★ 肖光清 黃文平 黃琴 喬培 黃陸強(qiáng) 李東勲,

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330004；2.中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心 江西 南昌 330006)

半夏止咳糖漿是由姜半夏、紫菀、甘草、麻黃、苦杏仁、款冬花、陳皮、瓜蔞皮等八味藥材組成的方劑，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》第十四冊(cè)，具有止咳祛痰之功效[1]，多用于風(fēng)寒咳嗽，痰多氣逆。原標(biāo)準(zhǔn)中只有檢查項(xiàng)，并無鑒別項(xiàng)。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[2-4]，對(duì)本品運(yùn)用HPLC只針對(duì)麻黃和陳皮進(jìn)行了鑒別，為更有效的控制本品質(zhì)量，保證用藥安全，本文對(duì)方劑中紫菀、甘草進(jìn)行了薄層鑒別，運(yùn)用HPLC對(duì)橙皮苷進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與藥品

Agilent LC-1260型高效液相色譜儀系列；PBQ-Ⅰ薄層自動(dòng)鋪板器(重慶南岸實(shí)驗(yàn)電器廠)；SPU-Ⅰ自動(dòng)噴霧顯色儀(日本島津)；CQ-250超聲波清洗器(上海船舶電子設(shè)備研究所)；SimplicityTM型超純水系統(tǒng)(Millipore公司)；AG-135電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司)；定量毛細(xì)管(美國(guó)Drummond公司)；層析缸(200×100mm，上海信誼玻璃儀器廠)；硅膠G板(薄層層析用，青島海洋化工有限公司)。

橙皮苷對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)：110721-200512，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；紫菀對(duì)照藥材(批號(hào)：120956-200505，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；甘草苷對(duì)照品(批號(hào)：111610-200604，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；乙腈(色譜純)，其他試劑為分析純。

半夏止咳糖漿6批(重慶東方藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)分別為120201和120203；太極集團(tuán)四川南充制藥有限公司，批號(hào)分別為110125和130701；貴州漢方藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為120802和120406)。

2 方法與結(jié)果

2.1 紫菀的鑒別

2.1.1 供試品溶液的制備 精密量取本品20mL，加蒸餾水10mL攪拌混勻，加乙酸乙酯萃取兩次，每次30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)?mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照藥材溶液的制備 取紫菀對(duì)照藥材1g，加水煎煮30min，濾過，濾液濃縮至20mL，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備，制成紫菀藥材對(duì)照品溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方除去紫菀藥材，依本品制備工藝制成陰性樣品，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備，制成陰性樣品溶液。

2.1.4 薄層色譜的鑒別 按薄層色譜法試驗(yàn)，吸取紫菀對(duì)照藥材葉3μL，供試品及陰性樣品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一含1%氫氧化鈉的硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇(15∶4∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴4%氫氧化鈉溶液，置紫外光燈365nm下檢視，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液在此位置沒有斑點(diǎn)，如圖1所示。

1.陰性對(duì)照液；2.紫菀對(duì)照藥材；3～5.供試品溶液

2.2 甘草的鑒別

2.2.1 供試品溶液的制備 精密量取本品20mL，加入2mL濃鹽酸和30mL氯仿，回流提取1h，放冷，分取氯仿層，殘夜再以30mL氯仿萃取一次，合并氯仿液，以無水硫酸鈉脫水，蒸干，殘?jiān)?mL甲醇使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 取甘草苷對(duì)照品1mg，加甲醇1mL制成對(duì)照品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液制備 按處方除去甘草藥材，依本品制備工藝制成陰性樣品，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備，制成陰性樣品溶液。

2.2.4 薄層色譜的鑒別 按薄層色譜法試驗(yàn)，吸取甘草苷對(duì)照品3μL，供試品及陰性樣品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一含1%氫氧化鈉的硅膠G薄層板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(1.5∶4∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴磷鉬酸試液和10%硫酸乙醇溶液，烘至顯色清晰，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照溶液在此位置沒有斑點(diǎn)，如圖2所示。

1.甘草陰性對(duì)照品；2.甘草苷對(duì)照品；3～5供試品溶液

圖3 橙皮苷對(duì)照品

圖4 供試品溶液

圖5 陰性對(duì)照溶液

2.3 橙皮苷的含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 參照《中國(guó)藥典》2010年版一部陳皮項(xiàng)下HPLC測(cè)定橙皮苷的方法，經(jīng)優(yōu)化后，色譜柱：Cosmosil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸溶液(19∶81)，流速：1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)283nm，柱溫：30℃。理論板數(shù)按橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500，分離度大于1.5。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制成0.2576mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品及陰性樣品溶液的制備 精密吸取10mL，置于25mL量瓶中，分多次加入70%乙醇，邊搖邊加至刻度，取上清液，即得供試品溶液。取不含陳皮的陰性樣品10mL，同供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3.4 干擾試液 分別吸取陰性樣品溶液、橙皮苷對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL于高效液相色譜儀，結(jié)果顯示樣品與對(duì)照品相同位置有較大吸收，陰性對(duì)照無干擾，如圖3～5所示。

2.3.5 線形關(guān)系的考察 精密吸取“2.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品，加甲醇稀釋成以下濃度：0.01288,0.0322,0.0644,0.1288,0.1932,0.2576 mg/mL；分別吸取10μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定對(duì)照品峰面積，將樣品濃度與峰面積進(jìn)行回歸處理，回歸方程為：Y=10451.7X-2.80，r=0.9999(n=6)，橙皮苷對(duì)照品在0.01288～0.2576mg/mL范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定供試品溶液中橙皮苷峰面積值，結(jié)果經(jīng)數(shù)據(jù)處理RSD為1.49%。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μL，按上述色譜條件，每隔2h或4h，測(cè)定供試品溶液中橙皮苷峰面積值，結(jié)果經(jīng)數(shù)據(jù)處理RSD為0.88%。

2.3.8 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取本品10mL，共六份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，測(cè)定結(jié)果經(jīng)數(shù)據(jù)處理RSD為1.36%。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的樣品6份，分別加入橙皮苷對(duì)照品適量，按“2.3.3”項(xiàng)下方法處理，測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表7。

表1 橙皮苷家養(yǎng)回收率測(cè)定結(jié)果

2.3.10 樣品測(cè)定 取不同批號(hào)樣品，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 6批半夏止咳糖漿中橙皮苷的含量測(cè)定結(jié)果/mg·mL-1

3 討論及結(jié)論

3.1 薄層方法的考察 由于本制劑中含糖量比較高，對(duì)于成分的提取，糖為雜質(zhì)，故在薄層供試品溶液的制備時(shí)，比較了醇沉與不醇沉的方法，結(jié)果顯示兩者影響的效果一樣，為了操作簡(jiǎn)便，故采用不醇沉的方法。在紫菀的薄層色譜中，斑點(diǎn)的分散與色帶的產(chǎn)生，在不知具體是何成分產(chǎn)生的斑點(diǎn)情況下，以展開劑的極性大小來探究可能成分的性質(zhì)，故在制備供試品時(shí)，比較了以乙酸乙酯和氯仿提取的方法，結(jié)果以乙酸乙酯的方法佳，結(jié)果的重現(xiàn)性好。在甘草中，主要含有甘草苷和甘草次酸等化合物，通過水浴回流提取和用乙酸乙酯萃取處理，發(fā)現(xiàn)水解后成分在薄層色譜中能表現(xiàn)出來。根據(jù)藥材含有的成分以及成分的理化性質(zhì)來確定展開劑的極性大小、比例的多少。通過摸索實(shí)驗(yàn)探究，最終確定最適的展開劑類型及比例。

3.2 供試品溶液制備的考察 《中國(guó)藥典》2010版陳皮中橙皮苷采用甲醇為溶劑進(jìn)行索氏提取，而本制劑中陳皮經(jīng)煎煮提取后制成了糖漿，糖為主要雜質(zhì)，因此實(shí)驗(yàn)中我們分別比較50%甲醇、甲醇、70%乙醇、乙醇醇沉對(duì)橙皮苷的提取效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)70%乙醇提取效果佳。通過含量測(cè)定，發(fā)現(xiàn)陳皮中橙皮苷的轉(zhuǎn)移率只有10%，在處方中，陳皮的用量不低，而轉(zhuǎn)移率不高，通過對(duì)橙皮苷的結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)，結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基，根據(jù)相似相溶原理，此化合物應(yīng)易溶于水，但研究卻不溶于水，只微溶于極性低的有機(jī)溶劑，卻極易溶于無機(jī)堿，原因可能是橙皮苷的空間結(jié)構(gòu)位阻，導(dǎo)致溶解性的差異。

[1]WS3-B-2681-97，半夏止咳糖漿[S].

[2]崔靜茹，杜智敏.半夏止咳糖漿的制備與鑒別[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志，2008，16(7)：61-63.

[3]徐艷麗，郎軼詠.HPLC測(cè)定半夏止咳糖漿中鹽酸麻黃堿含量[J].中成藥，2009，31(10)：1 648-1 649.

[4]陽文武，張德偉，肖琦等.半夏止咳糖漿質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2013，22(20)：14-15.