吳德群，陳 劍

(江蘇省揚(yáng)州市婦幼保健院 檢驗(yàn)科，江蘇 揚(yáng)州，225002)

B群鏈球菌(GBS)又稱為無(wú)乳鏈球菌，是一種寄生于妊娠期婦女下消化道及泌尿生殖道的細(xì)菌，新生兒可直接自母體，或分娩時(shí)由母體生殖道寄殖菌上行感染，是圍產(chǎn)期母子嚴(yán)重感染性疾病的主要致病菌[1]。GBS感染的新生兒出生后可導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥，死亡率極高，所以GBS感染一直是國(guó)際圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問題。通過適齡婦女陰道及直腸GBS檢驗(yàn)，可以監(jiān)測(cè)妊娠前后婦女GBS感染情況，對(duì)預(yù)防與及時(shí)治療提供方便。揚(yáng)州市婦幼保健院近年來(lái)開展了適齡婦女的GBS檢測(cè)，本文對(duì)揚(yáng)州市2013年全年婦女GBS感染情況進(jìn)行調(diào)研，分析不同年齡階段、不同季節(jié)、受孕與否的適齡婦女GBS感染情況，以利于今后該地區(qū)的預(yù)防和治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2013年1—12月在本院門診或住院治療的3303例適齡婦女為研究對(duì)象，年齡17～38歲,平均28.4歲。根據(jù)研究對(duì)象不同年齡階段、是否懷孕情況及檢測(cè)時(shí)間不同進(jìn)行分組，其中年齡分為<20歲、20～25歲、26～30歲、31～35歲及>35歲5組；懷孕情況分為非妊娠及圍產(chǎn)期2組；檢測(cè)時(shí)間分為春(2～4月)、夏(5～7月)、秋(8～10月)、冬(11～1月)4組，分別對(duì)不同年齡、懷孕情況及檢測(cè)時(shí)間生殖道B族鏈球菌感染陽(yáng)性率差異進(jìn)行分析。

1.2 研究方法

1.2.1 樣本采集：具體方法參照2002年CDC推薦的取材方法[2]：先擦去外陰分泌物，將2根無(wú)菌棉拭子放入陰道1/3處，采取陰道分泌物；再將此棉拭子插入肛門，在肛門括約肌上約2～5 cm處取直腸分泌物，使棉拭子上兼有陰道與直腸分泌物。將棉拭子放入無(wú)菌套管中，密閉送檢。

1.2.2 檢測(cè)方法：采用實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)法進(jìn)行定性檢測(cè)[3]: 在棉拭子管中加入1 mL滅菌清洗液，高速震蕩2 min制成樣本懸浮液；取出全部樣品放入1.5 mL離心管中，13 000 r/min離心5 min后棄上清，加入1 mL滅菌清洗液震蕩重懸，10 000 r/min離心5 min后棄上清，加入50 μL清洗液重懸。樣品管內(nèi)加入1管提取固形物，高速震蕩5 min。制備陰、陽(yáng)性對(duì)照樣本，將待檢樣本、陰性、陽(yáng)性對(duì)照瞬時(shí)離心后，加入10 μL內(nèi)參照，95 ℃干浴2 min，立即冰浴2～5 min后13 000 r/min離心1 min，上清液用于PCR檢測(cè)。B族鏈球菌核酸(熒光PCR法)檢測(cè)試劑盒由泰普生物科學(xué)(中國(guó))有限公司提供。檢測(cè)設(shè)備為ABI5000熒光PCR儀。

1.2.3 結(jié)果判定：利用儀器相互配套軟件進(jìn)行自動(dòng)分析，得到各樣品Ct值。當(dāng)樣品Ct值≤23，且有較好的對(duì)數(shù)增長(zhǎng)曲線，內(nèi)參照Ct≤30時(shí)判定為陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

2.1 不同年齡組婦女生殖道GBS感染率比較

揚(yáng)州市不同年齡組婦女生殖道GBS感染率比較見表1。

表1 各年齡組生殖道GBS感染率比較

表1結(jié)果表明：不同的年齡階段婦女生殖道GBS感染存在顯著差異，其中31～35歲GBS感染情況最為嚴(yán)重，感染率達(dá)到6.72%，21～25歲感染情況最輕，感染率為3.16%。<20歲、21～25歲、26～30歲及>35歲年齡組婦女GBS 感染率沒有顯著差異，而與31～35歲年齡組之間存在極顯著差異，表明揚(yáng)州地區(qū)適齡婦女GBS感染情況可能與年齡結(jié)構(gòu)存在一定的關(guān)系。

2.2 不同懷孕情況婦女生殖道GBS感染率比較

揚(yáng)州市適齡婦女不同懷孕情況生殖道GBS感染率比較見表2。

表2 不同懷孕情況生殖道GBS感染率比較

表2結(jié)果顯示：圍產(chǎn)期婦女GBS感染率略高于非妊娠婦女，但是不同懷孕情況適齡婦女生殖道GBS感染并不存在顯著差異,表明懷孕與否對(duì)揚(yáng)州地區(qū)適齡婦女生殖道GBS感染沒有影響。

2.3 不同檢測(cè)季節(jié)生殖道GBS感染

2013年不同檢測(cè)時(shí)間揚(yáng)州市適齡婦女生殖道GBS感染率比較見表3。

表3 2013年不同檢測(cè)時(shí)間生殖道GBS感染率比較

表3結(jié)果表明: 2013年揚(yáng)州市3033例適齡婦女生殖道GBS檢測(cè)中，春季(2～4月)陽(yáng)性檢出率最低，為0.48%，與其他季節(jié)檢測(cè)出陽(yáng)性檢出率存在極顯著差異，而其他各季節(jié)之間沒有顯著差異。

3 討 論

GBS屬β溶血性鏈球菌的一種，為革蘭陽(yáng)性球菌，根據(jù)細(xì)胞壁具特異性的S物質(zhì)，分為Ⅰa、Ⅰb、Ⅰc、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ等至少7個(gè)血清型。所有血清型中，a、Ⅲ及Ⅴ型最常見，占所有分離菌株的60%以上，其中Ⅰa型多見于育齡婦女。大量研究報(bào)道表明，GBS主要通過產(chǎn)道上行擴(kuò)散感染子宮與胎膜，易造成胎兒在子宮內(nèi)感染，嚴(yán)重者可導(dǎo)致胎兒窒息死亡，所以說(shuō)主要與妊娠期婦女及新生兒感染有密切關(guān)系，已經(jīng)成為圍產(chǎn)期感染的重要致病菌之一[4]。近年來(lái)中國(guó)多個(gè)大中醫(yī)院已將GBS檢測(cè)列入婦女圍產(chǎn)期篩查的重要內(nèi)容，提高對(duì)其感染的預(yù)防與治療，可極大地避免造成的不良后果。

GBS檢測(cè)方法最先主要通過對(duì)婦女直腸、生殖道拭子或尿液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)方法，臨床實(shí)驗(yàn)表明，普通培養(yǎng)在檢測(cè)GBS定植上假陰性率可高達(dá)50%，選擇性培養(yǎng)基又存在著檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)的問題[2，5]。各種GBS血清學(xué)檢測(cè)方法，如乳膠凝集、酶聯(lián)免疫吸附、協(xié)同凝集及對(duì)流免疫等，雖可以快速獲得檢測(cè)結(jié)果，但結(jié)果準(zhǔn)確性不高，近年來(lái)臨床應(yīng)用已大為減少。熒光PCR檢測(cè)技術(shù)利用熒光標(biāo)記探針，檢測(cè)臨床標(biāo)本中GBS的特定基因(CAMP)，從而判斷GBS 的存在，不僅特異性高、靈敏性好，而且檢測(cè)周期短，操作簡(jiǎn)便，已在國(guó)內(nèi)各大中醫(yī)院推廣使用[3]。本研究所使用的檢測(cè)方法就是選用熒光PCR檢測(cè)技術(shù)，保證調(diào)查工作的準(zhǔn)確性。

本次研究結(jié)果顯示：揚(yáng)州地區(qū)2013年婦女陰道GBS感染率為4.12%，與紹興市4.6%[6]相仿，遠(yuǎn)低于北京市7.5%～15%[7-9]、沈陽(yáng)市11.2%[10]、佛山市13.7%[11]及桂林市7.5%[12]，而美國(guó)孕婦GBS定植率更是高達(dá)40%～50%。是否不同地區(qū)存在著GBS感染的特異性，尚需要更多地區(qū)GBS感染率調(diào)查數(shù)據(jù)才能分析研究。美國(guó)哈佛大學(xué)Michael Wessels教授[1]認(rèn)為，如果妊娠婦女GBS定植率很低(<5%)，由于成本效益的問題，常規(guī)復(fù)查的價(jià)值不大。從揚(yáng)州市2013年數(shù)據(jù)看似乎在揚(yáng)州市對(duì)GBS定植篩查的意義不明顯，但可看到31～35歲年齡區(qū)GBS感染率仍超過6%，因此仍有必要對(duì)適齡孕婦GBS常規(guī)篩查。

本次研究結(jié)果顯示：不同年齡組GBS感染情況存在顯著差異(P<0.05)，揚(yáng)州地區(qū)婦女31～35歲GBS感染的可能性最高，且與其他年齡組存在著顯著差異(P<0.05)。除去<20歲年齡組因樣本數(shù)較少(n=54)、感染人數(shù)也很少(2人)、

數(shù)據(jù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，GBS 感染情況隨著年齡增長(zhǎng)而增加，直至35歲后出現(xiàn)明顯回落。這一結(jié)果初步表明：揚(yáng)州地區(qū)婦女31～35歲年齡段可能更易受GBS感染，因此更應(yīng)注意對(duì)此類疾病的預(yù)防。

本研究結(jié)果顯示：揚(yáng)州市非妊娠及圍產(chǎn)期婦女GBS感染率沒有顯著差異，與陳恒等[11]在佛山對(duì)不同懷孕情況各500例調(diào)研結(jié)果一致，充分說(shuō)明GBS感染率高低與婦女是否懷孕無(wú)明顯關(guān)聯(lián)，婦女懷孕不是引起GBS感染的原因。而一般GBS帶菌者多無(wú)特殊臨床表現(xiàn)，只有分娩或生殖道手術(shù)進(jìn)入生殖道上段或盆腔才會(huì)引起各類盆腔炎癥。為防止GBS感染對(duì)新生兒的影響，適齡婦女應(yīng)在懷孕前作GBS定植篩查。

[1] Michacl Wessels，曹云，蔣佩如. 圍生期新生兒B族鏈球菌感染[J].中國(guó)循證兒科雜志，2011，6(4): 241.

[2] 許基平,王頻佳. B群鏈球菌快速檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(19): 2380.

[3] 江凌曉，黎春，姜長(zhǎng)宏，等. 應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)快速檢測(cè)B群鏈球菌[J]. 廣東醫(yī)學(xué)，2011，32(5): 575.

[4] 陳恒，江立千，萬(wàn)芳，等. 圍產(chǎn)期B群鏈球菌感染及相關(guān)研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(18): 2370.

[5] 朱敏，范建霞，程利南. 圍產(chǎn)期B族鏈球菌感染的研究進(jìn)展[J]. 中華婦產(chǎn)科雜志,2005,40(2): 137.

[6] 應(yīng)群華，嚴(yán)文衛(wèi)，丁金龍. 圍產(chǎn)期生殖道菌群檢測(cè)和B群鏈球菌篩查[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2006，18(6): 491.

[7] 孫芾，林宏，于俊峰，等. 孕婦B型鏈球菌感染率及藥物敏感性分析[J].江西醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，2005，23(3): 193.

[8] 張景華，袁林，楊永弘，等. 600名健康妊娠婦女及其所娩新生兒B族鏈球菌帶菌情況的研究[J]. 中華流行病學(xué)雜志，1995，16(1): 26.

[9] 孟凡，黃醒華，王維. 妊娠早、期生殖道B族鏈球菌帶菌情況研究[J].北京醫(yī)學(xué)，2004，26(4): 101.

[10] 湯潔，馬向薇，張寧. 孕婦生殖道B族鏈球菌及其他病原微生物感染情況調(diào)查[J]. 中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2010，22(10): 942.

[11] 陳恒，江立千，萬(wàn)芳，等. 圍產(chǎn)期B群鏈球菌感染及相關(guān)研究[J]. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(18): 2370.

[12] 何國(guó)才，白清，李高，等. 桂林地區(qū)孕晚期孕婦B族鏈球菌檢測(cè)及藥敏分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34(15): 2006.