馮凱祥，袁 帥，申 思，周 潔，景東帥，潘夢(mèng)音，劉小莉

食管癌中AQP-3的表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系

馮凱祥，袁 帥，申 思，周 潔，景東帥，潘夢(mèng)音，劉小莉

目的探討AQP-3在食管癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其在食管癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移中的意義。方法采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)21例食管癌組織及15例正常組織中AQP-3的表達(dá)。結(jié)果AQP-3在食管癌組織中的表達(dá)顯著高于其在正常食管組織中的表達(dá)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌組織中AQP-3的表達(dá)水平比無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高；AQP-3的表達(dá)與分化程度及分期有關(guān)(P<0.05)，與患者性別、年齡無(wú)明顯相關(guān)(P>0.05)。結(jié)論AQP-3在食管癌組織中的異常表達(dá)與食管癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移存在密切的關(guān)系。

食管癌；AQP-3；免疫組化；侵襲轉(zhuǎn)移

食管癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其死亡率居第4位，5 a生存率低于10%。盡管在食管癌的診斷、治療上取得了較大進(jìn)展，但由于腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移等原因，食管癌發(fā)病率、死亡率仍無(wú)明顯下降。AQP-3是一種既參與水代謝，又介導(dǎo)甘油代謝的水通道蛋白[1]，具有增加細(xì)胞膜水通透力等功能。研究顯示AQP-3參與多種腫瘤的形成過(guò)程，與皮膚鱗癌、口腔鱗癌、肺腺癌等關(guān)系密切[2-3]。本研究通過(guò)檢測(cè)AQP-3在食管癌中的表達(dá)情況，探討其在食管癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源收集2009年10月～2013年12月河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院手術(shù)切除的食管鱗癌組織標(biāo)本21例，食管正常組織15例為對(duì)照組。所有病例術(shù)前均有完整臨床資料，未化療、放療，手術(shù)標(biāo)本取材后經(jīng)10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2 主要試劑AQP-3兔抗人抗體(稀釋濃度1∶150)、免疫組化試劑盒均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；DAB顯色試劑盒(AR-0612)購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司；其他試劑均為分析純。

1.3 方法每例蠟塊4 μm厚連續(xù)切片2張，進(jìn)行免疫組化染色。石蠟切片脫蠟至水化，抗原修復(fù)、冷卻，3%H2O2甲醇溶液室溫孵育。PBS沖洗3次。加封閉血清，滴加一抗，4℃過(guò)夜，PBS沖洗后滴加生物素標(biāo)記二抗，37℃孵育30 min，PBS沖洗，DAB顯色。蘇木素復(fù)染2 min，鹽酸乙醇分化，自來(lái)水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)AQP-3陽(yáng)性反應(yīng)呈棕黃色,主要存在于細(xì)胞膜及細(xì)胞漿。隨機(jī)觀察10個(gè)高倍鏡(×200)視野計(jì)算平均值。按腫瘤細(xì)胞中陽(yáng)性比例計(jì)算百分率，<5%為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為(++)，>50%為(+++)區(qū)分染色強(qiáng)度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。樣本率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

AQP-3定位于胞膜和胞漿，細(xì)胞陽(yáng)性染色部分呈棕黃色或棕褐色顆粒，見(jiàn)圖1。在食管癌組織中可見(jiàn)AQP-3的表達(dá)率為76.19%，而正常組織中AQP-3的表達(dá)率為33.33%，食管癌組織中AQP-3的染色強(qiáng)度及陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常食管組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.612，P<0.05)，見(jiàn)表1。AQP-3在TNM臨床分期Ⅲ～Ⅳ期腫瘤的陽(yáng)性表達(dá)率為92.86%，在Ⅰ～Ⅱ期腫瘤中表達(dá)率為42.86%，兩者比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.431，P<0.05)，隨TNM分期遞增，AQP-3的表達(dá)逐漸增高；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)陽(yáng)性率(93.33%)顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(χ2=8.505、33.33%，P<0.05)。AQP-3的表達(dá)與患者性別、年齡無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，見(jiàn)表2。

A：正常食管組織 B：食管癌組織
(AQP-3免疫組化×200) (AQP-3免疫組化×200)

圖1AQP-3在正常食管與食管癌組織的表達(dá)

表1 食管癌及正常食管組織中AQP-3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度

與正常食管比較χ2=6.612，P=0.01。

表2 食管癌患者食管組織中AQP-3的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

3 討論

惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。研究表明，癌細(xì)胞為滿足其快速增殖、分裂和侵襲轉(zhuǎn)移的需要，比正常細(xì)胞更需要水分子的快速跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，多數(shù)腫瘤有很高的組織間隙液體壓力和很高的微血管滲透性[4]。水通道蛋白(AQPs)是具有高度選擇性的疏水性蛋白，哺乳動(dòng)物中迄今為止已發(fā)現(xiàn)11種，廣泛分布于各種組織與器官，且同一細(xì)胞可表達(dá)多種AQPs，它們的存在很好解釋了水分子的快速轉(zhuǎn)運(yùn)[5]，對(duì)細(xì)胞的生命活動(dòng)意義重大。AQP-3屬于AQPs的亞族，在多種不同來(lái)源的腫瘤中表達(dá)水平較高，尤其是在侵襲性強(qiáng)的腫瘤中[6]。

本研究結(jié)果顯示，在食管癌組織中AQP-3表達(dá)與在正常食管組織中的表達(dá)相比明顯增多，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期腫瘤的陽(yáng)性表達(dá)率(92.86%)顯著高于Ⅰ～Ⅱ期腫瘤(42.86%)；組織分型與AQP-3的表達(dá)有關(guān)(P<0.05)；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管癌中AQP-3的陽(yáng)性率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，可推測(cè)AQP-3參與食管癌的淋巴轉(zhuǎn)移；AQP-3在食管癌組織中與患者性別、年齡無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。有研究證實(shí)，AQP-3在腫瘤細(xì)胞及腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞中均表達(dá)，提示AQP3參與腫瘤的血管生成[7]，綜上可推測(cè)AQP-3同時(shí)參與食管癌的淋巴道、血行轉(zhuǎn)移，AQP-3在食管癌組織中異常表達(dá)，可能與食管癌生發(fā)、浸潤(rùn)、遷移之間存在密切關(guān)系。

綜上所述，AQP-3可為細(xì)胞的復(fù)制以及腫瘤向周圍浸潤(rùn)的需要提供動(dòng)力，AQP-3能增強(qiáng)腫瘤的轉(zhuǎn)移能力，對(duì)食管癌的發(fā)生、發(fā)展起促進(jìn)作用。這一發(fā)現(xiàn)將有利于進(jìn)一步分析水通道蛋白與食管癌的關(guān)系，為食管癌的預(yù)防、檢測(cè)、治療帶來(lái)新的理念，AQP3抑制劑的開(kāi)發(fā)可有助于控制食管癌的侵襲轉(zhuǎn)移，但需進(jìn)一步研究。

[1]陳銳,林晨,古力加汗·艾爾肯,等.宮頸鱗狀上皮癌變過(guò)程中水通道蛋白3的表達(dá)研究[J].中國(guó)腫瘤臨床,2012,39(3):145-148.

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RelationshipBetweenAQP-3ExpressioninEsophagealCancerandTumorMetastasis

FENG Kai-xiang,YUAN Shuai,SHEN Si,et al

(Medical College,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

ObjectiveTo explore the AQP-3 expressed in esophageal tissue characteristics,its significance in esophageal cancer occurrence and metastasis.MethodsTo use immunohistochemical method to detect 21 cases of esophageal cancer tissue and 15 cases of normal tissue in the expression of AQP-3.ResultsThe expression of AQP-3 in esophageal tissue was significantly higher than normal esophageal tissue,statistically significant difference (P<0.05); Ⅲ～Ⅳ period and with lymph node metastasis of esophageal cancer tissues of AQP-3 expression level,respectively,compared with the Ⅰ～Ⅱ period and high without lymph node metastasis (P<0.05).And the expression of AQP-3 and patients’gender,age,no significant correlation (P>0.05).ConclusionThe AQP-3 abnormal expression in esophageal cancer organizations is closely related to esophageal cancer occurrence and metastasis and prognosis.

esophageal cancer;AQP-3；immunohistochemical；invasion and metastasis

1.國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201310464035) 2.河南科技大學(xué)大學(xué)生研究訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(2012190)

2014-03-09

河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河南洛陽(yáng) 471003

馮凱祥(1991-)，男，河南武陟人，從事食管鱗癌癌變機(jī)制及防治研究工作。

R735.1

A

1672-688X(2014)02-0097-03