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2.濱州醫(yī)學(xué)院附屬濱州市人民醫(yī)院 山東 濱州 256600

胃癌患者血漿uPA濃度的變化

劉磊1周逢強(qiáng)2徐宏2

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目的：測(cè)定胃癌患者血漿中纖溶酶原激活物(uPA)濃度變化情況，探討uPA血漿含量變化作為胃癌惡性腫瘤診斷中的作用。方法收集胃癌患者血液標(biāo)本各40例，并以正常人血液標(biāo)本作對(duì)照，用 ELISA 法檢測(cè)腫瘤患者及正常對(duì)照組血漿中uPA的含量，并比較其差異。結(jié)果與正常對(duì)照組(9.92±4.67 ng/ml)相比,胃癌(18.36±9.14 ng/ml)患者血漿中uPA含量明顯升高，與正常組相比有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論血漿中的uPA濃度升高可作為胃癌診斷輔助指標(biāo)，uPA參與胃癌的生物學(xué)過程。

胃癌；uPA；

尿纖溶酶原激活物(urine plasminogen activator，uPA)具有多種生物學(xué)功能，參與腫瘤細(xì)胞的遷移、黏附及侵襲過程，是腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵信號(hào)蛋白。有研究人員在動(dòng)物模型及生物細(xì)胞分子水平證實(shí)uPA與很多惡性腫瘤的某些主要生物過程存在密切關(guān)系。胃癌及直腸癌的癌組織中uPA的濃度顯著高于癌旁組織以及及正常組織[1]；已經(jīng)有學(xué)者證實(shí)uPA抗原水平在乳腺癌患者血液中的濃度水平到達(dá)一定高度時(shí)，可使乳腺癌患者的復(fù)發(fā)及死亡率升高，因此我們推測(cè)，測(cè)定患者血液中uPA濃度變化，可幫助胃癌的診斷。本實(shí)驗(yàn)在以上研究的前提下，定量測(cè)定胃癌患者血漿中uPA的濃度，以探討胃癌患者血漿中uPA 濃度變化，對(duì)輔助胃癌診斷的價(jià)值。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)樣本：收集濱州市人民醫(yī)院普外科胃癌患者和正常人(非惡性腫瘤患者)血液標(biāo)本各40份，收集前均已向患者及家屬交代明白，通過自愿的方式進(jìn)行入組，男女各占50%。血液采集及處理方法：空腹下抽取實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組血液5ml，置于抗凝管中，,37℃恒溫下放置10分鐘，2000r/min 離心15分鐘后，收集抗凝管中的上層液(血漿，去除雜質(zhì))，放于-80℃低溫柜，直到所有樣本收集結(jié)束，一塊測(cè)定uPA的濃度。

1.2 實(shí)驗(yàn)分組：胃癌患者組：40例，男女均20例，平均年齡56.3±7.6歲；正常對(duì)照組：40例，男女均20例，平均年齡58.6±5.8歲。

1.3 試驗(yàn)試劑和試驗(yàn)方法：多功能酶標(biāo)儀(我院檢驗(yàn)科設(shè)備)，人纖溶酶原激活劑物-uPA ELISA 檢測(cè)試劑盒(購于北京博奧森生物公司)。實(shí)驗(yàn)的方法：本實(shí)驗(yàn)利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)來測(cè)定血漿中uPA的濃度。首先采用試劑盒提供的方法建立uPA濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以標(biāo)準(zhǔn)曲線作為參照，來測(cè)定實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組各份血漿中uPA的濃度，具體的實(shí)驗(yàn)步驟與試劑盒說明書一致。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析：采用CurveExpert1.3建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(2±s)表示，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組間的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組(9.92±4.67 ng/ml)相比,胃癌(18.36±9.14 ng/ml)患者血漿中uPA含量明顯升高，差異有顯著性。(表1)

表1 UPA在胃癌患者及正常患者血漿中的表達(dá)

3 討論

纖溶酶原激活物(uPA)是一種特殊的絲氨酸蛋白酶，能催化無活性的纖溶酶原，纖溶酶原激活物以兩種形式存在，一種為組織型(TPA)，另一種為尿激酶型(uPA)。與細(xì)胞外基質(zhì)的降解和腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)的絕大多數(shù)是尿激酶型(uPA)。本研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者血漿中uPA的檢測(cè)濃度顯著高于正常患者的對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與其它研究者的研究結(jié)果基本一致，這充分的說明了uPA在惡性腫瘤患者診斷、治療以及預(yù)后中的潛在發(fā)展意義。但是能夠合成并表達(dá)uPA的組織細(xì)胞除腫瘤細(xì)胞外，還包括一些正常組織的細(xì)胞，有肝細(xì)胞、未成熟的白細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞等正常的細(xì)胞，還有研究證實(shí)炎癥、血管的脂質(zhì)沉淀、血栓等也可使血液中的uPA濃度升高。因此血液中uPA濃度升高只能作為惡性腫瘤確診的輔助檢查，尚需要其它的相關(guān)檢查及化驗(yàn)來支持，尤其是病理的支持。纖溶酶原激活系統(tǒng)參與基質(zhì)降解，國(guó)外有研究表明尿纖溶酶原激活物(uPA)和纖溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)是參與癌癥浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵信號(hào)蛋白[1]。uPA能將纖溶酶原激活為纖溶酶，后者能降解大多數(shù)基質(zhì)物質(zhì)和基底膜成分。在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中,例如腫瘤血管的生成、腫瘤細(xì)胞的脫落、基質(zhì)浸潤(rùn)、侵入和逸出循環(huán)系統(tǒng)、繼發(fā)臟器的轉(zhuǎn)移等重要步驟中體現(xiàn)出極為重要的效應(yīng)。此外UPA還參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，促進(jìn)細(xì)胞增殖，抑制凋亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞趨化、粘附、遷移等活動(dòng)。而胃癌患者血漿中uPA濃度較正常人群升高的事實(shí)說明，uPA參與了胃癌的生物學(xué)過程。綜上所述，uPA濃度升高可作為胃癌診斷輔助指標(biāo)之一，uPA參與胃癌發(fā)展的生物學(xué)過程。我們認(rèn)為隨著分子靶向治療的進(jìn)展，我們可以進(jìn)一步開發(fā)新的化療藥物，以阻擋或下調(diào)uPA蛋白的表達(dá)，從而阻止胃癌的進(jìn)展，提高胃癌的治療水平，延長(zhǎng)患者的生命。

[1]Claudia Wolff, Katharina Malinowsky, Daniela Berg, Kerstin Schragner, Tibor Schuster, Axel Walch,Holger Bronger, Heinz Hofler1 and Karl-Friedrich Becker Signalling networks associated with urokinase-type plasminogen activator (UPA) and its inhibitor PAI-1 in breast cancer tissues:New insights from protein microarray analysi J Pathol 2011; 223: 54-63.

R446.11

B

1009-6019(2014)08-0136-01