★ 林艷

(中山市人民醫(yī)院 廣東 中山 528403)

藏藥有著悠久應(yīng)用歷史，是醫(yī)藥寶庫(kù)的重要組成部分?！吨袊?guó)藥典》2010年版一部中的藏藥七味鐵屑丸[1]始載于藏醫(yī)名家米彭朗杰嘉措的《集藥利樂(lè)庫(kù)》[2]，由鐵屑(訶子制)、北寒水石(奶制)、藏木香等七味組成，具有行氣活血、平肝清熱止痛之功效，主治肝區(qū)疼痛、肝臟腫大病癥，臨床研究表明其在治療脂肪肝方面療效顯著。但傳統(tǒng)七味鐵屑丸制劑為水泛丸，味苦而粒徑較大，使用時(shí)需將其研碎，患者服用不便，且無(wú)法進(jìn)行崩解度、溶出度等現(xiàn)代藥品質(zhì)量檢測(cè)要求，不利于該制劑的市場(chǎng)推廣和發(fā)展，不能更好的為臨床需求服務(wù)。

本課題組采用快速攪拌制粒方法制備顆粒灌裝膠囊，提高生產(chǎn)效率，并方便患者服用，適應(yīng)現(xiàn)代藥品質(zhì)量監(jiān)測(cè)體系。同時(shí)，應(yīng)用高效液相色譜法，建立方中主要藥效成分羥基紅花黃色素A的含量測(cè)定方法，并進(jìn)行方法學(xué)考察，為七味鐵屑膠囊的制劑工藝改革和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 KJZ-10/200LB型快速攪拌制粒機(jī)(上海宏聲制藥機(jī)械廠)；DZF-6050型干燥箱(上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)；LC-20AT高效液相色譜儀(日本島津)；SPD-20A紫外檢測(cè)器(日本島津)；KQ5200型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 藥材與試劑 鐵屑(訶子制)、北寒水石(奶制)、藏木香、木香、甘青青藍(lán)、紅花、五靈脂膏(由藏醫(yī)學(xué)院藏藥廠提供)，羥基紅花黃色素A(中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量測(cè)定用，批號(hào)：111637-200704)；甲醇、乙腈為色譜純，磷酸等為分析純，純化水(自制)。

2 七味鐵屑膠囊的制備工藝研究

2.1 制備工藝過(guò)程 五靈脂水提，濃縮至一定濃度，備用。將鐵屑(訶子制)、北寒水石(奶制)、藏木香、木香、甘青青藍(lán)、紅花藥材粉碎成細(xì)粉，過(guò)100目篩，置于快速攪拌制粒鍋內(nèi)，開(kāi)啟攪拌槳，混勻。噴入五靈脂浸膏混均，開(kāi)啟制粒切割槳制粒，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后，出料，60℃干燥60min，整粒，進(jìn)行相關(guān)評(píng)價(jià)，灌裝膠囊。

2.2 考察指標(biāo)確定

2.2.1 顆粒得率 采用篩析法，將干燥整粒后的顆粒進(jìn)行篩分，以40～60目篩之間的顆粒所占比例為成品顆粒得率。

2.2.2 休止角的測(cè)定 將三只漏斗串聯(lián)并固定于水平放置的坐標(biāo)紙上3cm高處，將各組顆粒樣品分別沿漏斗倒入最上方的漏斗中使其自然流下，并在水平面形成圓錐體，直至圓錐體尖端接觸到最下面的漏斗為止。由坐標(biāo)紙測(cè)出顆粒圓錐底部的直徑，計(jì)算出休止角[3]。

2.2.3 綜合評(píng)分 設(shè)定優(yōu)質(zhì)顆粒得率(Y1)與休止角(Y2)的權(quán)重系數(shù)分別為60%和40%。經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)，該制劑工藝所制備顆粒的休止角范圍在30°～60°之間，休止角越小顆粒的流動(dòng)性、填充性越好，因此設(shè)定綜合評(píng)分計(jì)算公式為：

2.3 試驗(yàn)安排與結(jié)果

2.3.1 攪拌槳和切割槳轉(zhuǎn)速的確定 設(shè)定開(kāi)始噴入五靈脂浸膏后攪拌制粒20min，比較攪拌槳和切割槳轉(zhuǎn)速設(shè)定對(duì)制粒效果的影響，結(jié)果如表1所示，表明當(dāng)攪拌槳位于慢速檔，切割槳位于快速時(shí)，得到的顆粒更符合膠囊劑的生產(chǎn)需要，因此確定為慢速攪槳，快速切槳。

表1 攪拌槳和切割槳轉(zhuǎn)速對(duì)制粒效果的影響

2.3.1 制粒時(shí)間的確定 設(shè)定慢速攪槳，快速切槳，考察不同時(shí)間對(duì)制粒效果的影響，當(dāng)制粒時(shí)間為30min時(shí)，優(yōu)質(zhì)顆粒收率為84.5%，休止角為37.2°，綜合評(píng)分最高，制得的顆粒最符合生產(chǎn)需要。因此確定最佳制粒時(shí)間為30min。

表2 攪拌時(shí)間對(duì)制粒效果的影響

2.4 工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 對(duì)優(yōu)選工藝進(jìn)行三批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。三批實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合評(píng)分的RSD為0.807%，表明該處方制劑穩(wěn)定、可行。

表3 優(yōu)選工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 HSYA含量測(cè)定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 色譜柱：Shim-Pack C18柱(150mm×4.6mm，5μm)，Shim-Pack C18預(yù)柱(100mm×4.6mm，5μm)，柱溫25℃；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(26∶2∶72)，檢測(cè)波長(zhǎng)為402nm，流速為1.0 mL/min，柱溫25℃，理論塔板數(shù)不低于3500，HSYA峰的拖尾因子為1.03[4,5]。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取HSYA對(duì)照品適量，置25mL容量瓶中，加入30%(體積分?jǐn)?shù))甲醇10mL，超聲溶解后，用30%甲醇稀釋至25mL，搖勻，制得質(zhì)量濃度為0.10mg/mL的對(duì)照品溶液，備用。

3.2.2 樣品溶液的制備 取“2.4”項(xiàng)下所制備七味鐵屑膠囊適量，去殼，研細(xì)。精密稱(chēng)取粉末1.5g，置于具塞錐形瓶中，加入30%甲醇50mL，精密稱(chēng)定，超聲提取30min，放冷，再稱(chēng)重，用30%甲醇補(bǔ)足損失質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾。

3.2.3 陰性樣品溶液的制備 按七味鐵屑膠囊處方比例制成不含紅花的陰性對(duì)照樣品，依“3.2.2”項(xiàng)方法制得陰性供試品溶液。

3.3 專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn) 分別取對(duì)照品溶液、樣品溶液和陰性對(duì)照供試品溶液10μL進(jìn)樣分析，在色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明陰性樣品無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

a.HSYA對(duì)照品；b.樣品溶液；c.陰性樣品

3.4 線性范圍實(shí)驗(yàn) 精密吸取“3.2.1”項(xiàng)對(duì)照品溶液0.5，1.0，2.0，4.0，8.0mL，置10mL容量瓶中，以30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得系列濃度對(duì)照品溶液。分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程為：Y=3560293.34X+68152.25，r=0.9999，結(jié)果表明HSYA在1.0～80μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度實(shí)驗(yàn) 分別精密吸取同一批HSYA對(duì)照品溶液10μL，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，平行測(cè)定6次，測(cè)得平均峰面積RSD為0.79%。

3.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液(批號(hào)：101101)，分別于0，4，8，16，32h進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積RSD為1.29%，表明供試品溶液在32h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批供試品(批號(hào)：101101)，精密稱(chēng)定6份，按“3.2.2”項(xiàng)制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積并計(jì)算樣品中HSYA的質(zhì)量濃度RSD為1.39%，表明樣品處理方法重復(fù)性良好。

3.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)定已知含量的供試品(批號(hào)：101101)9份，分別精密加入HSYA對(duì)照品溶液適量，照“3.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL測(cè)定峰面積，計(jì)算HSYA的回收率，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 HSYA加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

3.9 樣品含量測(cè)定 取3批七味鐵屑膠囊，按照前述方法制備供試品溶液，取供試品溶液10μL進(jìn)樣分析，記錄峰面積，測(cè)定HSYA含量，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 樣回含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

4 討論

七味鐵屑丸處方中藥材具有一定密度差，因此采用流化床制粒等現(xiàn)代工藝可能導(dǎo)致顆粒色澤不均勻，含量均勻度差異大等問(wèn)題。而擠壓式制粒工藝繁瑣，操作流程多，不利于提高生產(chǎn)效率。快速攪拌制粒技術(shù)具有工藝簡(jiǎn)單，操作方便，生產(chǎn)效率高等特點(diǎn)，在混合室內(nèi)可較好地完成捏合、制粒操作，物料混合均勻，色澤一致。

本工藝采用處方組成成分五靈脂浸膏為黏合劑，藥輔同源，不引入其他輔料，保證了較低的生產(chǎn)成本。

課題組在預(yù)實(shí)驗(yàn)中比較了超聲和回流提取七味鐵屑膠囊顆粒中HSYA的方法，結(jié)果表明二者提取效果相同，且前者操作方便，因而確定含量測(cè)定樣品采用超聲提取方法制備。

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