王磊 王煒 王照 尹海軍 徐學軍 張傳光 張愛民 高景宇

·論著·

COX-2及PCNA在腺性膀胱炎中的表達及臨床意義

王磊 王煒 王照 尹海軍 徐學軍 張傳光 張愛民 高景宇

目的探討環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)與增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在腺性膀胱炎中的表達及其臨床意義。方法應用免疫組織化學方法，檢測20例正常膀胱黏膜、30例腺性膀胱炎、20例膀胱移行細胞癌中COX-2及PCNA的表達。結果COX-2在腺性膀胱炎中表達陽性率比其在正常膀胱黏膜中表達的陽性率有所增高，比其在膀胱移行細胞癌中表達的陽性率有所降低，但均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；PCNA在腺性膀胱炎中表達的陽性率顯著高于其在正常膀胱黏膜中表達的陽性率(P<0.05)，與其在膀胱移行細胞癌中表達的陽性率比較，有所降低，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。COX-2和PCNA在膀胱移行細胞癌中表達的陽性率均顯著高于其在正常膀胱黏膜中表達的陽性率(P<0.05)。結論COX-2及PCNA的表達在膀胱腫瘤的發(fā)生中起重要作用，推測腺性膀胱炎為良性病變，有向惡性病變發(fā)展的潛能，COX-2及PCNA在研究腺性膀胱炎與膀胱腫瘤的關系中具有重要意義。

腺性膀胱炎；膀胱移行細胞癌；COX-2；PCNA；免疫組織化學

近年來研究表明，環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)除參與炎性反應外，其過度表達與多種上皮性腫瘤發(fā)生發(fā)展關系密切，包括前列腺腫瘤、膀胱腫瘤等，并可作為預防及治療腫瘤的靶分子[1,2]。此外，研究表明增殖細胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的陽性表達程度與腫瘤的增殖活性、轉移復發(fā)率及預后情況有顯著的相關性[3,4]，現(xiàn)已成為檢測腫瘤細胞增殖動力的有效指標。本研究應用免疫組織化學方法觀察了COX-2及PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎和膀胱移行細胞癌中的表達情況，以探討二者在腺性膀胱炎中的表達及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料選擇 采用河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院2006至2008年人正常膀胱黏膜20例、腺性膀胱炎標本30例、膀胱移行細胞癌20例。所有標本均經病理證實。其中腺性膀胱炎標本均為術前活檢標本。正常膀胱黏膜為活檢標本。膀胱移行細胞癌標本為經尿道膀胱腫瘤電切術后及膀胱全切術后標本。術前未行任何治療。病理分級按WHO分級標準，其中G1級11例，G2級6例，G3級3例。臨床分期按UICC-TNM標準，根據(jù)臨床及病理資料確定，其中Tis-T1(淺表性)15例，T2-T4(浸潤性)5例。

1.2 主要儀器及試劑 鼠抗人COX-2單克隆抗體(美國Santa Cruz公司產品)；鼠抗人PCNA單克隆抗體(美國Santa Cruz公司產品)；DAB試劑盒；S-P試劑盒。以上產品購于河北博海生物工程開發(fā)有限公司。

1.3 免疫組織化學法 從所取標本上切取小于0.5 cm×0.5 cm×0.1 cm的組織塊，用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋。石蠟切片脫蠟至水后，1%甲醇雙氧水，室溫孵育10 min，微波修復抗原，冷卻至室溫后，滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min，甩去血清后滴加COX-2或PCNA一抗，置4℃濕盒中過夜。0.01 mol/L PBS沖洗3次×5 min，滴加生物素化二抗37℃孵育20 min。0.01 mol/L PBS沖洗3次×5 min，滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育20 min。0.01 mol/L PBS沖洗3次×5 min，將DAB顯色試劑盒中顯色劑A、B、C各一滴加入1 ml蒸餾水中，混勻，加至切片上，顯微鏡下控制顯色時間。最后用蘇木素復染(PCNA不復染)。每次實驗均設陰性對照，以PBS代替一抗。

1.4 免疫組織化學染色判斷標準 COX-2陽性染色表現(xiàn)為以細胞漿中可見棕黃色或棕褐色顆粒，不著色為陰性。PCNA以細胞核發(fā)現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色。借助多功能真彩色細胞圖像分析系統(tǒng)，每張切片連續(xù)觀察5個高倍視野(400倍)，計算出各自的陽性細胞百分率。染色結果結合陽性細胞百分率和染色強度進行半定量分析。結果判定標準：染色陰性為0分，染色弱淺黃色為1分，染色清晰棕黃色為2分，染色強呈棕褐色為3分；陽性細胞百分率<10%為0分，10%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分。兩項指標之和≤2分為陰性，>2分為陽性。

1.5 統(tǒng)計學分析 應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 COX-2和PCNA在腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌及正常膀胱黏膜中的表達 COX-2在正常膀胱黏膜中的陽性表達率為5%(1/20)，在腺性膀胱炎中的表達陽性率為30%(9/30)，在膀胱移行細胞癌中表達陽性率為55%(11/20)。PCNA在正常膀胱黏膜無陽性表達(0/20)，在腺性膀胱炎中表達陽性率為26.67%(8/30)，在膀胱移行細胞癌中表達陽性率為45%(9/20)。見表1、2，圖1、2。

2.2 COX-2在腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌及正常膀胱黏膜中表達的關系 COX-2在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎與膀胱移行細胞癌3組間表達的陽性率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與正常膀胱黏膜表達的陽性率相比，COX-2在膀胱移行細胞癌中表達的陽性率顯著增高(P<0.05)，在腺性膀胱炎中表達的陽性率也增高，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與膀胱移行細胞癌表達的陽性率相比，COX-2在腺性膀胱炎中表達的陽性率降低，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

2.3 PCNA在腺性膀胱炎、膀胱移行細胞癌及正常膀胱粘膜中表達的關系 PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎與膀胱移行細胞癌三組間表達的陽性率差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PCNA在正常膀胱黏膜中無表達，但在腺性膀胱炎和膀胱移行細胞癌中表達的陽性率則顯著增高(P<0.05)；與膀胱移行細胞癌相比，PCNA在腺性膀胱炎中表達的陽性率較低，但二者的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

圖1 COX-2在各組織中的表達(400×)

圖2 PCNA在各組織中的表達(400×)

表1 COX-2在3組組織中表達的比較 例(%)

表2 PCNA在3種組織中表達的比較 例(%)

3 討論

近年來隨著腔內泌尿外科的發(fā)展，臨床和病理醫(yī)師對本病的認識逐漸提高，腺性膀胱炎確診率有增高趨勢。關于腺性膀胱炎與膀胱腫瘤的關系，目前仍有爭論。雖然，腺性膀胱炎(特別是腸上皮型)發(fā)展為膀胱腺癌的病例也時有報道[5-7]，但要證實腺性膀胱炎為膀胱腫瘤的癌前病變尚缺乏確切的證據(jù)。膀胱癌是我國泌尿系統(tǒng)發(fā)病率最高的惡性腫瘤，術后復發(fā)或轉移是導致治療失敗的常見原因，因此，研究腺性膀胱炎和膀胱移行細胞癌之間的關系，對于早期發(fā)現(xiàn)膀胱癌、降低術后復發(fā)或轉移，提高患者的生存率具有重要意義。

環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase，COX)是催化花生四烯酸轉化為重要活性物質前列腺素初始步驟的關鍵限速酶。哺乳動物的COX有兩種形式，即COX-1及COX-2。COX-1在正常人體表達于大多數(shù)組織中，其催化產生的前列素參與維持機體正常的生理功能。COX-2是一種誘導酶，其過度表達參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展[8]。本研究結果顯示，COX-2在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎與膀胱移行細胞癌三組間表達的陽性率有顯著性差異，提示COX-2可用于研究腺性膀胱炎與膀胱腫瘤的關系。但COX-2在腺性膀胱炎的表達陽性率與正常膀胱黏膜及膀胱移行細胞癌的表達陽性率相比，均無差異，可能與研究樣本量偏少有關，需進一步加大樣本量進行研究。COX-2在腺性膀胱炎中的表達陽性率界于正常膀胱黏膜和膀胱移行細胞癌之間。推測腺性膀胱炎可能具有正常膀胱黏膜向膀胱移行細胞癌過渡的表現(xiàn)。此外，COX-2在膀胱移行細胞癌中的表達陽性率顯著高于正常膀胱黏膜表達的陽性率，提示COX-2參與膀胱腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

PCNA作為真核細胞DNA聚合酶δ的輔助蛋白，協(xié)調DNA的復制過程。同時，PCNA還作為功能轉換因子，通過不同調控方式與多種細胞因子作用，參與DNA損傷修復、細胞周期調控及凋亡等許多重要的細胞事件，且與腫瘤等細胞增殖性疾病的發(fā)生發(fā)展存在相關性[9]。在PCNA與膀胱腫瘤關系的研究中發(fā)現(xiàn)，PCNA在膀胱癌中有較高表達率，并且其表達與判斷預后的指標如腫瘤病理分級、臨床分期等也具有相關性，因此，PCNA的表達可作為判斷膀胱癌預后的指標之一。本研究結果顯示，PCNA在正常膀胱黏膜、腺性膀胱炎與膀胱移行細胞癌三組間表達的陽性率有顯著性差異，提示PCNA可用于研究腺性膀胱炎與膀胱腫瘤的關系。PCNA在腺性膀胱炎與膀胱移行細胞癌表達的陽性率均顯著高于正常膀胱黏膜表達的陽性率，推測腺性膀胱炎的增殖活性介于正常膀胱黏膜與膀胱移行細胞癌之間，提示腺性膀胱炎具有惡變潛能。

綜上所述，腺性膀胱炎可能具有正常膀胱粘膜向膀胱移行細胞癌過渡的表現(xiàn)，COX-2及PCNA在研究腺性膀胱炎與膀胱腫瘤的關系中具有重要意義。

1 Lee JY,Myung SK,Song YS.Prognostic role of cyclooxygenase-2 in epithelial ovarian cancer: a meta-analysis of observational studies.Gynecol Oncol,2013,129:613-619.

2 陳忠軍,佃俊.CXCR4和COX-2在膀胱癌中的表達及其意義.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學,2012,20:771-773.

3 Cappello F,Ribbene A,Campanella C,et al.The value of immunohistochemical research on PCNA,p53 and heat shock proteins in prostate cancer management: a review.Eur J Histochem,2006,50:25-34.

4 Qasim BJ,Ali HH,Hussein AG.Immunohistochemical expression of PCNA and CD34 in colorectal adenomas and carcinomas using specified automated cellular image analysis system: A clinicopathologic study.Saudi J Gastroenterol,2012,18:268-276.

5 Heyns CF,De Kock ML,Kirsten PH,et al.Pelvic lipomatosis associated with cystitis glandularis and adenocarcinoma of the bladder.J Urol,1991,145:364-366.

6 Thrasher JB,Rajan RR,Perez LM,et al.Cystitis glandularis.Transition to adenocarcinoma of the urinary bladder.N C Med J,1994,55:562-564.

7 Szen S,Gürocak S,Uzüm N,et al.The importance of re-evaluation in patients with cystitis glandularis associated with pelvic lipomatosis: a case report.Urol Oncol,2004,22:428-430.

8 Zhu Z,Shen Z,Xu C.Inflammatory pathways as promising targets to increase chemotherapy response in bladder cancer.Mediators Inflamm,2012,2012:528690.

9 Strzalka W,Ziemienowicz A.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA): a key factor in DNA replication and cell cycle regulation.Ann Bot,2011,107:1127-1140.

ExpressionandclinicalsignificanceofCOX-2andPCNAincystitisglandularis

WANGLei*,WANGWei,WANGZhao*,etal.*DepartmentofUrology,TheFirstHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050031,China

ObjectiveTo explore the expression and clinical significance of cyclooxygenase-2 (COX-2) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in cystitis glandularis.MethodsThe immunohistochemistry was used to examine the expression levels of COX-2 and PCNA in 20 cases of normal mucosa of bladder,30 cases of cystitis glandularis and 20 cases of transitional cell carcinoma of bladder.ResultsThe positive expression rate of COX-2 in cystitis glandularis was 30% (9/30),which was higher than that in normal mucosa of bladder (5%,1/20),however,which was lower than that in transitional cell carcinoma of bladder (55%,11/20),but there were no significances among them (P>0.05).The positive expression rate of PCNA in cystitis glandularis was 26.67%(8/30),which was significantly higher than that in normal mucosa of bladder (0,0/20) (P<0.05),which was lower than that in transitional cell carcinoma of bladder,but there was no significant difference among them (P>0.05).The positive expression rates both COX-2 and PCNA in transitional cell carcinoma of bladder were significantly higher than those in normal mucosa of bladder (P<0.05).ConclusionThe expression of COX-2 and PCNA plays an important role in the pathogenesis of bladder neoplasms,and cystitis glandularis is benign lesion,however,which has potentiality to become malignant lesion,so the study about the correlation between expression of COX-2,PCNA in cystitis glandularis and pathogenesis of bladder neoplasms has important significance.

cystitis glandularis; transitional cell carcinoma of bladder; COX-2; PCNA; immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2014.10.006

項目來源：河北省科學技術研究與發(fā)展支撐計劃項目(編號：112761139)

050031 石家莊市，河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院泌尿外科(王磊、王照、尹海軍、徐學軍、張傳光、張愛民、高景宇)；河北省承德市疾病預防控制中心(王煒)

R 694.3

A

1002-7386(2014)10-1458-03

2013-11-29)