★ 黃文平 黃陸強(qiáng) 宋永貴, 肖光清 黎田兒 李志峰,

(1.中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心 江西 南昌 330006；2.江西中醫(yī)藥大學(xué) 江西 南昌 330004)

柿蒂為柿樹科植物柿DiospyroskakiThunb.的干燥宿萼。冬季果實(shí)成熟時采摘，食用時收集，洗凈，曬干。其苦、澀，平；歸胃經(jīng)。有降氣止呃功能，常用于胃寒氣滯的呃逆。臨床治療頑固性或術(shù)后呃逆，反流性胃炎等癥[1]。中國藥典2010年版柿蒂項(xiàng)下無含量測定項(xiàng)，雖有文獻(xiàn)[2]報道了柿蒂中沒食子酸的含量測定，但所用的藥材比較單一，無法驗(yàn)證其方法的可行性，本文在對其方法進(jìn)行改進(jìn)基礎(chǔ)上，對不同產(chǎn)地柿蒂中沒食子酸含量進(jìn)行測定，即比較了不同產(chǎn)地柿蒂藥材質(zhì)量，又為2015年版中國藥典柿蒂含量測定項(xiàng)的建立提供基礎(chǔ)研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-10AT型高效液相色譜儀DAD檢測器；自動進(jìn)樣器；AUW220D十萬分之一分析天平(日本島津公司)；KQ-250型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 乙醇、磷酸(分析醇，上海振興化工一廠)；甲醇(色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司禹城化工廠)；水為超純水。柿蒂藥材分別采集于江西、河北等地，樣品經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源中心鐘國躍鑒定為柿樹科植物柿DiospyroskakiThunb.的干燥宿萼。

1.3 對照品 沒食子酸對照品(含量大于98%，批號：M05-20130113，中國藥品生物制品檢定所)。

2 方法與結(jié)果

2.1 柿蒂藥材供試品溶液 取干燥柿蒂粉末(過3號篩)0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，精密稱定重量,超聲20min，冷卻，用50%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，靜置，取上清液過0.45μm微孔濾膜后,即得。

2.2 對照品溶液制備 取沒食子酸對照品適量，精密稱定，用50%甲醇制成每1mL并定容至刻度，制成含0.00776mg的溶液。

2.3 色譜條件 色譜柱為Cosmosil C18(4.6mm×250mm，5μm)，流速：1.0mL/min；檢測波長273nm；柱溫25℃。流動相為甲醇-0.5%磷酸溶液(5∶95)。在此色譜條件下，測定沒食子酸對照品、柿蒂藥材供試品，色譜圖見圖1。

A.柿蒂藥材供試品；B.沒食子酸對照品

由圖1可見，柿蒂藥材供試品溶液中沒食子酸保留時間約為11.3min，且與相鄰峰的分離度均大于1.5，對稱性接近于1，可用于定量分析。

2.4 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密吸取對照品溶液2，7，10，15，20，25μL注入色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為沒食子酸0.01552～0.194μg，Y=2.83×109X-4.86×103，r=0.999(n=6)，提示沒食子酸在0.01552～0.194μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對照品溶液10μL，連續(xù)重復(fù)6次，測定峰面積，其RSD為0.30%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一濃度的樣品溶液分別于0，1，2，4，6，12 h各取10μL進(jìn)樣，結(jié)果樣品在12h內(nèi)穩(wěn)定，沒食子酸的RSD為1.19%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.1”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，照樣品測定方法測定沒食子酸的含量，結(jié)果沒食子酸的RSD為0.69%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別取已知含量的同一批樣品約0.4g六份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按含有80%、100%、120%的量加入沒食子酸對照品一定量，按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理，按樣品測定方法測定沒食子酸含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品的含量測定 取10批不同柿蒂藥材，分別照“2.1”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測定，每份進(jìn)樣3次，計(jì)算各沒食子酸含量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表2。

表2 十批柿蒂藥材含量測定(%)

3 結(jié)論與討論

根據(jù)指示性成分的理化性質(zhì)，考察了50%甲醇、70%乙醇以及流動相作為溶媒對測定結(jié)果的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用50%甲醇作為溶媒，沒食子酸的保留率比較大；比較了超聲提取與冷浸法進(jìn)行沒食子酸提取的考察，發(fā)現(xiàn)超聲提取法沒食子酸的溶出率大。經(jīng)試用甲醇-0.5%磷酸(1∶99)，甲醇-0.5%磷酸(50∶50)，甲醇-0.5%磷酸(5∶95)，甲醇-水(10∶90)作為流動相進(jìn)行篩選，比較其分離效果與基線平穩(wěn)狀態(tài)，結(jié)果確定甲醇-0.5%磷酸(5∶95)作為流動相。綜上確定了供試品溶液的制備方法及流動相組成。采用二極管陣列檢測器對檢測波長進(jìn)行選擇，結(jié)果表

明，檢測波長為274nm時，對照品有最大吸收波長。

經(jīng)過比較，吉安新興藥材行(130801)含沒食子酸量最大，其次是湖北(青春康源YA1000)，而河北與山東的平均含量基本一致。不同地域的差異，會導(dǎo)致藥材所含的有效成分有一定的差異，因此，對臨床用藥時，選擇藥材的道地屬性及質(zhì)量的優(yōu)劣具有一定的意義。本實(shí)驗(yàn)通過高效液相色譜法建立了柿蒂中沒食子酸測定方法，并測定了四個產(chǎn)地10批次藥材中沒食子酸的含量，該含量測定方法準(zhǔn)確、簡便、靈敏、重復(fù)性好、精密度高；對用藥來源的選擇提供了一定的依據(jù)。

[1]肖培根主編.新編中藥志(第二卷)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002：487.

[2]胡曉煒，宋緒峰.RP-HPLC法測定柿蒂中沒食子酸的含量[J].中國藥事，2003，17(6)：371.