★ 陳浩 何小女 鄧運明 萬元泰

(1.江西省中醫(yī)院 江西 南昌 330006 ；2.江西中醫(yī)藥大學 江西 南昌 330004)

眾所周知[1，2]臨床治療中，類風濕性關節(jié)炎、風濕性關節(jié)炎、骨性關節(jié)炎等癥多年來一直都屬于疑難雜癥，尤其在臨床上使用中成藥治愈更是收效甚微。本院鄧運明教授[3]結合多年來臨床實踐經驗自主研發(fā)的溫通止痛貼劑采用中醫(yī)疏通經絡、祛除寒濕痹痛的機制，治療類風濕性關節(jié)炎、風濕性關節(jié)炎、骨性關節(jié)炎等癥臨床治療效果顯著。為控制其質量，保證臨床用藥安全、有效，有必要對溫通止痛貼質量標準再進行深入研究，因此采用HPLC法對溫通止痛貼中黃芩苷的含量進行測定。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 電子天平BS 124S(北京賽多利斯儀器);超聲波清洗器DL360B(上海之信儀器有限公司);微型植物試樣粉碎機KN-500型(長沙康寧電子科技有限公司);恒溫鼓風干燥箱DHG-9070A 型(上海精宏實驗設備有限公司)；安捷倫1260。

1.2 試劑 黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號：110715-201117)；色譜甲醇；水為超純水，其余實驗所用化學試劑均為分析純試劑。

1.3 色譜條件 色譜柱：C18安捷倫液相色譜柱(4.6mm×150mm,5μm);流動相：甲醇: 0.125%磷酸(47∶53);檢測波長：278nm;流速：1mL/min;柱溫： 30℃。

2 含量的測定[4-10]

2.1 黃芩苷對照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對照品9.7mg于50mL量瓶中，加適量甲醇使溶解，用甲醇定容至刻度，搖勻，超聲10min，過微孔濾頭于小瓶，即得儲備液。

2.2 供試品溶液的制備 刮取溫通藥膏50g于研缽中，研勻，精密稱定5g于圓底燒瓶中。分別加入75%乙醇150，100mL于水浴(85℃)中回流提取兩次，每次40min，放冷、濾過，合并濾液，置分液漏斗中，用石油醚(60～90℃)萃取三次，棄去醚液，蒸干，殘渣用甲醇定量轉移至25mL量瓶中作為母液，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取母液5mL于25mL量瓶中，用甲醇定容，超聲10min，過微孔濾頭，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。精密吸取黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含58.2μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 線性關系的考察 精密取儲備液取1, 2, 3, 5, 7mL溶解于5個10mL量瓶中，取甲醇稀釋至刻度，搖勻，超聲10min，以儲備液及稀釋的五個濃度的黃芩苷溶液建立標準曲線，每次進樣量10μL，以對照品進樣量為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y繪制標準曲線，求得回歸方程：Y=31939X-74.533,r=0.9997(n=6)。結果表明：黃芩苷在進樣量0.194～1.94μg范圍內，進樣量與峰面積呈良好線性關系。

2.4 陰性干擾試驗 取陰性樣品適量，按2.2項供試品方法制成陰性對照溶液。按照上述色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μL注入色譜儀中，記錄色譜圖如下。結果表明：在與黃芩苷對照品色譜相應的位置上無色譜峰出現(xiàn)，方中其他組分對測定結果無影響。

2.5 精密度試驗 精密吸取2.2項的對照品溶液連續(xù)進樣6次，每次進樣10μL，測得精密度RSD% =1.92%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性考察 取同一批號樣品6份，按供試品溶液制備方法制備的樣品溶液，各進樣10μL記錄峰面積，結果RSD%為1.56%，說明本方法重復性好。

2.7 穩(wěn)定性實驗 精密吸取同一份供試品溶液10μL分別于0, 1, 4, 7, 10 ,12 h注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定其峰面積積分值，結果其RSD為1.67%。實驗結果表明供試品溶液在12 h內測定穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率實驗 采用加樣回收法，精密稱定已知含量的本品2.5g，共6份，精密加入對照品溶液5mL(0.7732mg/mL)，依“供試品溶液的制備”法制成供試品溶液，測定，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

2.9 樣品測定 取本品三批樣品(20121025、20121122、20121205)，按2.2供試品方法制備溶液，按含量測定方法測定，用外標法計算供試品黃芩苷的含量，結果分別為1.408mg/g、1.436mg/g、1.422mg/g。

3 討論

3.1 取樣品在200～350 nm波長范圍內進行掃描，在278 nm處有最大吸收，故選擇278 nm為檢測波長。

3.2 本實驗采用高效液相色譜法對溫通止痛貼中黃芩苷含量進行測定，結果表明該方法簡單、有效，具有良好的準確性與重現(xiàn)性且測定中無陰性干擾。通過對HPLC方法學的摸索為下一步固本顆粒質量標準的進一步完善提供了精確、合理的科學依據(jù)。

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