翟華珍，周有連

(1. 廣西壯族自治區(qū)賀州市人民醫(yī)院 消化科，廣西 賀州，542899;2. 廣東省廣州市第一人民醫(yī)院 消化科，廣東 廣州，510180)

炎癥性腸病(IBD)是一組發(fā)病機(jī)制尚不明確的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)，近年來(lái)在中國(guó)發(fā)病逐漸增加?，F(xiàn)有證據(jù)[1-2]表明，IBD發(fā)病與環(huán)境因素、遺傳因素、腸道菌群改變、免疫應(yīng)答等因素密切相關(guān)，尤其腸道菌群改變是其關(guān)鍵環(huán)節(jié)。研究表明，IBD患者的紅細(xì)胞沉降率(血沉，ESR)、C反應(yīng)蛋白(CRP)等炎性指標(biāo)顯著高于健康人群[3-4]。本研究觀察了65例IBD患者腸道菌群的變化及其與白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)、ESR和CRP的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月—2014年5月在南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院治療的IBD患者65例，均符合2010年世界胃腸病學(xué)組織關(guān)于IBD的診療指南中規(guī)定的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。其中UC患者36例設(shè)為UC組，男20例，女16例；年齡35～64歲，平均(42.15±3.48)歲。CD患者29例設(shè)為CD組，男14例，女15例；年齡32～54歲，平均(36.37±3.68)歲。再依據(jù)病情活動(dòng)情況將65例IBD患者分為活動(dòng)組34例，緩解組31例，分組標(biāo)準(zhǔn): UC患者根據(jù)腹瀉和便血癥狀、內(nèi)鏡下黏膜病變及醫(yī)師評(píng)估等因素進(jìn)行評(píng)分，每項(xiàng)0～3分，總分≥2 分為活動(dòng)期，<2分為緩解期; CD患者依據(jù)患者一般情況、腹痛腹瀉癥狀、腸外表現(xiàn)等因素進(jìn)行CD活動(dòng)指數(shù)(CDAI)評(píng)分，≥150 分為活動(dòng)期，<150分為緩解期。另選取同期健康體檢人群30例設(shè)為對(duì)照組，各組性別、年齡等一般資料無(wú)顯著差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 菌群檢測(cè)：無(wú)菌操作獲取所有患者自然排出的新鮮糞便，迅速置入?yún)捬豕迌?nèi)，并立即送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)。準(zhǔn)備以下10種細(xì)菌的培養(yǎng)基(購(gòu)自北京拜爾迪生物技術(shù)有限公司)：葡萄球菌(SP)、腸桿菌(EMB)、腸球菌(EC)、消化球菌(PS)、擬桿菌(BD)、雙歧桿菌(BL)、乳桿菌(LC)、真桿菌(ES)、酵母菌(SB)、小梭菌(SC)。采用日本光岡知足法[6]進(jìn)行檢測(cè)：將0.5 g糞便標(biāo)本置于含有4.5 mL稀釋液的安剖瓶中，置旋渦混合器震蕩1 min; 另取7只含1.8 mL稀釋液的無(wú)菌青霉素安剖瓶，從首只瓶中取0.2 mL混懸液至第2只瓶中震蕩均勻，依次稀釋后將標(biāo)本接種于培養(yǎng)基上，以47滴/mL的標(biāo)準(zhǔn)滴管由高稀釋度向低稀釋度滴種，3個(gè)稀釋度/平板。完成后稍干燥，將平板倒置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，需氧菌和厭氧菌平板分別于24 h和72 h后觀察結(jié)果。

1.2.2 炎性指標(biāo)檢測(cè)：所有患者取靜脈血3 mL，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)WBC和PLT計(jì)數(shù)，以魏氏法檢測(cè)ESR，以酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)CRP含量。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察UC和CD組患者腸道菌群含量與對(duì)照組之間的差異；活動(dòng)組和緩解組之間腸道菌群含量及WBC、PLT、ESR和CRP等炎性指標(biāo)差異；以及菌群含量與炎性指標(biāo)的相關(guān)性。菌群含量均以菌落對(duì)數(shù)值表示。

2 結(jié) 果

2.1 UC和CD組患者腸道菌群含量與對(duì)照組比較

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，2組患者EMB、EC、SB均較對(duì)照組顯著升高(P<0.05或P<0.01)，UC組CD較對(duì)照組顯著升高(P<0.05); PS、BD、BL、LC和ES均較對(duì)照組顯著下降(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 UC和CD組腸道菌群含量與對(duì)照組比較±s) lg 10n/g

2.2 活動(dòng)組和緩解組腸道菌群含量比較

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，活動(dòng)組的EMB、ES、SB和SC顯著高于緩解組(P<0.05或P<0.01)；BD、BL和LC顯著低于緩解組(P<0.05或P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 活動(dòng)組和緩解組腸道菌群含量比較±s) lg 10n/g

2.3 活動(dòng)組和緩解組炎性指標(biāo)比較

經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，活動(dòng)組WBC、PLT、ESR、CRP均顯著高于緩解組，見(jiàn)表3。

表3 活動(dòng)組和緩解組炎性指標(biāo)比較±s)

2.4 菌群含量與炎性指標(biāo)的相關(guān)性分析

將WBC、PLT、ESR、CRP分別與10種細(xì)菌的數(shù)量做pearson相關(guān)性分析，結(jié)果表明，WBC、PLT和CRP均與EC負(fù)相關(guān)(P<0.01，r=-0.513，-0.478，-0.681)，ESR與SB正相關(guān)(P<0.01，r=0.791)，見(jiàn)圖1。

圖1 炎性指標(biāo)與菌群含量相關(guān)性分析

3 討 論

近年來(lái)IBD在中國(guó)的發(fā)病率逐步上升[7]，由于病情反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，且長(zhǎng)期用藥給患者和家庭帶來(lái)沉重經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。正常人體腸道菌群種類眾多，數(shù)量巨大，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為腸道菌群失衡是IBD發(fā)病的重要原因，如Zoetendal等[8]研究發(fā)現(xiàn)厚壁菌門的數(shù)量或多樣性減少與IBD發(fā)病相關(guān)，Ricanek等[9]發(fā)現(xiàn)，CD患者腸黏膜中BD門細(xì)菌多樣性較健康人群顯著減少，而變形菌門和厚壁菌門的多樣性則顯著增加。戎建明等[10]研究表明，IBD患者腸道菌群結(jié)構(gòu)與健康人群有較大差異，存在某些特異性細(xì)菌的缺失，且細(xì)菌多樣性顯著下降。實(shí)驗(yàn)研究表明，無(wú)菌條件下飼養(yǎng)的動(dòng)物腸道內(nèi)缺乏共生菌群，即便是具有IBD易感基因或采用其他反復(fù)干預(yù)，均很難導(dǎo)致這些動(dòng)物發(fā)生IBD[11]，這是腸道菌群紊亂與IBD發(fā)病密切相關(guān)的重要證據(jù)。但也有學(xué)者持相反意見(jiàn)，認(rèn)為腸道菌群紊亂是IBD患者腸道功能受損造成的結(jié)果，而非致病因素[12]。本研究檢測(cè)了IBD患者的10種細(xì)菌，除SP外，所有細(xì)菌含量均與對(duì)照組差異顯著(P<0.05或P<0.01)，與上述報(bào)道一致。此外，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)期和緩解期IBD患者的腸道菌群結(jié)構(gòu)也存在差異[13]，本研究結(jié)果亦證實(shí)了此點(diǎn)。

國(guó)外研究顯示，血常規(guī)的多項(xiàng)檢測(cè)，如白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞體積分布寬度等與IBD的病情活動(dòng)相關(guān)[14-15]。國(guó)內(nèi)楊榮萍等[16]研究表明，活動(dòng)期UC患者的平均血小板體積顯著低于緩解期患者和健康人群，而血小板計(jì)數(shù)顯著高于緩解期患者。ESR反映紅細(xì)胞在一定條件下沉降的速度，機(jī)體在急性炎癥時(shí)產(chǎn)生大量急性反應(yīng)相物質(zhì)，從而造成ESR加快。研究[17]表明，IBD活動(dòng)期患者的ESR顯著高于緩解期患者，且與SB含量呈正相關(guān)[18]。CRP是機(jī)體急性時(shí)相反應(yīng)性蛋白，在發(fā)生細(xì)菌感染和損傷時(shí)其血清表達(dá)水平會(huì)顯著升高。大量研究表明，IBD患者的血清CRP水平顯著升高，尤其是活動(dòng)期患者的表達(dá)水平顯著高于緩解期，且與病變嚴(yán)重程度正相關(guān)[19]，因此CRP是評(píng)價(jià)IBD疾病活動(dòng)性的有效指標(biāo)之一。本研究結(jié)果表明，活動(dòng)組WBC、PLT、ESR、CRP均顯著高于緩解組，且WBC和PLT均與EC負(fù)相關(guān)，ESR與SB正相關(guān)，CRP與EC、BL弱負(fù)相關(guān)，與上述報(bào)道基本一致。

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