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        正交試驗(yàn)篩選平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基

        2014-09-02 11:10:41劉西周郭成金
        江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年7期
        關(guān)鍵詞:菌絲體生物量

        劉西周 郭成金

        摘要:采用正交試驗(yàn)對(duì)平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。結(jié)果表明,平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯(浸提液)、40 g/L麥麩(浸提液)、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1,pH值自然,28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d,其菌絲體生物量(干質(zhì)量)可達(dá)13.52 g/L。

        關(guān)鍵詞:平田頭菇;液體培養(yǎng)基;菌絲體;生物量;正交分析

        中圖分類號(hào): S646.104+.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2014)07-0261-02

        收稿日期:2013-10-17

        作者簡(jiǎn)介:劉西周(1984—),男, 甘肅隴南人,碩士,助理實(shí)驗(yàn)師,研究方向?yàn)檗O(shè)施化栽培與植物組織培養(yǎng)。

        通信作者:郭成金,教授,研究方向?yàn)檗c植物細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)生理。E-mail:chengjin6866@163.com。平田頭菇[Agrocybe pediades(Fr.)Fayod]屬糞傘科(Bolbitiaceae)田蘑屬(Agrocybe),因具有獨(dú)特的風(fēng)味、豐富的營(yíng)養(yǎng)及特殊的抑腫瘤等藥用價(jià)值,受到越來(lái)越多的關(guān)注[1-2]。平田頭菇主要分布在蘆葦濕地等區(qū)域,但近些年由于濕地面積不斷萎縮,環(huán)境受到嚴(yán)重破壞,野生菌種資源數(shù)量急劇下降。目前對(duì)平田頭菇的研究鮮見(jiàn)報(bào)道,未見(jiàn)其液體培養(yǎng)基篩選相關(guān)研究。本研究通過(guò)對(duì)平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基篩選,旨在為其人工馴化等進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)提供支持。

        1材料與方法

        1.1供試菌種

        平田頭菇子實(shí)體采自天津市七里海濕地,菌種保藏于天津師范大學(xué)蕈菌研究所。

        1.2培養(yǎng)基

        1.2.1PDA綜合培養(yǎng)基[3]200 g/L馬鈴薯,200 g/L棉籽皮,18 g/L瓊脂,20 g/L葡萄糖,3 g/L KH2PO4,1.5 g/L MgSO4,4 mg/L維生素B1,pH值自然。

        1.2.2碳源初選培養(yǎng)基及其配制方法碳源初選培養(yǎng)基:分別以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麥芽糖、200 g/L馬鈴薯(浸提液)、20 g/L玉米渣(浸提液)為供試碳源,加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量維生素B1,pH值自然,配制碳源初選培養(yǎng)基,分裝于100 mL錐形瓶中,每瓶50 mL,每個(gè)處理3次重復(fù),加紗布通氣塞后,0.12 MPa滅菌20 min,備用。

        1.2.3氮源初選培養(yǎng)基及其配制方法氮源初選培養(yǎng)基:分別以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麥麩(浸提液)、3 g/L 硝酸銨、 3 g/L硝酸鉀、3 g/L氯化銨為供試氮源,加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O,pH值自然,分裝于100 mL錐形瓶,每瓶50 mL,每個(gè)處理3次重復(fù),加紗布通氣塞后,0.12 MPa滅菌20 min,備用[4]。

        1.3試驗(yàn)方法

        1.3.1菌絲體培養(yǎng)及其稱重提前4 d將菌種活化。無(wú)菌條件下挑取強(qiáng)壯菌絲體前端,接于平板培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng) 4~5 d 備用。

        從菌落邊緣挑取直徑0.8 cm均勻大小的菌種圓塊,接種于對(duì)應(yīng)的液體培養(yǎng)基,每瓶3塊,28 ℃靜置2 d,搖瓶 5 min/d。

        將濾紙編號(hào)、稱重,恒溫培養(yǎng)10 d后將培養(yǎng)產(chǎn)物抽濾,于80 ℃烘干至恒重并稱重,2次質(zhì)量差值為菌絲體生物量(干質(zhì)量)。

        1.3.2碳源、氮源培養(yǎng)基正交試驗(yàn)根據(jù)碳源、氮源初選培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)結(jié)果,從中各選出2個(gè)最適合的碳源和氮源,按L9(34)設(shè)計(jì)4 因素3 水平正交試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)選,與3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 維生素B1組成9個(gè)試驗(yàn)配方,正交因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

        3結(jié)論

        研究表明,平田頭菇培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯(浸提液)、40 g/L麥麩(浸提液)、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1,pH值自然,28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d,其菌絲體生物量(干重)可達(dá)13.52 g/L。本研究為平田頭菇人工馴化等進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

        參考文獻(xiàn):

        [1]戴玉成,楊祝良. 中國(guó)藥用真菌名錄及部分名稱的修訂[J]. 菌物學(xué)報(bào),2008,27(6):801-824.

        [2]周會(huì)明,柴紅梅,趙永昌. 田頭菇屬真菌研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)食用菌,2009,28(6):3-8.

        [3]郭成金. 蕈菌生物學(xué)[M]. 天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社,2005:159.

        [4]劉西周,郭成金.采 用L9(34)正交設(shè)計(jì)方法篩選血耳菌絲體液體培養(yǎng)基[J]. 中國(guó)食用菌,2009,28(1):36-38.

        [5]邢來(lái)君,李明春. 普通真菌學(xué)[M]. 北京:高等教育出版社,1999:50-58.

        [6]李春喜. 生物統(tǒng)計(jì)學(xué)[M]. 北京:科學(xué)出版社,1997:263-265.

        [7]王振河,萬(wàn)學(xué)東,武忠偉,等. 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化裂褶菌發(fā)酵全液多糖提取工藝[J]. 中國(guó)野生植物資源,2007,26(4):50-51,56.

        [8]王戰(zhàn)勇,張建東,李瑩,等. 北蟲草液體培養(yǎng)基的研究[J]. 遼寧石油化工大學(xué)學(xué)報(bào),2004,24(1):19-21,25.

        [9]陳文強(qiáng),鄧百萬(wàn),陳永剛,等. 用L9(34)正交試驗(yàn)篩選裂褶菌液體培養(yǎng)基[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2005,24(4):38-41.endprint

        摘要:采用正交試驗(yàn)對(duì)平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。結(jié)果表明,平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯(浸提液)、40 g/L麥麩(浸提液)、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1,pH值自然,28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d,其菌絲體生物量(干質(zhì)量)可達(dá)13.52 g/L。

        關(guān)鍵詞:平田頭菇;液體培養(yǎng)基;菌絲體;生物量;正交分析

        中圖分類號(hào): S646.104+.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2014)07-0261-02

        收稿日期:2013-10-17

        作者簡(jiǎn)介:劉西周(1984—),男, 甘肅隴南人,碩士,助理實(shí)驗(yàn)師,研究方向?yàn)檗O(shè)施化栽培與植物組織培養(yǎng)。

        通信作者:郭成金,教授,研究方向?yàn)檗c植物細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)生理。E-mail:chengjin6866@163.com。平田頭菇[Agrocybe pediades(Fr.)Fayod]屬糞傘科(Bolbitiaceae)田蘑屬(Agrocybe),因具有獨(dú)特的風(fēng)味、豐富的營(yíng)養(yǎng)及特殊的抑腫瘤等藥用價(jià)值,受到越來(lái)越多的關(guān)注[1-2]。平田頭菇主要分布在蘆葦濕地等區(qū)域,但近些年由于濕地面積不斷萎縮,環(huán)境受到嚴(yán)重破壞,野生菌種資源數(shù)量急劇下降。目前對(duì)平田頭菇的研究鮮見(jiàn)報(bào)道,未見(jiàn)其液體培養(yǎng)基篩選相關(guān)研究。本研究通過(guò)對(duì)平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基篩選,旨在為其人工馴化等進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)提供支持。

        1材料與方法

        1.1供試菌種

        平田頭菇子實(shí)體采自天津市七里海濕地,菌種保藏于天津師范大學(xué)蕈菌研究所。

        1.2培養(yǎng)基

        1.2.1PDA綜合培養(yǎng)基[3]200 g/L馬鈴薯,200 g/L棉籽皮,18 g/L瓊脂,20 g/L葡萄糖,3 g/L KH2PO4,1.5 g/L MgSO4,4 mg/L維生素B1,pH值自然。

        1.2.2碳源初選培養(yǎng)基及其配制方法碳源初選培養(yǎng)基:分別以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麥芽糖、200 g/L馬鈴薯(浸提液)、20 g/L玉米渣(浸提液)為供試碳源,加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量維生素B1,pH值自然,配制碳源初選培養(yǎng)基,分裝于100 mL錐形瓶中,每瓶50 mL,每個(gè)處理3次重復(fù),加紗布通氣塞后,0.12 MPa滅菌20 min,備用。

        1.2.3氮源初選培養(yǎng)基及其配制方法氮源初選培養(yǎng)基:分別以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麥麩(浸提液)、3 g/L 硝酸銨、 3 g/L硝酸鉀、3 g/L氯化銨為供試氮源,加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O,pH值自然,分裝于100 mL錐形瓶,每瓶50 mL,每個(gè)處理3次重復(fù),加紗布通氣塞后,0.12 MPa滅菌20 min,備用[4]。

        1.3試驗(yàn)方法

        1.3.1菌絲體培養(yǎng)及其稱重提前4 d將菌種活化。無(wú)菌條件下挑取強(qiáng)壯菌絲體前端,接于平板培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng) 4~5 d 備用。

        從菌落邊緣挑取直徑0.8 cm均勻大小的菌種圓塊,接種于對(duì)應(yīng)的液體培養(yǎng)基,每瓶3塊,28 ℃靜置2 d,搖瓶 5 min/d。

        將濾紙編號(hào)、稱重,恒溫培養(yǎng)10 d后將培養(yǎng)產(chǎn)物抽濾,于80 ℃烘干至恒重并稱重,2次質(zhì)量差值為菌絲體生物量(干質(zhì)量)。

        1.3.2碳源、氮源培養(yǎng)基正交試驗(yàn)根據(jù)碳源、氮源初選培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)結(jié)果,從中各選出2個(gè)最適合的碳源和氮源,按L9(34)設(shè)計(jì)4 因素3 水平正交試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)選,與3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 維生素B1組成9個(gè)試驗(yàn)配方,正交因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

        3結(jié)論

        研究表明,平田頭菇培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯(浸提液)、40 g/L麥麩(浸提液)、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1,pH值自然,28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d,其菌絲體生物量(干重)可達(dá)13.52 g/L。本研究為平田頭菇人工馴化等進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

        參考文獻(xiàn):

        [1]戴玉成,楊祝良. 中國(guó)藥用真菌名錄及部分名稱的修訂[J]. 菌物學(xué)報(bào),2008,27(6):801-824.

        [2]周會(huì)明,柴紅梅,趙永昌. 田頭菇屬真菌研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)食用菌,2009,28(6):3-8.

        [3]郭成金. 蕈菌生物學(xué)[M]. 天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社,2005:159.

        [4]劉西周,郭成金.采 用L9(34)正交設(shè)計(jì)方法篩選血耳菌絲體液體培養(yǎng)基[J]. 中國(guó)食用菌,2009,28(1):36-38.

        [5]邢來(lái)君,李明春. 普通真菌學(xué)[M]. 北京:高等教育出版社,1999:50-58.

        [6]李春喜. 生物統(tǒng)計(jì)學(xué)[M]. 北京:科學(xué)出版社,1997:263-265.

        [7]王振河,萬(wàn)學(xué)東,武忠偉,等. 正交設(shè)計(jì)優(yōu)化裂褶菌發(fā)酵全液多糖提取工藝[J]. 中國(guó)野生植物資源,2007,26(4):50-51,56.

        [8]王戰(zhàn)勇,張建東,李瑩,等. 北蟲草液體培養(yǎng)基的研究[J]. 遼寧石油化工大學(xué)學(xué)報(bào),2004,24(1):19-21,25.

        [9]陳文強(qiáng),鄧百萬(wàn),陳永剛,等. 用L9(34)正交試驗(yàn)篩選裂褶菌液體培養(yǎng)基[J]. 食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2005,24(4):38-41.endprint

        摘要:采用正交試驗(yàn)對(duì)平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。結(jié)果表明,平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯(浸提液)、40 g/L麥麩(浸提液)、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1,pH值自然,28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d,其菌絲體生物量(干質(zhì)量)可達(dá)13.52 g/L。

        關(guān)鍵詞:平田頭菇;液體培養(yǎng)基;菌絲體;生物量;正交分析

        中圖分類號(hào): S646.104+.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2014)07-0261-02

        收稿日期:2013-10-17

        作者簡(jiǎn)介:劉西周(1984—),男, 甘肅隴南人,碩士,助理實(shí)驗(yàn)師,研究方向?yàn)檗O(shè)施化栽培與植物組織培養(yǎng)。

        通信作者:郭成金,教授,研究方向?yàn)檗c植物細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)生理。E-mail:chengjin6866@163.com。平田頭菇[Agrocybe pediades(Fr.)Fayod]屬糞傘科(Bolbitiaceae)田蘑屬(Agrocybe),因具有獨(dú)特的風(fēng)味、豐富的營(yíng)養(yǎng)及特殊的抑腫瘤等藥用價(jià)值,受到越來(lái)越多的關(guān)注[1-2]。平田頭菇主要分布在蘆葦濕地等區(qū)域,但近些年由于濕地面積不斷萎縮,環(huán)境受到嚴(yán)重破壞,野生菌種資源數(shù)量急劇下降。目前對(duì)平田頭菇的研究鮮見(jiàn)報(bào)道,未見(jiàn)其液體培養(yǎng)基篩選相關(guān)研究。本研究通過(guò)對(duì)平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基篩選,旨在為其人工馴化等進(jìn)一步研究開(kāi)發(fā)提供支持。

        1材料與方法

        1.1供試菌種

        平田頭菇子實(shí)體采自天津市七里海濕地,菌種保藏于天津師范大學(xué)蕈菌研究所。

        1.2培養(yǎng)基

        1.2.1PDA綜合培養(yǎng)基[3]200 g/L馬鈴薯,200 g/L棉籽皮,18 g/L瓊脂,20 g/L葡萄糖,3 g/L KH2PO4,1.5 g/L MgSO4,4 mg/L維生素B1,pH值自然。

        1.2.2碳源初選培養(yǎng)基及其配制方法碳源初選培養(yǎng)基:分別以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麥芽糖、200 g/L馬鈴薯(浸提液)、20 g/L玉米渣(浸提液)為供試碳源,加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量維生素B1,pH值自然,配制碳源初選培養(yǎng)基,分裝于100 mL錐形瓶中,每瓶50 mL,每個(gè)處理3次重復(fù),加紗布通氣塞后,0.12 MPa滅菌20 min,備用。

        1.2.3氮源初選培養(yǎng)基及其配制方法氮源初選培養(yǎng)基:分別以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麥麩(浸提液)、3 g/L 硝酸銨、 3 g/L硝酸鉀、3 g/L氯化銨為供試氮源,加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O,pH值自然,分裝于100 mL錐形瓶,每瓶50 mL,每個(gè)處理3次重復(fù),加紗布通氣塞后,0.12 MPa滅菌20 min,備用[4]。

        1.3試驗(yàn)方法

        1.3.1菌絲體培養(yǎng)及其稱重提前4 d將菌種活化。無(wú)菌條件下挑取強(qiáng)壯菌絲體前端,接于平板培養(yǎng)基上,28 ℃培養(yǎng) 4~5 d 備用。

        從菌落邊緣挑取直徑0.8 cm均勻大小的菌種圓塊,接種于對(duì)應(yīng)的液體培養(yǎng)基,每瓶3塊,28 ℃靜置2 d,搖瓶 5 min/d。

        將濾紙編號(hào)、稱重,恒溫培養(yǎng)10 d后將培養(yǎng)產(chǎn)物抽濾,于80 ℃烘干至恒重并稱重,2次質(zhì)量差值為菌絲體生物量(干質(zhì)量)。

        1.3.2碳源、氮源培養(yǎng)基正交試驗(yàn)根據(jù)碳源、氮源初選培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)結(jié)果,從中各選出2個(gè)最適合的碳源和氮源,按L9(34)設(shè)計(jì)4 因素3 水平正交試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)選,與3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 維生素B1組成9個(gè)試驗(yàn)配方,正交因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表1。

        3結(jié)論

        研究表明,平田頭菇培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯(浸提液)、40 g/L麥麩(浸提液)、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1,pH值自然,28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d,其菌絲體生物量(干重)可達(dá)13.52 g/L。本研究為平田頭菇人工馴化等進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。

        參考文獻(xiàn):

        [1]戴玉成,楊祝良. 中國(guó)藥用真菌名錄及部分名稱的修訂[J]. 菌物學(xué)報(bào),2008,27(6):801-824.

        [2]周會(huì)明,柴紅梅,趙永昌. 田頭菇屬真菌研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)食用菌,2009,28(6):3-8.

        [3]郭成金. 蕈菌生物學(xué)[M]. 天津:天津科學(xué)技術(shù)出版社,2005:159.

        [4]劉西周,郭成金.采 用L9(34)正交設(shè)計(jì)方法篩選血耳菌絲體液體培養(yǎng)基[J]. 中國(guó)食用菌,2009,28(1):36-38.

        [5]邢來(lái)君,李明春. 普通真菌學(xué)[M]. 北京:高等教育出版社,1999:50-58.

        [6]李春喜. 生物統(tǒng)計(jì)學(xué)[M]. 北京:科學(xué)出版社,1997:263-265.

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