饒艷秋 陳品麗 程明軍 王文君1，，3△ 俞 瑾1，，3

（1復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科 上海 200011；2復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科學(xué)系 上海 200032；3上海市女性生殖內(nèi)分泌相關(guān)疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200011）

中藥更年春（GNC）方對(duì)去勢(shì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的影響

饒艷秋1▲陳品麗1，2，3▲程明軍2王文君1，2，3△俞 瑾1，2，3

（1復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科 上海 200011；2復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科學(xué)系 上海 200032；3上海市女性生殖內(nèi)分泌相關(guān)疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200011）

目的觀察中藥更年春方（Gengnianchun，GNC）對(duì)去勢(shì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的影響。方法分為兩批實(shí)驗(yàn)，均選用3月齡SD雌性大鼠，隨機(jī)分為卵巢切除（ovariectomy，OVX）組、OVX+GNC組、OVX+戊酸雌二醇（estradiol valerate，E2）組、OVX組、Sham+GNC組和Sham組，第1批實(shí)驗(yàn)連續(xù)灌藥3個(gè)月后經(jīng)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。第2批實(shí)驗(yàn)連續(xù)灌藥1個(gè)月后采用高效液相色譜法檢測(cè)各組大鼠下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）和5-羥吲哚乙酸（5-HIAA）的水平。結(jié)果第1批實(shí)驗(yàn)中OVX1組與Sham1組比較，學(xué)習(xí)記憶能力明顯減退（P＜0.05）；OVX1+GNC組、OVX1+E2組與OVX1組比較，學(xué)習(xí)記憶能力明顯增強(qiáng)（P＜0.05）；Sham1+GNC組與Sham1組比較，學(xué)習(xí)記憶能力明顯減退（P＜0.05）。第2批實(shí)驗(yàn)中，OVX2組與Sham2組比較，NE、DA含量明顯減少（P＜0.05），5-HT、5-HIAA含量明顯增加（P＜0.05）；OVX2+GNC組、OVX2+E2組與OVX2組比較，NE、DA含量明顯增加（P＜0.05），5-HT、5-HIAA含量明顯減少（P＜0.05）；Sham2+GNC組與Sham2組比較，NE、DA、5-HT、5-HIAA之間無(wú)明顯差異（P＞0.05）。結(jié)論GNC具有提高去勢(shì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的作用，并可維持下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的平衡，但未出現(xiàn)卵巢功能衰退則不宜補(bǔ)充GNC。

更年春（GNC）中藥；去勢(shì)大鼠；學(xué)習(xí)記憶能力；神經(jīng)遞質(zhì)

*This work was supported by the New Chinese Medicine Drugs and Hospital Preparation Research of Shanghai Health Bureau（2011XY002）and the 3-year Action Plan on TCM Plan of Shanghai-the Workshop Research Project of Famous Veteran Doctors of TCM.

隨著女性年齡的增長(zhǎng)，卵巢功能本身及其中樞調(diào)節(jié)機(jī)制趨向老化，引起神經(jīng)內(nèi)分泌功能明顯改變，出現(xiàn)以植物神經(jīng)功能紊亂為主，并伴有神經(jīng)心理病變等一系列癥狀，如潮熱、心悸、煩躁、抑郁、學(xué)習(xí)記憶力能力減退等，我們將這類癥候群稱為圍絕經(jīng)期綜合征。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征主要采用激素替代療法進(jìn)行治療，但因其不良反應(yīng)及禁忌證限制了其在臨床上的應(yīng)用。近年來(lái)因中藥治療圍絕經(jīng)期綜合征不良反應(yīng)小而療效顯著，已逐漸成為圍絕經(jīng)期綜合征的主要治療方法。中藥更年春方（Gengnianchun，GNC）由復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院根據(jù)中醫(yī)理論及多年臨床實(shí)踐而研制，在治療圍絕經(jīng)期綜合征方面已取得良好療效，因此有必要研究GNC對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征的治療機(jī)制。本研究擬通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究，觀察GNC對(duì)去勢(shì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及下丘腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響，為GNC用于臨床提供有效的科學(xué)依據(jù)。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)大鼠均為3月齡雌性SD大鼠，體質(zhì)量（250±20）g。第1批62只大鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2010-0002，第2批56只大鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2012-0001。兩批大鼠均購(gòu)自上海中國(guó)科學(xué)院，在復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院研究所（清潔級(jí)）飼養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)用藥GNC：由淫羊藿12g、生地黃15g、龜版15g、白芍12g、枸杞子12g、知母15g、菟絲子12g、肉蓯蓉12g、茯苓9g、黃連3g等12味生藥組成，上海家化江陰天江藥業(yè)有限公司加工制備。將藥物混勻，水提取、濃縮、噴霧干燥得干浸膏粉。每貼中藥復(fù)方含生藥138g，制得干浸膏粉約25g，整個(gè)過(guò)程嚴(yán)格按照GMP生產(chǎn)，并派技術(shù)人員全程跟蹤，保證制劑的質(zhì)量。

補(bǔ)佳樂(lè)又名戊酸雌二醇（estradiol valerate，E2），由拜爾醫(yī)藥保健有限公司生產(chǎn)，每片1mg，批號(hào)：8001290。

試劑NE標(biāo)準(zhǔn)品、DA標(biāo)準(zhǔn)品、5-HT和5-HIAA（美國(guó)Sigma公司），純度均高于99％。

儀器Morris水迷宮測(cè)試系統(tǒng)和自主活動(dòng)箱檢測(cè)系統(tǒng)均購(gòu)自上海吉量公司（JLBehv-LR4型），Agilent 1200型高效液相色譜儀購(gòu)自美國(guó)Agilent公司，包括G1322A在線真空脫氣機(jī)、G1312A二元泵、G1367自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、Agilent INTERFACE 35900E數(shù)模轉(zhuǎn)換器及Antec DECARD SDC電化學(xué)檢測(cè)器。

方法

模型建立 第1批實(shí)驗(yàn)將62只3月齡SD雌性大鼠隨機(jī)分組，分為卵巢切除（ovariectomy，OVX）組（即OVX1組）、OVX1+GNC組、OVX1+E2組、Sham1+GNC組、Sham1組。在10％水合氯醛、100mg/kg劑量麻醉下，對(duì)OVX1+GNC組、OVX1+E2組、OVX1組進(jìn)行切除雙側(cè)卵巢處理，將OVX1+GNC組作為實(shí)驗(yàn)組，OVX1+E2組作為陽(yáng)性對(duì)照組、OVX1組作為模型組；對(duì)Sham1+GNC組、Sham1組切除雙側(cè)卵巢周邊脂肪組織，作為假手術(shù)組。術(shù)后以青霉素+鏈霉素常規(guī)抗感染3天。術(shù)后第7天進(jìn)行陰道涂片，在光鏡下觀察陰道脫落細(xì)胞，連續(xù)5天，確認(rèn)去勢(shì)是否完全，排除去勢(shì)不完全大鼠。術(shù)后第2周開(kāi)始對(duì)OVX1+GNC組、Sham1+GNC組灌服中藥復(fù)方GNC顆粒制劑1.25g/天；對(duì)OVX1+E2組灌服E20.1mg/天；對(duì)OVX1組、Sham1組灌服生理鹽水2.5mL/天。連續(xù)灌藥3個(gè)月，處死后取子宮置于4％甲醛中固定備用。

第2批實(shí)驗(yàn)將56只3月齡SD雌性大鼠隨機(jī)分組，分為OVX2+GNC組、OVX2+E組、OVX2組、Sham2組。在10％水合氯醛，100mg/kg劑量麻醉下，將OVX2+GNC組、OVX2+E2組切除雙側(cè)卵巢，將OVX2+GNC組作為實(shí)驗(yàn)組，OVX2+E2組作為陽(yáng)性對(duì)照組、OVX2組作為模型組；對(duì)Sham2組切除雙側(cè)卵巢周邊脂肪組織，作為假手術(shù)組。術(shù)后以青霉素+鏈霉素常規(guī)抗感染3天。術(shù)后第7天進(jìn)行陰道涂片，在光鏡下觀察陰道脫落細(xì)胞，連續(xù)5天，確認(rèn)去勢(shì)是否完全，排除去勢(shì)不完全大鼠。術(shù)后第2周開(kāi)始對(duì)OVX2+GNC組灌服GNC 1.25g/天；對(duì)OVX2+E組灌服E20.1mg/天；對(duì)OVX2組及Sham2組灌服雙蒸水2.5mL/天。連續(xù)灌藥1個(gè)月，處死大鼠后斷頭取腦，在冰上分離出各組大鼠下丘腦，迅速以液氮處理后置于-80℃冰箱中備用。取子宮置于4％甲醛中固定備用。

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 參照Morris法并作部分改動(dòng)，實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分：定位航行能力測(cè)試（place navigation performance，PNP）和空間探索能力測(cè)試（spatial probe performance，SPP）。PNP測(cè)試時(shí)主要用于評(píng)估大鼠在水迷宮中的學(xué)習(xí)和記憶能力。實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5天，第1天動(dòng)物自由游泳2min，使大鼠熟悉水池并排除不會(huì)游泳的大鼠。第2天至第5天每只大鼠進(jìn)行4次/天的訓(xùn)練，每次90s，每次入水點(diǎn)均不相同，將大鼠面向池壁放入水中，記錄動(dòng)物尋找并爬上平臺(tái)的運(yùn)動(dòng)軌跡和所需時(shí)間即逃避潛伏期（escape latent period，ELP）。如果大鼠在90s內(nèi)未找到平臺(tái)，由實(shí)驗(yàn)者將其引致平臺(tái)，ELP記為90s，使大鼠在平臺(tái)上停留20s。每只大鼠共訓(xùn)練16次，最后統(tǒng)計(jì)每天各組大鼠4次ELP的平均值。SPP測(cè)試主要用于評(píng)估大鼠對(duì)平臺(tái)空間位置準(zhǔn)確記憶能力，又稱記憶保持能力。第5天做完4次訓(xùn)練后撤除平臺(tái)，選擇Ⅳ象限作為入水點(diǎn)，將大鼠放入水中，記錄大鼠在水中游90s內(nèi)的平臺(tái)象限中所游行的路程和穿越平臺(tái)次數(shù)，并作出典型軌跡圖。

HPLC方法 取出大鼠下丘腦，采用HPLC法對(duì)大鼠腦內(nèi)NE、DA、5-HT、5-HIAA進(jìn)行檢測(cè)。按0.1g腦（濕重）加入1mL 5％高氯酸的比例混勻，放入玻璃勻漿管內(nèi)，冰浴下勻漿。將勻漿液收集于1.5mL離心管中，于8 500×g離心力下低溫離心20min×2次，取上清液進(jìn)樣檢測(cè)。準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品NE 1.25mg，DA 1.03mg，5-HT 1.34mg，5-HIAA 1.46mg，分別溶于0.1mol/L高氯酸中，制成標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，濃度均為1mg/mL，-20℃保存，使用時(shí)按需要將流動(dòng)相稀釋成各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。進(jìn)樣量為10μL，流動(dòng)相為NaH2PO4（75mmol/L）、OSA（1.7mmol/L）、EDTA（25μmol/L）、TEA（100μmol/L）、10％的甲醇，pH 3.5的水溶液，流速為0.8mL/min，氧化電位為0.7V，靈敏度為20nA，經(jīng)過(guò)柱溫為25℃的色譜柱，色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱（5μm，4.6mm×150mm）。

子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)分析取血后迅速取各組大鼠子宮組織，保存在10％中性甲醛溶液中固定，固定后石蠟包埋，并切片（5μm）。常規(guī)HE染色，光鏡觀察并測(cè)量子宮內(nèi)膜厚度。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 13.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各指標(biāo)均用±s表示，采用One-Way ANOVA單因素方差分析法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

各組大鼠血清E2及子宮內(nèi)膜厚度檢測(cè)結(jié)果的比較如表1所示：兩批實(shí)驗(yàn)中OVX組與Sham組、Sham+GNC組比較，血清E2水平明顯降低（P＜0.01），子宮內(nèi)膜厚度明顯變?。≒＜0.01）；OVX+GNC組與OVX組比較，血清E2水平無(wú)明顯差異（P＞0.05），子宮內(nèi)膜厚度無(wú)明顯差異（P＞0.05）；OVX+E2組與OVX組、OVX+GNC組比較，血清E2水平明顯升高（P＜0.01），子宮內(nèi)膜厚度明顯增厚（P＜0.01）。

表1 各組大鼠血清E2及子宮內(nèi)膜厚度水平Tab 1 Serum E2levels and endometrial thickness of each group （±s）

表1 各組大鼠血清E2及子宮內(nèi)膜厚度水平Tab 1 Serum E2levels and endometrial thickness of each group （±s）

vs.OVX1，（1）P＜0.01；vs.OVX2，（1）P＜0.01.

Groups n E2（pg/mL）En（μm）OVX1+GNC 14 5.30±2.22 938.37±169.52 OVX1+E210 27.20±5.76（1）1215.86±86.07（1）OVX110 5.00±2.83 804.53±31.47 Sham1+GNC 10 29.50±5.80（1）2100.61±55.98（1）Sham15 25.00±1.58（1）1944.91±166.71（1）OVX2+GNC 6 3.50±1.29 2431.72±106.39 OVX2+E26 24.80±1.92（2）4829.83±513.04（2）OVX27 3.00±0.71 3245.69±188.25 Sham2+GNC 6 28.57±3.64（2）5656.32±433.27（2）Sham26 29.50±4.28（2）5769.13±563.01（2）

第1批大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中各組大鼠在PNP測(cè)試中ELP時(shí)間長(zhǎng)短及SPP測(cè)試中各組大鼠穿越平臺(tái)的次數(shù)如表2所示。結(jié)果表明：OVX1組與Sham1組比較，ELP時(shí)間明顯延長(zhǎng)（P＜0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少（P＜0.05）；OVX1+GNC組、OVX1+E2組與OVX1組比較，ELP時(shí)間明顯縮短（P＜0.01），穿越平臺(tái)次數(shù)明顯增多（P＜0.05）；Sham1+GNC組與Sham1組比較ELP時(shí)間明顯延長(zhǎng)（P＜0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)明顯減少（P＜0.05）。

在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中SPP中的探索軌跡如圖1所示。結(jié)果表明：OVX1組與Sham1組比較，探索軌跡呈現(xiàn)無(wú)規(guī)律分布；OVX1+GNC組、OVX1+E2組與OVX1組比較，探索軌跡明顯集中分布于平臺(tái)所在位置附近；Sham1+GNC組與Sham1組比較，探索軌跡呈無(wú)規(guī)律分布。

表2 第1批大鼠在PNP中ELP時(shí)間及SPP中穿越平臺(tái)次數(shù)的比較Tab 2 ELP in PNP and the times across the platform in SPP of the first experiment （±s）

表2 第1批大鼠在PNP中ELP時(shí)間及SPP中穿越平臺(tái)次數(shù)的比較Tab 2 ELP in PNP and the times across the platform in SPP of the first experiment （±s）

vs.OVX1，（1）P＜0.05，（2）P＜0.01；vs.Sham1+GNC，（3）P＜0.05.

Groups n ELP（s）Times OVX1+GNC 14 32.19±2.50（2）2.18±0.57（1）OVX1+E210 22.62±1.94（2）2.11±0.26（1）OVX110 44.93±2.85 0.88±0.30 Sham1+GNC 10 36.24±2.81（2）1.08±0.30（1）Sham15 31.47±3.11（1）（3）1.40±0.40（1）（3）

圖1 第1批大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)中典型軌跡圖Fig 1 Typical pathway in spatial probe performance of the first experiment

第2批大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果第2批大鼠灌藥后測(cè)量其下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)（表3）。結(jié)果表明：OVX2組與Sham2組比較，大鼠下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA含量明顯降低（P＜0.05），5-HT、5-HIAA含量明顯升高（P＜0.05）；OVX2+GNC組、OVX2+E2組與OVX2組比較，大鼠下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA含量明顯升高（P＜0.05），5-HT、5-HIAA含量明顯降低（P＜0.05）；OVX2+GNC組與OVX2+E2組比較，大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)之間均無(wú)明顯差異；Sham2+GNC組與Sham2組比較，大鼠下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)之間均無(wú)明顯差異。

表3 第2批實(shí)驗(yàn)中大鼠下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的比較Tab 3 Hypothalamus neurotransmitter levels of the second experiment （ng/g，±s）

表3 第2批實(shí)驗(yàn)中大鼠下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的比較Tab 3 Hypothalamus neurotransmitter levels of the second experiment （ng/g，±s）

vs.OVX2，（1）P＜0.05，（2）P＜0.01.

Groups n NE DA 5-HT 5-HIAA OVX2+GNC 6 63.67±2.43（1）539.35±47.61（2）52.73±8.00（1）29.164.64（2）OVX2+E26 64.46±5.87（1）506.80±37.76（1）32.89±2.34（2）23.68±4.68（2）OVX27 49.20±2.91 388.76±8.14 67.68±2.59 51.21±4.04 Sham2+GNC 7 67.91±3.05（1）615.11±40.22（2）36.40±2.25（2）29.68±4.43（2）Sham26 65.79±5.90（1）581.47±30.23（2）36.57±3.96（2）23.89±1.27（2）

討論

婦女進(jìn)入圍絕經(jīng)期后，卵巢功能逐漸衰退，卵巢內(nèi)分泌功能逐漸降低，導(dǎo)致婦女體內(nèi)雌激素水平下降，出現(xiàn)內(nèi)分泌激素的變化，而子宮內(nèi)膜厚度也隨之變薄。本研究中結(jié)果中，大鼠去勢(shì)后，E2水平明顯降低，符合婦女圍絕經(jīng)期生殖內(nèi)分泌的變化。去勢(shì)大鼠灌服E2可增加血清E2的水平，導(dǎo)致去勢(shì)大鼠子宮內(nèi)膜增生，符合圍絕經(jīng)期后婦女使用激素替代治療（hormone replacement therapy，HRT）治療后存在患子宮內(nèi)膜癌的潛在危險(xiǎn)性的觀點(diǎn)［1］。去勢(shì)大鼠灌服GNC，并不導(dǎo)致血清內(nèi)E2水平的變化，也不導(dǎo)致去勢(shì)大鼠子宮內(nèi)膜增生。婦女體內(nèi)雌激素效應(yīng)，不僅取決于雌激素水平的含量，還與雌激素受體（estrogen receptor，ER）的數(shù)量及親和力有關(guān)，ER主要存在α、β兩種亞型，兩者的區(qū)別在于其C末端配體結(jié)合區(qū)和N末端活性轉(zhuǎn)化區(qū)不同，從而導(dǎo)致其在靶組織中分布也不同。ERα受體主要分布于卵巢、子宮內(nèi)膜、乳腺等組織，而胸腺、下丘腦、主動(dòng)脈等部位則以ERβ受體為主［2］。既往實(shí)驗(yàn)已證實(shí)［3］，GNC能選擇性提高ERβ的含量，對(duì)ERα并不產(chǎn)生影響，因此我們推測(cè)GNC主要通過(guò)提高ERβ的含量而發(fā)揮其調(diào)節(jié)圍絕經(jīng)期婦女神經(jīng)內(nèi)分泌功能的作用。

婦女進(jìn)入圍絕經(jīng)期后，除了會(huì)出現(xiàn)潮熱、煩躁等植物神經(jīng)功能紊亂的癥狀外，還常伴隨學(xué)習(xí)記憶能力衰退，甚至發(fā)生阿爾茨海默?。ˋlzheimer′s disease，AD）。大量研究表明認(rèn)知功能障礙的發(fā)生與雌激素的缺乏存在一定的因果關(guān)系，絕經(jīng)后婦女認(rèn)知功能障礙的發(fā)生率較同齡男性高2～3倍［4］。HRT不僅對(duì)認(rèn)知功能障礙的治療有效，還能預(yù)防認(rèn)知功能障礙疾病的發(fā)生及推遲其發(fā)病的年齡［5］。認(rèn)知功能障礙疾病的發(fā)生與大腦內(nèi)參與記憶的膽堿能神經(jīng)元減少有關(guān)，與認(rèn)知功能關(guān)系最密切的神經(jīng)遞質(zhì)是乙酰膽堿（acetylcholine，Ach）［6］，膽堿能神經(jīng)元的存活依賴于腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain derived neurophic factor，BDNF）的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用［7］。

從中醫(yī)學(xué)角度而言，腎為先天之本，主藏精，主骨生髓，上通于腦，腦為髓之海，因此腦髓充足與否和腎精盛衰關(guān)系密切，腎精充足則腦髓生化有源，腎精虧虛則腦髓空虛。圍絕經(jīng)期及絕經(jīng)后婦女腎精漸虧，髓海漸空，神明不清，產(chǎn)生學(xué)習(xí)和記憶能力下降。因此圍絕經(jīng)期后宜采用補(bǔ)腎為主的方法來(lái)防治圍絕經(jīng)期所伴隨的學(xué)習(xí)記憶能力下降。GNC是我院研制以補(bǔ)腎為主的中藥復(fù)方，臨床觀察也證實(shí)GNC的確可改善圍絕經(jīng)期婦女的記憶能力［8］。第1批實(shí)驗(yàn)采用經(jīng)典Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)方法，評(píng)價(jià)GNC對(duì)去勢(shì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，結(jié)果提示去勢(shì)會(huì)導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶能力減退，而灌服GNC后去勢(shì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力得到改善，而且GNC與E2在改善大鼠學(xué)習(xí)記憶能力方面產(chǎn)生的效果類似。根據(jù)既往研究結(jié)果，我們推測(cè)GNC可能通過(guò)選擇性提高去勢(shì)大鼠大腦內(nèi)ER-β的含量［9］，從而調(diào)節(jié)海馬內(nèi)Ach的代謝［10］，提高海馬內(nèi)BDNF的表達(dá)［11］，維持腦內(nèi)膽堿能神經(jīng)元的功能，從而達(dá)到改善大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力的作用。第1批實(shí)驗(yàn)結(jié)果還提示Sham組灌服GNC后學(xué)習(xí)記憶能力反而減退，我們推測(cè)是由于育齡期大鼠的卵巢功能并未衰退，予以補(bǔ)充GNC類補(bǔ)腎中藥，違背了中醫(yī)學(xué)“有是證則用是藥”的辨證用藥原則，反而適得其反，導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶能力減退?！坝惺亲C則用是藥”是中醫(yī)用藥的法則，中醫(yī)用藥皆需辨證施治，陰虛者滋其陰，陽(yáng)虛者溫其陽(yáng)，補(bǔ)不足而損有余，以平為期，各得其所。因此我們認(rèn)為未出現(xiàn)卵巢功能衰退的育齡婦女，不適宜補(bǔ)充補(bǔ)腎類藥物，但具體機(jī)制還有待今后進(jìn)一步研究。

目前多數(shù)研究表明，下丘腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA、5-HT參與了人和動(dòng)物的情緒和心理活動(dòng)的調(diào)節(jié)，隨著卵巢功能的衰退，下丘腦分泌的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量及比例發(fā)生了明顯變化，進(jìn)而誘發(fā)潮熱、出汗、煩躁、失眠等多種以植物神經(jīng)功能紊亂為主的圍絕經(jīng)期相關(guān)癥狀。有研究指出，NE與改善注意力、提高學(xué)習(xí)記憶能力、抗焦慮有關(guān)，DA與維持記憶力、改善睡眠有關(guān)，5-HT則參與調(diào)節(jié)情緒，影響體溫調(diào)節(jié)中樞，其升高多引起潮熱、出汗等癥狀。正常生理狀態(tài)下E2可抑制兒茶酚胺降解酶的活性，但隨著卵巢功能下降，E2水平明顯降低，兒茶酚胺降解酶活性增強(qiáng)，導(dǎo)致下丘腦內(nèi)兒茶酚胺類遞質(zhì)NE、DA因降解過(guò)多而含量降低［12］。5-HT的分解雖然增強(qiáng)，但其合成代謝大于分解代謝，因而5-HT的代謝產(chǎn)物5-HIAA含量增加，5-HT含量也增加［13］。關(guān)于圍絕經(jīng)期下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)平衡失調(diào)的原因還有待進(jìn)一步研究。第2批實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示去勢(shì)大鼠下丘腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)分泌紊亂，NE、DA含量下降，5-HT、5-HIAA含量升高，而灌服GNC可升高下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)NE、DA含量，降低5-HT、5-HIAA含量，改善圍絕經(jīng)期植物神經(jīng)功能紊亂的癥狀，產(chǎn)生作用和E2類似，推測(cè)GNC可能也是通過(guò)提高大腦內(nèi)ERβ含量及活性而發(fā)揮作用。在第2批實(shí)驗(yàn)中Sham2+GNC組與Sham2組對(duì)比，神經(jīng)遞質(zhì)并未出現(xiàn)明顯差異，推測(cè)學(xué)習(xí)記憶能力方面可能是GNC中藥復(fù)方對(duì)機(jī)體的綜合調(diào)理所表現(xiàn)的結(jié)果，而單獨(dú)針對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)方面并沒(méi)有明顯差異，具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，GNC可改善去勢(shì)大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，調(diào)節(jié)下丘腦神經(jīng)遞質(zhì)的含量，且不增加子宮內(nèi)膜的厚度。因此我們認(rèn)為GNC可能是改善圍絕經(jīng)期綜合征婦女神經(jīng)內(nèi)分泌功能的安全、有效的藥物。而未去勢(shì)大鼠補(bǔ)充GNC后反而導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶能力下降，提示未出現(xiàn)卵巢功能衰退者不適宜予以服用GNC類藥物。

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Effect of Gengnianchun（GNC）formula on the ability of learning and memory and neurotransmitter of hypothalamus in ovariectomized rats

RAO Yan-qiu1▲，CHEN Pin-li1，2，3▲，CHENG Ming-jun1，2，3，WANG Wen-jun1，2，3△，YU Jin1，2，3
（1Department of Integratton of Western and Tradtttonal Medtctne，Obstetrtcal and Gynecologtcal Hospttal，F(xiàn)udan Untverstty，Shanghat200011，Chtna；2Department of Obstetrtcs and Gynecology，Shanghat Medtcal College，F(xiàn)udan Untverstty，Shanghat200032，Chtna；3Shanghat Key Laboratory of Female Reproducttve Endocrtne Related Dtseases，Shanghat200011，Chtna）

ObjectiveTo study the effect of Gengnianchun formula（GNC）on learing and neurotransmitter of hypothalamus in ovariectomized rats.MethodsThe study included 2 experiments.Three-month old SD rats were randomized into OVX group，OVX+GNC group，OVX+estradiol valerate（E2）group，sham operation（Sham）group and Sham+GNC group.The 5 experimentlasted for 3 months，and changes of learning-memory ability were tested by Morris water maze.The 2ndone lasted for 1 month，and the level of neurotransmitter in hypothalamus（NE，DA，5-HT，5-HIAA）were measured by high-performance liquid chromatography（HPLC）.ResultsIn the first experiment，ovariectomy，the learning and memory ability of OVX1 group and sham1+GNC group was markedly decreased compared with rats in Sham1group（P＜0.05）.While in OVX1+GNC and OVX1+E2group，the learning and memory was improved markedly compared with OVX1group（P＜0.05）.In the second experiment，NE and DA level in hypothalamus were decreased markedly，but 5-HT and 5-HIAA level in hypothalamus were markedly improved in OVX2group than in sham2group（P＜0.05）.NE and DA level in hypothalamus were improved，and 5-HT and 5-HIAA level in hypothalamus were decreased in OVX2+GNC and OVX2+E2group compared with OVX2group（P＜0.05）.But no significant change was observed in neurotransmitters level in hypothalamus between Sham2group and Sham2+GNC group.ConclusionsGNC can improve the ability of learning and memory，and regulate the disorderly neurotransmitter in hypothalamus.But the rats without ovarian failure are not suit for GNC.

Gengnianchun（GNC）formula；ovariectomized rat；learning and memory ability；hypothalamus neurotransmitter

R 711.75

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2014.05.010

上海市衛(wèi)生局中藥新藥及院內(nèi)制劑研發(fā)項(xiàng)目（2011XY002）；上海市中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展三年行動(dòng)計(jì)劃-上海市名老中醫(yī)學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)研究工作室建設(shè)項(xiàng)目（ZYSNXD-CC-MZY030）

▲Co-first authors

△Corresponding author E-mail：wjwwang@aliyun.com

2013-09-02；編輯：沈玲）