李留霞，李冰熠，李秀芳，張?zhí)m蘭，王凱娟，張建營

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 鄭州 450001 3)河南省腫瘤流行病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 鄭州 450052

上皮性卵巢癌組織中IMP1的表達(dá)

李留霞1)△，李冰熠1)，李秀芳1)，張?zhí)m蘭1)，王凱娟2,3)，張建營2,3)

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 鄭州 450001 3)河南省腫瘤流行病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 鄭州 450052

△女，1962年11月生，博士，主任醫(yī)師，教授，研究方向：婦科腫瘤及婦科內(nèi)分泌，E-mail：llxia698@163.com

上皮性卵巢癌；IMP1

卵巢癌是婦科常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在女性生殖道惡性腫瘤中僅次于宮頸癌和子宮內(nèi)膜癌，但其病死率居女性生殖道惡性腫瘤首位[1],其發(fā)生發(fā)展機(jī)制至今未明。胰島素樣生長因子Ⅱ mRNA結(jié)合蛋白1(insulin-like growth factorⅡmRNA-binding protein 1，IMP1)是一種胰島素樣生長因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)mRNA結(jié)合蛋白，研究[2]證明IGF-Ⅱ mRNA在卵巢癌組織中高表達(dá)，但是關(guān)于IGF-Ⅱ的轉(zhuǎn)錄翻譯調(diào)控子之一的IMP1在卵巢癌組織中的表達(dá)及其與卵巢癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究甚少。該研究旨在探討IMP1在卵巢癌組織中的表達(dá)情況，進(jìn)一步了解卵巢癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制。

1 材料與方法

1．1材料收集2011年9月至2013年3月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院及鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院手術(shù)切除的標(biāo)本95例，經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為上皮性卵巢癌組織47例，患者年齡29～76歲；卵巢上皮性良性腫瘤組織28例，患者年齡15～71歲；正常卵巢上皮組織20例，患者年齡21～65歲。正常卵巢上皮組織來源于因子宮疾病行子宮加雙附件切除術(shù)的患者。上皮性卵巢癌患者中，漿液性囊腺癌32例,黏液性囊腺癌10例，子宮內(nèi)膜樣癌5例；FIGO分期：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期29例；低分化27例，中高分化20例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例；有腹水27例，無腹水20例；術(shù)前均未行放療和化療。卵巢上皮性良性腫瘤中，漿液性囊腺瘤17例，黏液性囊腺瘤11例。所有標(biāo)本離體后迅速切為兩份，一份置液氮速凍后轉(zhuǎn)-80 ℃冰箱保存，用于RT-PCR檢測；另一份經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%中性甲醛固定, 石蠟包埋, 連續(xù)3 μm厚切片，用于免疫組化染色。

1.3 3種卵巢組織中IMP1mRNA的檢測采用Trizol(購自Transgene公司)抽提RNA，應(yīng)用Promega試劑盒逆轉(zhuǎn)錄RNA。引物序列：IMP1，正義，5’-ACTTTCCATGCTGGGACTT-3’,反義，5’-GCTGAT GCCTCTGTTCCCTCT-3’，片段大小334 bp；內(nèi)參β-actin，正義，5’-GGGAAATCGTGCGTGACATT-3’, 反義，5’-GGACTCGTCATACTCCTGCTTG-3’，片段大小478 bp。擴(kuò)增條件：94 ℃變性2 min；94 ℃變性30 s, 55 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，共35個(gè)循環(huán)；72 ℃總延伸6 min。20 g/L瓊脂糖凝膠電泳，電壓4～10 V/cm。EB染色，在紫外線投射儀下觀察電泳條帶，用D-140圖像記錄分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，拍照。IMP1 mRNA的相對表達(dá)量以IMP1條帶和β-actin條帶灰度值的比值表示。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。不同組織間IMP1蛋白陽性率的比較及IMP1蛋白陽性表達(dá)率與上皮性卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)；不同組織間IMP1 mNRA相對表達(dá)量的比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Bonferroni法；上皮性卵巢癌石蠟切片中IMP1蛋白表達(dá)量與相應(yīng)新鮮組織中IMP1 mRNA表達(dá)量的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)進(jìn)行分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 3種卵巢組織中IMP1蛋白的表達(dá)上皮性卵巢癌、卵巢上皮性良性腫瘤及正常卵巢上皮組織中IMP1蛋白陽性表達(dá)率分別為85.1%(40/47)、32.1%(9/28)、10.0%(2/20)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且上皮性卵巢癌組織中IMP1蛋白陽性表達(dá)率高于卵巢上皮性良性腫瘤及正常卵巢上皮組織。見圖1和表1。

圖1 3種卵巢組織中IMP1蛋白表達(dá)情況(SP，×400)

表1 3種卵巢組織中IMP1蛋白表達(dá)情況的比較

*:3種組織間比較，χ2=39.239，P<0.001；#：與上皮性卵巢癌組織比較，P<0.001。

2.2IMP1蛋白表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系上皮性卵巢癌組織中IMP1蛋白表達(dá)與FIGO分期和組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腹水無關(guān)，見表2。

表2 IMP1蛋白表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

*:校正χ2檢驗(yàn)。

2.3 3種卵巢組織中IMP1mRNA的表達(dá)95例卵巢組織標(biāo)本中均可見約478 bp的擴(kuò)增條帶(β-actin)，同時(shí)可見約334 bp的擴(kuò)增條帶(IMP1)。見圖2和表3。

圖2 3種卵巢組織中IMP1 mRNA的表達(dá)情況

1：正常卵巢上皮組織；2：卵巢上皮性良性腫瘤組織；3：上皮性卵巢癌組織。

表3 3種卵巢組織中IMP1 mRNA相對表達(dá)量比較

F=990.674，P<0.001；*：與上皮性卵巢癌組織比較，P<0.001。

2.4IMP1蛋白與mRNA表達(dá)的關(guān)系相關(guān)分析結(jié)果顯示，上皮性卵巢癌組織中IMP1蛋白與mRNA表達(dá)呈正相關(guān)(rS=0.869,P<0.001)。

3 討論

IMPs主要在早期胚胎發(fā)育階段和妊娠中期表達(dá)，參與結(jié)合、轉(zhuǎn)運(yùn)和穩(wěn)定IGF-Ⅱ基因的胚胎亞型[4]，被認(rèn)為是癌胚蛋白，常常在許多腫瘤組織中過度表達(dá)。文獻(xiàn)[5-8]報(bào)道，結(jié)腸直腸癌、骨癌、軟組織肉瘤、乳癌及非小細(xì)胞肺癌組織中均有IMPs表達(dá)。前期該課題組[9]用ELISA方法檢測正常人和上皮性卵巢癌患者血液中IMP1蛋白含量，發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且在上皮性卵巢癌患者血清中IMP1蛋白陽性率為16.7%。該研究發(fā)現(xiàn)上皮性卵巢癌組織IMP1蛋白陽性表達(dá)率為85.1%，卵巢上皮性良性腫瘤組織IMP1蛋白陽性表達(dá)率為32.1%，正常卵巢上皮組織IMP1蛋白陽性表達(dá)率為10.0%，上皮性卵巢癌組織高于后兩者。該結(jié)果與前期研究結(jié)果存在差異可能是由于IMP1蛋白的分泌機(jī)制所致。

IMPs屬于RNA結(jié)合蛋白家族成員,有3個(gè)類似蛋白(IMP1、IMP2和IMP3),能夠高度特異地結(jié)合編碼IGF-Ⅱ的mRNA,參與IGF-ⅡmRNA的定位及其穩(wěn)定性、反轉(zhuǎn)錄和翻譯的調(diào)節(jié)[10-11]。該研究發(fā)現(xiàn)IMP1蛋白在不同F(xiàn)IGO分期和組織學(xué)分級(jí)的上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而IMP1蛋白表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及有無腹水無關(guān)。這些結(jié)果均提示IMP1表達(dá)可能與上皮性卵巢癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

基于RT-PCR技術(shù)該研究發(fā)現(xiàn)，IMP1 mRNA在47例上皮性卵巢癌組織中的相對表達(dá)量高于28例卵巢上皮性良性腫瘤和20例正常卵巢上皮組織的相對表達(dá)量，而后2種組織中IMP1 mRNA相對表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與免疫組化結(jié)果相一致。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，免疫組化染色結(jié)果與RT-PCR結(jié)果呈正相關(guān)，即IMP1的蛋白水平與mRNA水平呈正相關(guān)。綜上所述，研究卵巢癌組織中IMP1的表達(dá)有望為卵巢癌的診斷、轉(zhuǎn)移及預(yù)后判定、靶向治療提供一個(gè)新的分子生物學(xué)標(biāo)記物。

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(2013-08-22收稿 責(zé)任編輯姜春霞)

Expression of IMP1 in epithelial ovarian cancer tissue

LILiuxia1),LIBingyi1),LIXiufang1),ZHANGLanlan1),WANGKaijuan2,3),ZHANGJianying2,3)

1)DepartmentofGynecologyandObstetrics,theFirstAffiliatedHospital,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052 2)CollegeofPublicHealth,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001 3)CancerEpidemiologyKeyLaboratoryinHenanProvince,Zhengzhou450052

epithelial ovarian cancer; IMP1

10.13705/j.issn.1671-6825.2014.03.023

R737.31