馬曉路 談綺文 彭穎斐 張春燕 吳 炯 郭 瑋 潘柏申（復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗(yàn)科 上海 200032）

血清DKK1水平對(duì)肝細(xì)胞癌（HCC）患者預(yù)后判斷的臨床價(jià)值

馬曉路 談綺文 彭穎斐 張春燕 吳 炯 郭 瑋 潘柏申△
（復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院檢驗(yàn)科 上海 200032）

目的評(píng)估血清Dickkopf-1（DKK1）水平與肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）患者術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相關(guān)性。方法收集2011至2012年間72例在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院進(jìn)行HCC根治切除患者的術(shù)前血清以及其中43例術(shù)后1個(gè)月的血清，隨訪至2013年10月。采用ELISA方法定量檢測(cè)HCC患者術(shù)前以及術(shù)后血清DKK1水平，分析DKK1高、低組患者主要臨床相關(guān)資料差異，并評(píng)價(jià)其與患者復(fù)發(fā)、預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果1年內(nèi)共有21人發(fā)生復(fù)發(fā)，1年復(fù)發(fā)率為26.92％。高DKK1組1年無瘤生存率顯著低于低DKK1組（50.0％vs.77.8％，P=0.011）。復(fù)發(fā)低危亞組中高DKK1組復(fù)發(fā)率高于低DKK1組患者，包括單個(gè)腫瘤（73.3％vs.14.0％，P=0.037）、無衛(wèi)星灶（56.3％vs.14.3％，P=0.034）、無血管侵犯（37.5％vs.12.5％，P=0.002）、BCLC 0+A（53.3％vs.15.2％，P=0.010）。兩組患者的臨床病理特征的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多因素結(jié)果提示高DKK1為術(shù)后無瘤生存的獨(dú)立預(yù)后因素（HR為3.753，95％CI為1.495～9.424，P=0.005）。受試者工作特征曲線分析顯示術(shù)前血清DKK1水平對(duì)預(yù)測(cè)HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)具有較好的特異性（82.35％）。術(shù)后DKK1持續(xù)維持在高水平的患者具有更高的復(fù)發(fā)率（50.00％）。結(jié)論術(shù)前血清高水平DKK1預(yù)示HCC患者早期復(fù)發(fā)率高。血清DKK1水平可有效預(yù)測(cè)HCC切除術(shù)后患者的預(yù)后，監(jiān)測(cè)DKK1可以幫助臨床制定最有效的HCC治療方案。

肝細(xì)胞癌（HCC）；DKK1；預(yù)后；血清標(biāo)志物

*This work was supported by the Projects of the National Science＆Technology Pillar Program under the Twelfth-Five-Year Plan（2012BAI37B01）and State Key Laboratory of Clinical College Construction Project.

肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率在惡性腫瘤中位居世界第5位，死亡率居第2位。我國占全球肝癌發(fā)病率及死亡率的一半，且發(fā)病率正在逐年升高。手術(shù)切除是目前HCC根治性治療的主要手段，但是HCC根治性切除術(shù)后5年內(nèi)仍有60％～70％的患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)是HCC患者術(shù)后的主要死亡原因，它已成為進(jìn)一步提高肝癌治療效果的最主要障礙［1-2］。根據(jù)回顧性臨床研究顯示，肝內(nèi)復(fù)發(fā)呈現(xiàn)雙時(shí)相性，大部分復(fù)發(fā)時(shí)間發(fā)生于接受手術(shù)后2年內(nèi)，之后復(fù)發(fā)率趨于平緩，故將術(shù)后2年內(nèi)的復(fù)發(fā)定義為早期復(fù)發(fā)［3］。在臨床工作中通過分子標(biāo)志物預(yù)測(cè)個(gè)體復(fù)發(fā)和預(yù)后危險(xiǎn)度，進(jìn)而指導(dǎo)臨床監(jiān)測(cè)與治療，顯示出其至關(guān)重要的作用。傳統(tǒng)的臨床病理評(píng)價(jià)如腫瘤形態(tài)、組織病理學(xué)特征和腫瘤分期包含信息量有限，并不能非常有效地預(yù)測(cè)HCC切除術(shù)后患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)［4］。因此，臨床迫切需要一些新的生物學(xué)標(biāo)志來判斷HCC患者術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度，進(jìn)而指導(dǎo)臨床個(gè)體化治療。

近期研究顯示Dickkopf-1（DKKl）是Wnt信號(hào)途徑中重要的分泌型抑制因子，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。成年人體內(nèi)幾乎不表達(dá)DKK1，僅在胎盤和胚胎組織中可檢測(cè)到［5-6］。Sato等［7］研究顯示HCC患者中DKK1水平高于健康對(duì)照。Tung等［8］對(duì)DKK1診斷HCC進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，顯示其敏感性為34％、特異性高達(dá)100％。Shen等［9］組織的大規(guī)模多中心DKK1研究發(fā)現(xiàn)，DKK1聯(lián)合甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）診斷HCC的敏感性為73.3％、特異性為93.4％、受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic，ROC）下面積為0.889。Yu等［10］通過微列陣分析發(fā)現(xiàn)DKK1在HCC組織中表達(dá)量明顯高于癌旁組織，在HCC患者血清中也檢測(cè)到高濃度DKK1，同時(shí)HCC組織中DKK1上調(diào)水平與患者預(yù)后具有相關(guān)性，在早期和AFP陰性患者中具有極高的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)示價(jià)值。因此，DKK1可能是一個(gè)潛在的HCC腫瘤診斷和預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志物。血清標(biāo)志物具有易檢測(cè)、可重復(fù)、侵入少的特點(diǎn)［9］，在臨床診斷以及預(yù)后評(píng)估中占有重要的地位。然而，血清DKK1水平對(duì)于HCC切除術(shù)后患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)尤其是早期肝內(nèi)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)價(jià)值尚未見報(bào)道。

本研究旨在定量檢測(cè)HCC患者血清DKK1水平，評(píng)估DKK1對(duì)肝癌患者術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后的相關(guān)性，為HCC患者轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)評(píng)估提供新的血清學(xué)參考指標(biāo)。

資料和方法

研究對(duì)象本研究前瞻性入組2011至2012年在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院進(jìn)行HCC根治切除患者72例，其中男56例，女16例，年齡為37～87歲。依據(jù)2011年版《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》標(biāo)準(zhǔn)病理組織學(xué)診斷為HCC，術(shù)前均未接受過放療、化療等相關(guān)治療，采集HCC患者術(shù)前血清標(biāo)本。所有患者術(shù)后每3～6個(gè)月隨訪腫瘤標(biāo)志物、超聲、CT等檢測(cè)腫瘤有無轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)。采集患者資料，包括年齡、性別、肝炎背景、肝功能狀態(tài)、是否肝硬化、甲胎蛋白（AFP）、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、有無包膜、有無衛(wèi)星灶、微血管侵犯、Edmondson分級(jí)和BCLC分期。終點(diǎn)事件定義為術(shù)后一年發(fā)生肝內(nèi)復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)時(shí)間（time to recurrence，TTR）定義為手術(shù)當(dāng)日到最初發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)時(shí)之間的時(shí)間間隔［11-12］。在此72名入組患者中，43名同意接受術(shù)后1個(gè)月隨訪再次抽血檢測(cè)。本研究得到復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并獲得患者知情同意。

入組標(biāo)準(zhǔn) 符合HCC診斷，年齡≥18周歲，接受根治性切除術(shù)，術(shù)后病理證實(shí)為HCC。

排除標(biāo)準(zhǔn) （1）既往有其他惡性腫瘤史；（2）合并有其他惡性腫瘤；（3）術(shù)前無影像學(xué)資料；（4）術(shù)后病理證實(shí)非干細(xì)胞肝癌診斷；（5）無隨訪資料或失訪。

標(biāo)本采集術(shù)前一天抽取待檢者靜脈血4mL置于未加抗凝劑含分離膠試管（BD，USA）中，待凝血后1 200×g離心10min，分離血清，置-80℃冰箱保存?zhèn)溆?，用于檢測(cè)DKK1蛋白、腫瘤標(biāo)志物和肝功能實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)。術(shù)后1個(gè)月門診隨訪時(shí)同樣方法采集外周血，并分離血清，凍存于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

血清DKK1檢測(cè)按照DKK1定量檢測(cè)ELISA試劑盒（R＆D Systems，Minneapolis，MN，USA）說明書操作，雙抗夾心測(cè)定DKK1蛋白濃度。在預(yù)包被DKK1單克隆抗體的ELISA板上加入100μL樣本稀釋液，隨后加入標(biāo)準(zhǔn)品或1∶200稀釋的血清樣本100μL，標(biāo)準(zhǔn)曲線采用復(fù)孔加樣，并留取一孔只加稀釋液作為空白對(duì)照。經(jīng)室溫孵育2h，洗板4次后加入200μL辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗DKK1多克隆抗體。室溫孵育2h，洗板4次后加入200μL含過氧化氫和聯(lián)苯胺的底物溶液，避光室溫孵育30min，顯色。加入50μL終止液后，450nm、630nm雙波長檢測(cè)各孔吸光度（D）值，標(biāo)準(zhǔn)品為人重組DKK1蛋白，標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度依次為2 000pg/mL、1 000pg/mL、500pg/mL、250pg/mL、125pg/mL、62.5pg/mL和31.2pg/mL，采用4參數(shù)Logistic擬合曲線對(duì)DKK1蛋白濃度進(jìn)行定量。

血清肝炎和腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)使用Roche Modular E170全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀（Roche，Germany）進(jìn)行乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBs Ag）、AFP檢測(cè)，檢測(cè)試劑采用Roche原廠配套試劑（Roche，Germany）。

血清肝功能生化檢測(cè)使用HITACHI 7600自動(dòng)化生化儀（Hitachi，Japan）和SYSMEX XE-5000（Sysmex，Japan）進(jìn)行肝功能Child-Pugh分級(jí)相關(guān)檢測(cè)項(xiàng)目，包含總膽紅素（total bilirubin，TB），白蛋白（albumin，ALB），谷丙轉(zhuǎn)氨酶（glutamicpyruvic transaminase，ALT），凝血酶原時(shí)間（prothrombin，PT）。其中TB、ALB與ALT采用Roche檢測(cè)試劑盒（Roche，Germany）；PT采用Sysmex原廠檢測(cè)試劑盒（Sysmex，Japan）。

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 20.0（IBM，USA）軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。研究定量資料若符合正態(tài)分布，用±s描述；若不符合，則采用中位數(shù)（四分位間距）描述。連續(xù)變量兩組間比較采用t檢驗(yàn)，等級(jí)變量比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法分析；采用多因素COX回歸模型分析影響長期預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，HR值和95％可信區(qū)間（confidence interval，CI）關(guān)聯(lián)強(qiáng)度；生存分析采用Kaplan-Meier法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

HCC患者中血清DKK1表達(dá)水平72例HCC患者血清中均可測(cè)得DKK1表達(dá)。血清DKK1中位水平為1 152pg/mL（四分位間距：855～1 769pg/mL）。

患者臨床基本資料比較患者的臨床特征信息如表1所示。平均年齡54.4歲（37～87歲），其中男性56人（77.78％），女性16人（22.22％）。巴塞羅那分期（Barcelona clinic liver cancer，BCLC）0+A期即早期HCC患者61名（84.72％），B+C期即中晚期HCC患者11名（15.28％）。術(shù)后1年隨訪時(shí)間內(nèi)有21人發(fā)生復(fù)發(fā)，術(shù)后1年復(fù)發(fā)率為29.17％（21/72）。由于血清DKK1水平呈偏態(tài)分布，因此采用75百分位數(shù)1 769pg/mL作為高DKK1水平的cut-off值（決定值），將72例患者根據(jù)血清DKK1水平分為兩組：DKK1水平＞1 769pg/mL為高DKK1組，≤1 769pg/mL為低DKK1組。對(duì)比發(fā)現(xiàn)兩組患者在年齡、性別、HBs Ag、Child-Pugh分級(jí)、是否肝硬化、AFP水平、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、有無包膜、有無衛(wèi)星灶、微血管侵犯、Edmondson分級(jí)和BCLC分期等方面差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，表1）。

表1 臨床特征與術(shù)前血清DKK1關(guān)系Tab 1 Correlation between clinicopathological characteristics and preoperative serum DKK1

術(shù)前血清DKK1水平高低和無瘤生存的相關(guān)性在12個(gè)月的隨訪中，高DKK1組50例患者無瘤生存時(shí)間顯著低于低DKK1組。兩組的無瘤生存時(shí)間分別為214天和300天，1年累積無瘤生存率分別為50.0％和77.8％（P=0.011，圖1）。

圖1 術(shù)前DKK1水平與無瘤生存率的相關(guān)性Fig 1 Correlation between preoperative serum DKK1 and tumor-free survival

血清DKK1水平在低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)亞組中的預(yù)測(cè)價(jià)值在復(fù)發(fā)低危亞組中，高DKK1組復(fù)發(fā)率高于低DKK1組患者，包括單個(gè)腫瘤（73.3％vs.14.0％，P=0.037）、無衛(wèi)星灶（56.3％vs.14.3％，P=0.034）、無血管侵犯（37.5％vs.12.5％，P=0.002）、BCLC 0+A期（53.3％vs.15.2％，P=0.010，圖2）。

影響術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)因素的Cox回歸分析采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)各種風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)因素，包括年齡、性別、HBs Ag、Child-Pugh分級(jí)、是否肝硬化、AFP水平、腫瘤數(shù)量、腫瘤大小、有無包膜、有無衛(wèi)星灶、微血管侵犯、Edmondson分級(jí)、BCLC分期和術(shù)前血清DKK1水平與轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的關(guān)系。單因素分析顯示衛(wèi)星灶（HR為3.583，95％CI為1.203～10.676，P=0.022）、血管侵犯（HR為2.930，95％CI為1.181～7.267，P=0.020）、BCLC分期（HR為3.112，95％CI為1.203～8.051，P=0.019）和術(shù)前血清DKK1水平（HR為2.913，95％CI為1.225～6.929，P=0.016）是影響HCC早期復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素。多因素分析發(fā)現(xiàn)僅衛(wèi)星灶（HR為7.178，95％CI為2.131～24.182，P=0.001）、BCLC分期（HR為4.071，95％CI為1.496～11.078，P=0.006）和術(shù)前血清DKK1水平（HR為3.753，95％CI為1.495～9.424，P=0.005）可作為影響HCC早期復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（表2）。

圖2 低危組術(shù)前DKK1水平與無復(fù)發(fā)生存率的關(guān)系Fig 2 Correlation between preoperative DKK1 and relapse-free survival in low-recurrence-risk subgroups

表2 影響術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)因素的Cox回歸分析Tab 2 Univariate and multivariate Cox regression analyses of clinicopathlogical characteristics

DKK1預(yù)測(cè)早期復(fù)發(fā)的ROC曲線分析使用ROC曲線對(duì)術(shù)前血清DKK1預(yù)測(cè)早期復(fù)發(fā)的效能進(jìn)行評(píng)估，結(jié)果顯示DKK1預(yù)測(cè)早期復(fù)發(fā)的ROC曲線下面積為0.626，靈敏性為42.86％，特異性為82.35％。結(jié)果顯示血清DKK1水平對(duì)于評(píng)估早期復(fù)發(fā)具有較好的特異性（圖3A）。

術(shù)前術(shù)后血清DKK1變化預(yù)測(cè)早期復(fù)發(fā)的價(jià)值72例入組患者中43名患者術(shù)后1個(gè)月隨訪時(shí)采集外圍血并進(jìn)行了血清DKK1的檢測(cè)。結(jié)果顯示，相較于術(shù)前，術(shù)后外周血DKK1水平顯著下降（中位濃度：1 097.28pg/mL vs.824.32pg/mL，P=0.01，圖3B）。根據(jù)DKK1檢測(cè)結(jié)果，可將配對(duì)的43例患者分成3組：（Ⅰ）術(shù)前低、術(shù)后也是低DKK1水平（n=31）；（Ⅱ）術(shù)前高、術(shù)后低DKK1水平（n=6）；（Ⅲ）術(shù)前高、術(shù)后也是高DKK1水平（n=6）。3組人群的復(fù)發(fā)率分別是16.13％、33.33％、50.00％（Ⅰvs.Ⅱ：P=0.25；Ⅰvs.Ⅲ：P=0.03；Ⅱvs.Ⅲ：P=0.50，圖3C）。

圖3 術(shù)前DKK1水平評(píng)估早期復(fù)發(fā)的ROC曲線分析及術(shù)前、術(shù)后DKK1水平動(dòng)態(tài)變化對(duì)復(fù)發(fā)的影響Fig 3 ROC analysis of the early-recurrence prediction efficiency of preoperative DKK1 and prognostic significance of dynamic changes of DKK1 before and after resection in HCC

討論

伴隨HCC防治的不斷深入，很多HCC患者尚在早期即被發(fā)現(xiàn)和治療。但現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)多是基于影像學(xué)檢查和病理形態(tài)學(xué)分級(jí)，不能完全反映腫瘤的生物學(xué)特性，判斷預(yù)后的靈敏性和特異性還有待提高，難以適應(yīng)目前分子診斷和分型的需要。因此，尋找新的能夠充分反映HCC生物學(xué)特性的預(yù)后判斷與治療分子標(biāo)志物，并在此基礎(chǔ)上對(duì)HCC進(jìn)行分子分型研究成為HCC患者進(jìn)行個(gè)體化防治的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。通過大量HCC預(yù)后分子標(biāo)志物的研究，眾多新型HCC預(yù)后標(biāo)志物被發(fā)現(xiàn)。血清標(biāo)志物具有易檢測(cè)、可重復(fù)、非侵入性、標(biāo)本用量以及人為干擾少等優(yōu)點(diǎn)，且無需復(fù)雜的標(biāo)本前處理，故其在HCC的診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)中均占有重要的地位［9］。盡管目前已有多種HCC預(yù)后潛在分子標(biāo)志物被報(bào)道，主要包括血清標(biāo)志物AFP、DCP和組織標(biāo)志物p53、細(xì)胞角蛋白10、細(xì)胞角蛋白19、p28GANK、骨橋蛋白，分子標(biāo)志物microRNA［13-18］。但是目前對(duì)于這些標(biāo)志物的使用仍缺乏臨床共識(shí)。因此，挖掘新的HCC血清預(yù)后標(biāo)志物勢(shì)在必行。

DKK1作為Wnt信號(hào)通路抑制劑受到廣泛研究。DKK1是一種分泌性糖蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量（Mr）約為35 000。DKK1通過Wnt受體Lrp6結(jié)合從而阻斷Lrp6介導(dǎo)的Wnt/β-catenin信號(hào)傳遞，是Wnt信號(hào)通路的重要抑制因子［19-20］。大量研究顯示DKKl表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。Glass等［21］報(bào)道骨髓瘤細(xì)胞分泌RANKL升高伴破骨細(xì)胞活性增強(qiáng)，因此血清RANKL可作為多發(fā)性骨髓瘤復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)指標(biāo)。多發(fā)性骨髓瘤患者可引起血清DKK1和RANKL水平升高，導(dǎo)致多發(fā)性骨髓瘤患者發(fā)生彌漫性骨質(zhì)疏松和高鈣血癥等全身反應(yīng)。Qian等［22］發(fā)現(xiàn)在HLA-A*0201的伴隨下細(xì)胞毒性T細(xì)胞可以直接識(shí)別骨髓瘤細(xì)胞表面的DKK1肽段并發(fā)起攻擊，因此DKK1可能是一個(gè)潛在的多發(fā)性骨髓瘤抗原，并可用于免疫靶向治療。Hirata等［23］在DKK1的表觀遺傳學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)腎癌患者DKK1表達(dá)沉默，DKK1再表達(dá)可在腎癌中導(dǎo)誘細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯。Yu等［10］報(bào)道HCC組織DKK1高表達(dá)患者遠(yuǎn)期預(yù)后較差，DKK1單獨(dú)或聯(lián)合β-catenin可作為HCC預(yù)后預(yù)測(cè)標(biāo)志物。

本研究對(duì)72例HCC患者進(jìn)行了術(shù)前血清DKK1水平檢測(cè)，研究術(shù)前血清DKK1與HCC患者接受根治性切除術(shù)后腫瘤早期肝內(nèi)復(fù)發(fā)之間的關(guān)系。相關(guān)回顧性研究顯示，HCC術(shù)后復(fù)發(fā)被定義成兩類：術(shù)后2年內(nèi)發(fā)生的早期復(fù)發(fā)以及術(shù)后2年后發(fā)生的晚期復(fù)發(fā)［3］。由于本研究的隨訪時(shí)間相對(duì)較短，所以將重點(diǎn)事件定義為術(shù)后1年內(nèi)發(fā)生的早期復(fù)發(fā)。我們首先發(fā)現(xiàn)血清高水平DKK1與HCC術(shù)后患者早期復(fù)發(fā)率顯著高于低DKK1患者。由于目前對(duì)于早期HCC患者的預(yù)后判斷仍是困擾臨床醫(yī)師的一個(gè)難題，因此我們進(jìn)一步探究DKK1在預(yù)測(cè)早期肝癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)中的價(jià)值，結(jié)果顯示在BCLC 0+A的早期肝癌患者中，DKK1高水平患者早期復(fù)發(fā)率顯著高于低水平患者，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除此以外在多個(gè)HCC低危復(fù)發(fā)組包括單個(gè)腫瘤、無衛(wèi)星灶、以及無血管侵犯HCC患者亞組中，術(shù)前高DKK1也預(yù)示著術(shù)后高腫瘤復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。通過多因素Cox模型以及ROC分析證實(shí)術(shù)前血清DKK1水平是預(yù)示HCC早期復(fù)發(fā)的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素（HR為2.913，95％CI為1.225～6.929，P=0.016），并且具有較高的預(yù)測(cè)特異性（82.35％）。這些結(jié)果提示了DKK1是一個(gè)理想的HCC尤其是早期HCC根治性術(shù)后預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)血清學(xué)標(biāo)志物。

我們還收集了43例配對(duì)術(shù)前術(shù)后血清，發(fā)現(xiàn)術(shù)后DKK1水平較術(shù)前有顯著下降。提示DKK1可以做為一個(gè)理想的監(jiān)測(cè)手術(shù)治療療效的血清學(xué)標(biāo)志物。根據(jù)DKK1動(dòng)態(tài)變化與患者預(yù)后之間的分析，我們發(fā)現(xiàn)術(shù)后維持高血清DKK1水平的患者早期復(fù)發(fā)率顯著高。提示了對(duì)HCC患者進(jìn)行DKK1術(shù)前術(shù)后動(dòng)態(tài)檢測(cè)可以篩選出高?；颊?，從而可以更有針對(duì)性地對(duì)這些患者制定術(shù)后輔助治療方案，降低復(fù)發(fā)率，提高預(yù)后。

本研究中血清DKK1預(yù)后判斷點(diǎn)定為75百分位數(shù)1 769pg/mL，低于Shen等［9］研究報(bào)道的DKK1診斷HCC的cut-off值為2 153pg/mL，造成預(yù)后判斷值遠(yuǎn)低于診斷值的原因可能由于文獻(xiàn)中DKK1檢測(cè)采用的手工包被ELISA檢測(cè)系統(tǒng)，而本研究采用的則是DKK1 ELISA預(yù)包被檢測(cè)系統(tǒng)，ELISA檢測(cè)體系的差異可能導(dǎo)致了本研究DKK1預(yù)后判斷值較低。

本研究為首次通過術(shù)前血清DKK1水平預(yù)測(cè)HCC根治切除術(shù)后患者短期無瘤生存以及早期復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，術(shù)前血清高水平DKK1預(yù)示HCC患者預(yù)后不良。盡管存在單中心、樣本量小以及隨訪時(shí)間較短等不足之處，但是本研究仍為進(jìn)一步探究血清DKK1水平與HCC患者預(yù)后相關(guān)性奠定了基礎(chǔ)，為臨床提供了HCC輔助預(yù)后預(yù)測(cè)的血清標(biāo)志物新線索和依據(jù)。綜上所述，我們相信檢測(cè)血清DKK1可以有效地篩選出具有高轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，協(xié)助臨床針對(duì)這些高?；颊咧贫ǜ佑行У膫€(gè)體化腫瘤監(jiān)測(cè)和治療方案，從而提高肝癌綜合治療的療效。

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Prognostic significance of serum DKK1 in hepatocellular carcinoma（HCC）patients

MA Xiao-lu，TAN Qi-wen，PENG Ying-fei，ZHANG Chun-yan，WU Jiong，GUO Wei，PAN Bai-shen△
（Department of Cltntcal Laboratory Medtctne，Zhongshan Hospttal，F(xiàn)udan Untverstty，Shanghat200032，Chtna）

ObjectiveTo invesigate the prognostic values of serum Dickkopf-1（DKK1）in hepatocellular carcinoma（HCC）patients after curative resection.MethodsPreoperative sera samples were collected from 72 selective HCC patients undergoing curative resection during 2011 and 2012 in Zhongshan hospital.Moreover，postoperative sera of 43 patients who enrolled in present study were collected one month after resection.Follow-up was ended on Oct.，2013.ELISA was used to detect the concentrations of preoperative and postoperative DKK1 in serum from the patients.Clinical-pathological features were compared between high and low DKK1 level patients to evaluate the correlation between DKK1 and recurrence of HCC.ResultsDuring the follow-up，21 of 78 enrolled patients suffered recurrence and the 1-year recurrence rates was 26.92％.High DKK1 expression group had lower 1-year time to progress（TTP）rates compared with low DKK1 expression group（50.0％vs.77.8％，P=0.011）.Patients with preoperative high DKK1expression showed a relatively higher risk of developing postoperative recurrence than those with low DKK1 expression in low recurrence risk subgroups，including single tumor（73.3％vs.14.0％，P=0.037），absence of satellite lesions（56.3％vs.14.3％，P=0.034），absence of vascular invasion（37.5％vs.12.5％，P=0.002）and BCLC stage 0+A（53.3％vs.15.2％，P=0.010）.No significant clinicopathlolgical characteristics was found between the two groups.Multivariate analysis revealed that DKK1 was an independent prognostic factor for TTP（HR：3.753，95％CI：1.495-9.424，P=0.005）.Receiver operating characteristics curve analysis showed that preoperative DKK1 had high specificity（82.35％）in predicting recurrence after resection.Patients who remained high DKK1 levels after resection had highest recurrence probabilities（50.00％）.ConclusionsHigh level of preoperative serum DKK1 was associated with early recurrence of HCC after curative resection.DKK1 is a novel prognostic predictor for HCC patients and monitoring DKK1 could help tailing the most effective antitumor strategies.

hepatocellular carcinoma；DKK1；prognosis；serum marker

R 735.7

A

10.3969/j.issn.1672-8467.2014.05.004

“十二五”國家科技支撐計(jì)劃（2012BAI37B01）；國家臨床重點(diǎn)檢驗(yàn)專科建設(shè)項(xiàng)目

△Corresponding author E-mail：pan.baishen@zs-hospital.sh.cn

2014-02-20；編輯：張秀峰）