能力(T-AOC)是衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)［6-8］。MDA則是細(xì)胞氧化代謝產(chǎn)物，其含量高低反應(yīng)機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的程度［9-11］。

本研究以刺參幼參為實(shí)驗(yàn)材料，研究了不同溫度條件下干露對(duì)其體壁水解酶系統(tǒng)和抗氧化酶系統(tǒng)相關(guān)指標(biāo)的影響，旨在研究干露脅迫對(duì)刺參免疫能力的影響，探討刺參對(duì)干露脅迫適應(yīng)機(jī)制，以期豐富刺參的生理生態(tài)學(xué)特征，為刺參運(yùn)輸方法的完善提供參考。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料來(lái)源與馴化

刺參購(gòu)于青島即墨田橫鎮(zhèn)泊子村海參養(yǎng)殖基地。刺參運(yùn)回后在600 L玻璃鋼水槽中馴化 20 d之后，選取體長(zhǎng)、體重相近的健康刺參進(jìn)行實(shí)驗(yàn)［平均體重為（50±5）g］。暫養(yǎng)過(guò)程中，水溫控制在（17±0.5）℃，鹽度 （30±1）‰，海水溶解氧大于7.0 mg/L，海水中氨的濃度低于0.25 mg/L。光照周期14L∶10D。養(yǎng)殖用水為沙濾自然海水，每天換水 1/2并保持連續(xù)充氣。按刺參體重的10%投喂配合飼料。

溫度馴化在光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行，以每天升高或降低1.5 ℃的速度調(diào)整到各需要溫度，3 d后開展實(shí)驗(yàn)，馴化期間光照周期為14L∶10D，連續(xù)充氣，每2 d換水1/2，所換水為相同溫度的水。

1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

研究設(shè)置了6個(gè)不同的干露溫度，即4、8、12、16、20和24 ℃，每個(gè)處理各包含30頭刺參，平均體重為（50±5）g。刺參放在帶孔泡沫隔板上，于可控溫的光照培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，光照強(qiáng)度為（80±5）lx。同時(shí)另取17 ℃暫養(yǎng)的刺參30頭，將其直接放到4 ℃的光照培養(yǎng)箱中，用于模擬刺參運(yùn)輸過(guò)程。

1.3取樣和測(cè)定方法

1.3.1取樣方法分別于干露后0、2 、4、8 、12 和24 h進(jìn)行取樣。用醫(yī)用紗布吸干刺參的體表水分后，在冰盤上將其迅速解剖，剪取刺參體壁，置于5 mL離心管中，然后放入液氮，最后轉(zhuǎn)入-80 ℃超低溫冰箱中保存。每個(gè)處理每次隨機(jī)取4頭參進(jìn)行樣品采集，實(shí)驗(yàn)期間共取樣6次。

1.3.2免疫指標(biāo)測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)主要測(cè)定了體壁中酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）和過(guò)氧化氫酶（CAT）的活性，以及微量丙二醛（MDA）含量和總抗氧化能力（T-AOC）等。

取0.2～0.5 g體壁組織樣品，剪碎，加入4倍體積的冰冷生理鹽水(0.86%)，制成20%勻漿，于4 ℃、10 000 g下離心20 min，收集上清液分裝待測(cè)。采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測(cè)定，相關(guān)免疫指標(biāo)的測(cè)定方法參考試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

酸性磷酸酶（ACP）：以每克組織蛋白在37 ℃與基質(zhì)作用30 min產(chǎn)生1 mg酚為一個(gè)活性單位，以U/gprot表示。

堿性磷酸酶（AKP）：以每克組織蛋白在37 ℃與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg酚為一個(gè)活性單位，以U/gprot表示。

超氧化物歧化酶（SOD）：以每毫克組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為一個(gè)SOD活性單位，以U/mgprot表示。

過(guò)氧化氫酶（CAT）：以每毫克組織蛋白每秒鐘分解1 μmol的H2O2的量為一個(gè)活性單位，以U/mgprot表示。

微量丙二醛（MDA）：以每毫克蛋白所含的納摩爾數(shù)為一個(gè)單位，以nmol/gprot表示。

總抗氧化能力（T-AOC）：以在37 ℃時(shí)，每分鐘每毫克組織蛋白使反應(yīng)體系的吸光度值增加0.01時(shí)，為一個(gè)總抗氧化能力單位。

血清中蛋白含量的測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定，以牛血清白蛋白（ＡＭＲＥＳＣＯ公司）為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。

1.4數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤（Mean±S.E.）表示。利用 SPSS 19.0進(jìn)行Two-way ANOVA分析以確定干露溫度和干露時(shí)間的交互作用，同時(shí)對(duì)不同干露時(shí)間或干露溫度間的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)進(jìn)行Duncan多重比較分析（One-way ANOVA），以P＜0.05為差異顯著水平。

2實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1干露對(duì)刺參成活率的影響

不同干露溫度下，刺參的成活率見表1。由表可見，經(jīng)過(guò)24 h干露脅迫，在溫度20 ℃和24 ℃處理組中的刺參全部死亡，其余處理組的刺參存活率為100%。〖FL)〗

表1不同干露溫度下刺參的成活率

干露時(shí)間/h成活率Survival rate/%4 ℃

Time4℃

8 ℃

12 ℃

16 ℃

20 ℃

24 ℃

突變

2

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

4

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

8

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

12

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

24

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

100.0±0.0

0.0±0.0

0.0±0.0

100.0±0.0

2.2干露對(duì)刺參體壁酸性磷酸酶活性的影響

不同溫度干露條件下，刺參體壁中ACP活性隨時(shí)間的變化見圖1。可以看出，刺參體壁ACP活性高低與干露溫度和時(shí)間直接相關(guān)，總體隨干露溫度升高表現(xiàn)出明顯的上升趨勢(shì)。除了20和24 ℃，ACP活性隨干露時(shí)間的持續(xù)均呈顯著的逐漸下降趨勢(shì)（P＜0.05)。其中，4和8 ℃處理組刺參體壁ACP活性隨時(shí)間延長(zhǎng)一直降低，直到24 h時(shí)降低到最低值；12、16 ℃和突變處理組刺參體壁ACP活性在4 h有所上升，然后再次降低直到實(shí)驗(yàn)結(jié)束；20和24 ℃處理組刺參體壁ACP活性在12 h時(shí)突然升高，在24 h化皮死亡。

圖1不同溫度下干露刺參體壁ACP活性隨時(shí)間的變化

注：不同字母表示處理間差異顯著（P＜0.05）.下同。

2.3干露對(duì)刺參體壁堿性磷酸酶活性的影響

圖2為不同干露溫度下刺參體壁中AKP活性隨時(shí)間變化情況。可以看出，刺參體壁AKP活性高低與干露溫度和時(shí)間直接相關(guān)，總體隨干露溫度升高表現(xiàn)出明顯的上升趨勢(shì)。其中，4、8、12 ℃和突變處理組刺參體壁AKP活性隨時(shí)間延長(zhǎng)呈逐漸降低的趨勢(shì)；16 ℃處理組刺參體壁AKP活性在8 h降至最低后有所回升；20和24 ℃處理組在12 h突然升高，24 h時(shí)化皮死亡。

圖2不同干露溫度下刺參體壁AKP活性隨時(shí)間變化

2.4干露對(duì)刺參體壁SOD活性的影響

不同干露溫度下，刺參體壁中SOD活性隨時(shí)間變化情況見圖3。可以看出，刺參體壁SOD活性高低與干露溫度和時(shí)間直接相關(guān)（P＜0.05）。在4～16 ℃下，刺參體壁中SOD活性總體隨溫度升高而升高，4～20 ℃下隨干露時(shí)間延長(zhǎng)則呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢(shì)，24 h時(shí)SOD活性降至最低；在24 ℃干露脅迫下，刺參體壁中SOD活性隨干露時(shí)間延長(zhǎng)呈顯著下降趨勢(shì)（P＜0.05）；突變處理組在0～4 h內(nèi)顯著降低（P＜0.05），之后則基本保持穩(wěn)定。

圖3不同溫度干露下刺參體壁SOD活性隨時(shí)間變化

2.5干露對(duì)刺參體壁中CAT活性的影響

不同干露溫度下，刺參體壁中CAT活性隨時(shí)間變化情況見圖4?？梢钥闯?，刺參體壁CAT活性高低與溫度和干露時(shí)間直接相關(guān)（P＜005）。在4～16 ℃干露脅迫下，刺參體壁中CAT活性隨溫度升高而升高，隨干露時(shí)間延長(zhǎng)則呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢(shì)；在20、24 ℃和突變處理組，刺參體壁中CAT活性隨干露時(shí)間延長(zhǎng)呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)。

圖4不同干露溫度下刺參體壁CAT活性隨時(shí)間變化

2.6干露對(duì)刺參體壁T-AOC的影響

不同干露溫度下，刺參體壁中T-AOC數(shù)值隨時(shí)間變化情況如圖5所示?？傮w上看，在4～16 ℃干露脅迫下，刺參體壁中T-AOC隨溫度升高而升高，隨干露時(shí)間延長(zhǎng)則呈現(xiàn)先上升再下降的趨勢(shì)；在20、24 ℃干露下，刺參體壁中T-AOC均隨干露時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯下降，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)顯著低于12、16 ℃和突變組（P＜0.05）；突變處理組在2 h內(nèi)T-AOC數(shù)值顯著降低（P＜005），之后則基本保持穩(wěn)定。

圖5不同干露溫度下刺參體壁T-AOC活性隨時(shí)間變化

2.7干露對(duì)刺參體壁MDA含量的影響

不同干露溫度下，刺參體壁中MDA含量隨時(shí)間變化情況見圖6。總體上，不同處理刺參體壁中MDA含量隨溫度脅迫程度的增加而呈先下降后升高的趨勢(shì)，其中，4～12 ℃下隨溫度升高而下降，突變處理總體低于4、8以及20、24 ℃。而MDA含量隨干露時(shí)間的變化各處理有所差異。其中，16 ℃處理組則表現(xiàn)出先顯著上升，而后波動(dòng)下降的趨勢(shì)；20 ℃處理組刺參體壁MDA含量在0～4 h比較穩(wěn)定，然后隨時(shí)間延長(zhǎng)而顯著上升（P＜0.05）；24 ℃處理組實(shí)驗(yàn)期間變化不大；突變處理組顯著上升，但總體上比較穩(wěn)定（P＜0.05）。

圖6不同干露溫度下刺參體壁MDA含量隨時(shí)間變化

3討論

在刺參的運(yùn)輸過(guò)程中，經(jīng)常會(huì)經(jīng)歷不同程度的干露脅迫，而這種脅迫可能會(huì)影響刺參的成活率。在本研究中，高溫干露脅迫（20 ℃和24 ℃）對(duì)刺參存活影響顯著，24 h后所有個(gè)體全部死亡。

刺參屬于無(wú)脊椎動(dòng)物，缺少脊椎動(dòng)物所具有的獲得性免疫，因此刺參的免疫系統(tǒng)屬于非特異性免疫。總體上看，刺參非特異性免疫防御體系主要包括體壁防御、體腔細(xì)胞免疫、體腔液免疫因子及補(bǔ)體系統(tǒng)等［12］。由于刺參缺少特異性免疫組織和器官，所以體腔液中的體腔細(xì)胞擔(dān)負(fù)著細(xì)胞免疫和體液免疫作用［13］。而體壁組織是抵御外來(lái)病原體的第一道防線，其防御作用不僅與體內(nèi)含有的海參皂甙等抗菌活性物質(zhì)有關(guān)［14］，而且體壁中分布的免疫相關(guān)酶也發(fā)揮著重要作用［15-16］。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)刺參免疫系統(tǒng)尚缺少系統(tǒng)研究，關(guān)于體壁免疫相關(guān)酶的研究主要集中于相關(guān)酶的定性和定位等方面［15-16］，對(duì)體壁中酶的活性的變化還少見報(bào)道［12］。本研究首次設(shè)置了不同干露溫度條件，以水解免疫系統(tǒng)的ACP、AKP以及抗氧化免疫系統(tǒng)SOD、CAT、T-AOC和MDA等作為免疫指標(biāo)，探討了不同溫度下干露對(duì)刺參體壁免疫相關(guān)酶活性的影響，以期通過(guò)對(duì)刺參體壁中免疫酶活性和指標(biāo)對(duì)不同溫度干露的響應(yīng)研究，探討干露脅迫對(duì)刺參機(jī)體非特異免疫特性的相關(guān)影響。

研究表明，溶酶體是具有多種水解酶、對(duì)細(xì)胞吞入的物質(zhì)起消化作用的細(xì)胞器，而ACP和AKP則是溶酶體酶的重要組成部分。其中，AKP是一種非特異性磷酸水解酶，能催化磷酸單脂的水解及磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移反應(yīng)，對(duì)動(dòng)物的生存具有重要的意義，而ACP則是溶酶體的標(biāo)志酶。ACP和AKP在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，并與一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收密切相關(guān)［17］。作為刺參體內(nèi)參與免疫防御等活動(dòng)的重要水解酶，二者在刺參抵抗疾病、免疫反應(yīng)和細(xì)胞損傷與修復(fù)過(guò)程中都起著重要的、不可或缺作用［3］。在本研究中，可以看出隨著干露溫度的升高，刺參體壁ACP和AKP活性均呈隨溫度升高而升高的趨勢(shì)，而隨干露時(shí)間的延長(zhǎng)，ACP和AKP活性均呈逐漸降低的變化趨勢(shì)。ACP和AKP活性的變化表明，長(zhǎng)時(shí)間的干露脅迫會(huì)顯著抑制刺參體壁中參與免疫的水解酶的活性，從而降低刺參機(jī)體對(duì)外源異物的防御能力和體內(nèi)物質(zhì)的代謝能力。實(shí)驗(yàn)中，ACP和AKP活性在20和24 ℃下脅迫12 h時(shí)均出現(xiàn)了一個(gè)反彈的過(guò)程，刺參個(gè)體在24 h時(shí)全部死亡，可能與刺參干露脅迫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有關(guān)。

動(dòng)物機(jī)體的抗氧化水平，在一定程度上反映機(jī)體的健康狀況。氧自由基是生物在代謝過(guò)程中排除外源物質(zhì)和抗應(yīng)激反應(yīng)時(shí)的產(chǎn)物之一。而SOD和CAT則是機(jī)體清除氧自由基的重要抗氧化物酶。其中，SOD是O2-主要的清除劑，能將O2-歧化為H2O2和O2，H2O2在CAT作用下則被分解成H2O和O2，從而抑制膜脂氧化，減少對(duì)膜系統(tǒng)的傷害［18-21］。在正常情況下，體內(nèi)抗氧化酶可以清除氧化代謝產(chǎn)物，但當(dāng)其氧化能力下降時(shí)，過(guò)量的氧自由基與不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)化氧化，就會(huì)損傷細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)的大分子蛋白和核酸，從而對(duì)動(dòng)物機(jī)體造成損傷 。因此，抗氧化酶系統(tǒng)在維持機(jī)體正常代謝和功能上起著十分重要的作用。除此以外，總抗氧化能力(T-AOC)是近年研究發(fā)現(xiàn)的用于衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)［6-8］。T-AOC的大小可代表和反映機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)和非酶促系統(tǒng)對(duì)外來(lái)刺激的代償能力以及機(jī)體自由基代謝的狀態(tài)。而MDA則是細(xì)胞氧化代謝產(chǎn)物，其含量高低反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的程度［9-11］。因此，SOD和CAT活性、T-AOC和MDA含量可作為機(jī)體非特異性免疫指標(biāo)，來(lái)評(píng)判機(jī)體非特異性免疫能力的強(qiáng)弱。在本研究中，刺參體壁中抗氧化酶活性呈現(xiàn)變動(dòng)變化趨勢(shì)。隨干露時(shí)間的延續(xù)，抗氧化酶活性總體上呈先上升后下降的趨勢(shì)，表明在干露的最初兩小時(shí)內(nèi)，刺參通過(guò)提高抗氧化酶的活性來(lái)清除體內(nèi)產(chǎn)生的大量自由基，但隨脅迫時(shí)間的延續(xù)，所產(chǎn)生的大量活性自由基得不到及時(shí)清除，又會(huì)反過(guò)來(lái)抑制抗氧化酶的活性，低溫干露脅迫下，SOD和T-AOC活性均處于較高水平；高溫干露脅迫下的抗氧化酶的活性總體上呈持續(xù)下降的趨勢(shì)，表明高溫干露脅迫下產(chǎn)生的活性自由基超過(guò)了機(jī)體的抗氧化能力，抑制了抗氧化酶的活性。研究結(jié)果表明，溫度脅迫會(huì)抑制刺參抗氧化酶的活性，短時(shí)間的干露脅迫可以顯著提高刺參體內(nèi)SOD、CAT和T-AOC的活性，這可能對(duì)增強(qiáng)其抗低氧能力具有一定的積極作用。

本研究表明，刺參體壁中ACP、AKP、SOD、CAT活性以及T-AOC、MDA含量是反映溫度和干露脅迫對(duì)刺參非特異性免疫能力的影響的非常敏感的指標(biāo)，而且不同類別的指標(biāo)對(duì)于干露脅迫的響應(yīng)也有所差異?？傮w上，在本研究的溫度范圍內(nèi)，水解酶活性隨溫度升高而增加，而抗氧化酶活性則隨溫度的升高呈現(xiàn)先增強(qiáng)后逐漸下降的趨勢(shì)，在16 ℃時(shí)最高，這一點(diǎn)與本研究所用規(guī)格刺參的適溫范圍相一致；對(duì)于干露脅迫時(shí)間的響應(yīng)，水解酶類的活性隨干露時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸下降；而抗氧化酶活性則在低溫時(shí)呈現(xiàn)先升高后逐漸下降的趨勢(shì)，而在高溫干露脅迫下，抗氧化酶類活性則呈持續(xù)下降的趨勢(shì)。而模擬干法運(yùn)輸?shù)拇虆⒎翘禺愋悦庖咧笜?biāo)的變化，總體上與12～16 ℃下干露脅迫相當(dāng)，而且4～24 h之內(nèi)，其AKP、SOD活性和T-AOC和MDA數(shù)值基本保持穩(wěn)定。這一結(jié)果啟示，刺參干法運(yùn)輸過(guò)程中保持適當(dāng)?shù)牡蜏乜捎行Ы档痛虆⒌拿{迫反應(yīng)，從而提高刺參運(yùn)輸期間的成活率。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 王沖，田燚，常亞青，等.鹽度脅迫對(duì)刺參非特異性免疫酶的影響［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào)，2013，15（3）：163-168

［2］ 杜秀敏，殷文璇，趙彥修.植物中活性氧的產(chǎn)生及清除機(jī)制［J］.生物工程學(xué)報(bào)，2001，17(2): 121 -125

［3］ 劉云，孔偉麗，姜國(guó)良，等.2 種免疫多糖對(duì)刺參組織主要免疫酶活性的影響［J］.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2008，15(5):787-793

［4］ 王曉杰，張秀梅，李文濤.鹽度脅迫對(duì)許氏平鲉血液免疫酶活力的影響［J］ .海洋水產(chǎn)研究，2005，26(6)：17-21

［5］ 孔祥會(huì)，王桂忠，艾春香，等.鋸緣青蟹不同器官組織中總抗氧化能力和 SOD 活性的比較研究［J］.臺(tái)灣海峽，2003，22(4)：469-474

［6］ de Oliveira U O，da Rosa Araújo A S，Belló-Klein A，et al.Effects of environmental anoxia and different periods of reoxygenation on oxidative balance in gills of the estuarine crab＜ i> Chasmagnathus granulata＜/i>［J］.Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology，2005，140(1): 51-57

［7］ Zenteno-Savín T，Saldierna R，Ahuejote-Sandoval M.Superoxide radical production in response to environmental hypoxia in cultured shrimp［J］.Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology，2006，142(3): 301-308

［8］ 管越強(qiáng)，李利，王慧春，等.低氧脅迫對(duì)日本沼蝦呼吸代謝和抗氧化能力的影響［J］.河北大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，30(3)：301-306

［9］ 瞿中和.細(xì)胞生物學(xué)［M］.北京：高等教育出版社，2000

［10］ 代國(guó)杰，朱建津，高琳琳，等.褪黑素對(duì)小鼠抗氧化作用的影響［J］.食品工業(yè)科技，2010，31（3）：347-350

［11］ Bharrhan S，Chopra K，Rishi P.Vitamin E supplementation modulates endotoxin-induced liver damage in a rat model［J］.Am J Biomed Sci，2010，2(1): 51-62

［12］ 孫永欣，王吉橋，汪婷婷，等.海參防御機(jī)制的研究進(jìn)展［J］.水產(chǎn)科學(xué)，2007，26（6）：358-361

［13］ Eliseikina M G，Magarlamov T Y.Coelomocyte morphology in the holothurians Apostichopus japonicus(Aspidochirota: Stichopodidae) and Cucumaria japonica(Dendrochirota: Cucumariidae)［J］.Russian Journal of Marine Biology，2002，28(3): 197-202

［14］ 北川勲，稲本達(dá)哉，淵田雅子，等.Structures of Echinoside A and B，two antifungal oligoglycosides from the sea cucumber Actinopyga echinites(Jaeger)［J］.Chemical & pharmaceutical bulletin，1980，28(5): 1651-1653

［15］ 聶竹蘭，李霞，辛濤.仿刺參體壁的組織學(xué)和組織化學(xué)［J］.大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，22(3)：184-187

［16］ 李繼業(yè).養(yǎng)殖刺參免疫學(xué)特征與病害研究［D］.青島：中國(guó)海洋大學(xué)，2007

［17］ Zhang R Q，Chen Q X，Zheng W Z，et al.Inhibition kinetics of green crab(＜ i> Scylla serrata＜/i>) alkaline phosphatase activity by dithiothreitol or 2-mercaptoethanol［J］.The international journal of biochemistry & cell biology，2000，32(8): 865-872

［18］ 胡曉輝，郭世榮，李景，等.低氧脅迫對(duì)黃瓜幼苗根系無(wú)氧呼吸酶和抗氧化酶活性的影響［J］.武漢植物學(xué)研究，2005，23(4)：337-341

［19］ 王宏偉，曹向可，錢慶增，等.飼料中錳對(duì)日本沼蝦抗氧化酶活性的影響［J］.河北大學(xué)學(xué)報(bào)，自然科學(xué)版，2008，28(3)：300-304

［20］ Narayanan S，Ruma D，Gitika B，et al.Antioxidant activities of seabuckthorn(Hippophae rhamnoides) during hypoxia induced oxidative stress in glial cells［J］.Molecular and cellular biochemistry，2005，278(1-2): 9-14

［21］ Blokhina O B，Virolainen E，F(xiàn)agerstedt K V，et al.Antioxidant status of anoxia‐tolerant and‐intolerant plant species under anoxia and reaeration［J］.Physiologia Plantarum，2000，109(4): 396-403

Effects of Desiccation on Non-Specific Immune Indices in Sea Cucumber Apostichopus japonicus under Different Temperatures

TIAN XiangLi，HE RuiPeng，QIAN Yuan，ZANG YuanQi，DONG ShuangLin

(The Key Laboratory of Mariculture，Ministry of Education，Ocean University of China，Qingdao 266003 China)

Abstract：Sea cucumber Apostichopus japonicus with body weight of(50±5)g were exposed to different desiccation temperatures(4 ℃，8 ℃，12 ℃，16 ℃，20 ℃，24 ℃ and sudden temperature change) for 0h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h and sampled for body wall to study changes of weight loss ratio，coelomic fluid pH and osmotic pressure and six non-specific immune indices including acid phosphatase(ACP)，alkaline phosphatase(AKP)，superoxide dismutase(SOD)，catalase(CAT)， the total anti-oxidation capability(T-AOC) and MDA contents.The results indicated that all the sea cucumber died at 20 ℃ and 24 ℃ after desiccation for 24 h.The survival rates of the other treatments were 100.0%.The hydrolases and antioxidases responded differently to temperature and desiccation.The activity of ACP and AKP changed positively with temperature change，but negatively with exposure time.The activities of SOD，CAT and T-AOC increased firstly and then decreased gradually with temperature increase，with the maximum at 16 ℃.And they increased firstly and decreased gradually at lower temperatures(4～16 ℃)，but dropped continually at higher temperatures（20～24 ℃）with the time.Under sudden desiccation temperature changes，the non-specific immune indices of sea cucumber changed similarly with that at 12 and 16 ℃ generally.Within 4～24 h，activities of AKP and SOD，T-AOC and MDA contents almost kept stable.It can be concluded that its beneficial for immunity of sea cucumber to keep appropriate low temperature during no-water transportation.

Key words：Apostichopus japonicus; temperature; desiccation; non-specific immune indices

［17］ Zhang R Q，Chen Q X，Zheng W Z，et al.Inhibition kinetics of green crab(＜ i> Scylla serrata＜/i>) alkaline phosphatase activity by dithiothreitol or 2-mercaptoethanol［J］.The international journal of biochemistry & cell biology，2000，32(8): 865-872

［18］ 胡曉輝，郭世榮，李景，等.低氧脅迫對(duì)黃瓜幼苗根系無(wú)氧呼吸酶和抗氧化酶活性的影響［J］.武漢植物學(xué)研究，2005，23(4)：337-341

［19］ 王宏偉，曹向可，錢慶增，等.飼料中錳對(duì)日本沼蝦抗氧化酶活性的影響［J］.河北大學(xué)學(xué)報(bào)，自然科學(xué)版，2008，28(3)：300-304

［20］ Narayanan S，Ruma D，Gitika B，et al.Antioxidant activities of seabuckthorn(Hippophae rhamnoides) during hypoxia induced oxidative stress in glial cells［J］.Molecular and cellular biochemistry，2005，278(1-2): 9-14

［21］ Blokhina O B，Virolainen E，F(xiàn)agerstedt K V，et al.Antioxidant status of anoxia‐tolerant and‐intolerant plant species under anoxia and reaeration［J］.Physiologia Plantarum，2000，109(4): 396-403

Effects of Desiccation on Non-Specific Immune Indices in Sea Cucumber Apostichopus japonicus under Different Temperatures

TIAN XiangLi，HE RuiPeng，QIAN Yuan，ZANG YuanQi，DONG ShuangLin

(The Key Laboratory of Mariculture，Ministry of Education，Ocean University of China，Qingdao 266003 China)

Abstract：Sea cucumber Apostichopus japonicus with body weight of(50±5)g were exposed to different desiccation temperatures(4 ℃，8 ℃，12 ℃，16 ℃，20 ℃，24 ℃ and sudden temperature change) for 0h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h and sampled for body wall to study changes of weight loss ratio，coelomic fluid pH and osmotic pressure and six non-specific immune indices including acid phosphatase(ACP)，alkaline phosphatase(AKP)，superoxide dismutase(SOD)，catalase(CAT)， the total anti-oxidation capability(T-AOC) and MDA contents.The results indicated that all the sea cucumber died at 20 ℃ and 24 ℃ after desiccation for 24 h.The survival rates of the other treatments were 100.0%.The hydrolases and antioxidases responded differently to temperature and desiccation.The activity of ACP and AKP changed positively with temperature change，but negatively with exposure time.The activities of SOD，CAT and T-AOC increased firstly and then decreased gradually with temperature increase，with the maximum at 16 ℃.And they increased firstly and decreased gradually at lower temperatures(4～16 ℃)，but dropped continually at higher temperatures（20～24 ℃）with the time.Under sudden desiccation temperature changes，the non-specific immune indices of sea cucumber changed similarly with that at 12 and 16 ℃ generally.Within 4～24 h，activities of AKP and SOD，T-AOC and MDA contents almost kept stable.It can be concluded that its beneficial for immunity of sea cucumber to keep appropriate low temperature during no-water transportation.

Key words：Apostichopus japonicus; temperature; desiccation; non-specific immune indices

［17］ Zhang R Q，Chen Q X，Zheng W Z，et al.Inhibition kinetics of green crab(＜ i> Scylla serrata＜/i>) alkaline phosphatase activity by dithiothreitol or 2-mercaptoethanol［J］.The international journal of biochemistry & cell biology，2000，32(8): 865-872

［18］ 胡曉輝，郭世榮，李景，等.低氧脅迫對(duì)黃瓜幼苗根系無(wú)氧呼吸酶和抗氧化酶活性的影響［J］.武漢植物學(xué)研究，2005，23(4)：337-341

［19］ 王宏偉，曹向可，錢慶增，等.飼料中錳對(duì)日本沼蝦抗氧化酶活性的影響［J］.河北大學(xué)學(xué)報(bào)，自然科學(xué)版，2008，28(3)：300-304

［20］ Narayanan S，Ruma D，Gitika B，et al.Antioxidant activities of seabuckthorn(Hippophae rhamnoides) during hypoxia induced oxidative stress in glial cells［J］.Molecular and cellular biochemistry，2005，278(1-2): 9-14

［21］ Blokhina O B，Virolainen E，F(xiàn)agerstedt K V，et al.Antioxidant status of anoxia‐tolerant and‐intolerant plant species under anoxia and reaeration［J］.Physiologia Plantarum，2000，109(4): 396-403

Effects of Desiccation on Non-Specific Immune Indices in Sea Cucumber Apostichopus japonicus under Different Temperatures

TIAN XiangLi，HE RuiPeng，QIAN Yuan，ZANG YuanQi，DONG ShuangLin

(The Key Laboratory of Mariculture，Ministry of Education，Ocean University of China，Qingdao 266003 China)

Abstract：Sea cucumber Apostichopus japonicus with body weight of(50±5)g were exposed to different desiccation temperatures(4 ℃，8 ℃，12 ℃，16 ℃，20 ℃，24 ℃ and sudden temperature change) for 0h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h and sampled for body wall to study changes of weight loss ratio，coelomic fluid pH and osmotic pressure and six non-specific immune indices including acid phosphatase(ACP)，alkaline phosphatase(AKP)，superoxide dismutase(SOD)，catalase(CAT)， the total anti-oxidation capability(T-AOC) and MDA contents.The results indicated that all the sea cucumber died at 20 ℃ and 24 ℃ after desiccation for 24 h.The survival rates of the other treatments were 100.0%.The hydrolases and antioxidases responded differently to temperature and desiccation.The activity of ACP and AKP changed positively with temperature change，but negatively with exposure time.The activities of SOD，CAT and T-AOC increased firstly and then decreased gradually with temperature increase，with the maximum at 16 ℃.And they increased firstly and decreased gradually at lower temperatures(4～16 ℃)，but dropped continually at higher temperatures（20～24 ℃）with the time.Under sudden desiccation temperature changes，the non-specific immune indices of sea cucumber changed similarly with that at 12 and 16 ℃ generally.Within 4～24 h，activities of AKP and SOD，T-AOC and MDA contents almost kept stable.It can be concluded that its beneficial for immunity of sea cucumber to keep appropriate low temperature during no-water transportation.

Key words：Apostichopus japonicus; temperature; desiccation; non-specific immune indices