★ 王一涵 侯曉琳 董雪蓮

(長春中醫(yī)藥大學(xué) 吉林 長春 130117)

冬瓜皮為葫蘆科植物冬瓜Benincasehispida(Thumb.)Cogn.的干燥外層果皮，削取外層果皮，曬干得。冬瓜皮含有多糖類、蠟類、樹脂類、揮發(fā)性物質(zhì)(如E-2-己烯醛、正己醛、甲酸正己醇酯等)、三萜類化合物(如乙酸異多花獨(dú)尾草烯醇酯、粘霉烯醇等)、膽甾醇衍生物、有機(jī)酸、煙酸、胡蘿卜素等成分[1]。其味甘、性寒，歸脾、小腸經(jīng)，具有利尿消腫的功效，用于水腫脹滿，小便不利，暑熱口渴，小便短赤[2]。盡管冬瓜皮藥用歷史悠久，但有關(guān)于冬瓜皮的文獻(xiàn)報(bào)道較少，關(guān)于其科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量控制方法很少，在《中國藥典》2010版也僅僅收錄了其性狀、顯微鑒別等內(nèi)容，所以有必要對其質(zhì)量控制方法進(jìn)行進(jìn)一步研究，以控制其質(zhì)量。本文主要建立了冬瓜皮薄層色譜鑒別法及多糖含量測定方法，以控制冬瓜皮質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

紫外分光光度計(jì)(型號：TU-1810PC)，葡萄糖對照品(中國藥品生物制品檢定研究院，批號：110833-200904，供含量測定)。所用試劑均為分析純。

1.2 藥材與提取物

1.2.1 藥材 冬瓜皮飲片經(jīng)長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院翁麗麗教授鑒定，符合《中國藥典》2010年版一部106頁冬瓜皮項(xiàng)下的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2 提取物 取冬瓜皮藥材600g，分別加入16，13，13倍量水(第一次先浸泡1h)，煎煮3次，每次1 h，濾過，合并濾液，干燥，粉成細(xì)粉，備用。

2 鑒別

取冬瓜皮水煎提取物2g，加甲醇30mL，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取冬瓜皮藥材2g，加甲醇30mL，超聲處理(功率250W，頻率40kHz)30min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5～10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇試液,待揮干后,在105°C下加熱顯色。供試品色譜中，在與藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，如圖1。

圖1 冬瓜皮薄層色譜圖

3 多糖含量測定方法[3,4]

3.1 對照品溶液的制備 精密稱定葡萄糖對照品5mg，置50mL量瓶中，加水溶解，定容至50mL，搖勻，即得對照品濃溶液(每1mL含葡萄糖0.1mg)。

3.2 供試品溶液的制備 取水煎提取物0.5g，精密稱定，置于50mL錐形瓶中，加入水40mL，密塞，超聲處理30min，取出放冷，定容至50mL，濾過，取濾液1mL，置于50mL容量瓶中，用水定容，得供試品溶液。

3.3 測定波長的選擇 (1) 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品的波長掃描 精密量取上述葡萄糖對照品溶液0.5mL，再精密加入0.5mL的水置于具塞試管中，加入1mL 5%苯酚，搖勻后迅速加入5mL濃硫酸，混勻，于沸水浴加熱20min后取出，放入冷水浴中，冷卻15min。然后于400～600nm進(jìn)行掃描，測定最大吸收波長。

(2)冬瓜皮樣品波長掃描 取供試品溶液1mL，置于具塞試管中，同葡萄糖對照品方法顯色。然后于400～600nm進(jìn)行掃描，測定最大吸收波長。

結(jié)果葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品和冬瓜皮供試品均在490nm處有最大吸收，故選擇490為檢測波長。

3.4 線性關(guān)系考察 精密吸取葡萄糖對照品溶液0.1 ,0.2 ,0.4 ,0.6 ,0.8 ,1.0mL分別置于10mL容量瓶中，加水至2 mL，再取1mL置于具塞試管中，加入1mL 5%苯酚，搖勻后迅速加入5mL濃硫酸，混勻，于沸水浴加熱20min后，取出，放入冷水浴中，冷卻15min。在490nm處測量吸光度，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：Y=0.00898X-0.0233，r=0.9998，說明多糖在10.08～100.80μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn) 精密量取葡萄糖對照品溶液1mL，依 “3.4”項(xiàng)下方法顯色，連續(xù)測定6次，記錄吸光度A值，并計(jì)算RSD%。RSD值為0.268%，結(jié)果表明儀器、方法的精密度良好。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取冬瓜皮水煎提取物約0.5g，按照供試品溶液的方法制備；精密吸取1.5mL供試品溶液置于具塞試管中，依 “3.4”項(xiàng)下方法顯色。以相應(yīng)試劑為空白，在490nm處測定吸光度，并分別記錄時(shí)間為0,5，10,15,20,25,30min的吸光度，并計(jì)算RSD%。同樣吸取對照品溶液1mL，依法測定，計(jì)算RSD%。結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)品的RSD值0.114%，供試品RSD值為0.106%，說明對照品溶液和樣品溶液在30min之內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取冬瓜皮水煎提取物約0.5g，稱取6份，按供試品溶液制備方法處理樣品；精密吸取供試品溶液1mL置具塞試管中，依 “3.4”項(xiàng)下方法顯色。在490nm處測量吸光度，并計(jì)算含量，考察重現(xiàn)性。結(jié)果，RSD值為0.93%，重現(xiàn)性良好。

3.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取冬瓜皮水煎提取物(總多糖含量為245.76mg/g)0.5g，平行稱定6份，照供試品方法制備。取0.4mL溶液置具塞試管中，再加入0.4mL濃度為0.100 8mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品置于具塞錐形瓶中，在加入0.2mL的水，依 “3.4”項(xiàng)下方法顯色。在490nm處測量吸光度值，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。結(jié)果表明：回收率良好，方法可行。

表1 加樣回收率試驗(yàn)

4 討論

4.1 冬瓜皮主要有效成分為冬瓜多糖，通過對多糖含量測定方法進(jìn)行對比篩選，最終確定采用苯酚-硫酸法進(jìn)行多糖的含量測定，該方法操作簡便，靈敏度高，科學(xué)穩(wěn)定，可作為冬瓜皮含量控制的有效方法。

4.2 冬瓜皮用藥歷史悠久，但其薄層色譜鑒別方法文獻(xiàn)至今未有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過大量條件摸索，首次確定了冬瓜皮薄層色譜鑒別條件，該方法穩(wěn)定可行，專屬性強(qiáng)，彌補(bǔ)了冬瓜皮在薄層色譜鑒別上的空白，在以后的應(yīng)用中可作為制劑等的薄層鑒別方法。

4.3 本文建立了冬瓜皮薄層色譜鑒別法及多糖含量測定方法，首次建立了科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)亩掀べ|(zhì)量控制方法，彌補(bǔ)了冬瓜皮質(zhì)量控制方面的空白，具有較高的學(xué)術(shù)價(jià)值，同時(shí)對于今后規(guī)范藥用冬瓜皮質(zhì)量具有深遠(yuǎn)意義。

[1]車雙輝,杜琪林.冬瓜中活性成分的提取分離研究[J]. 食品研究與開發(fā)，2004，25(1)：104-105.

[2]鄧居林.冬瓜飲加減治療糖尿病21例[J]. 中醫(yī)藥學(xué)刊，2003，21(6)：898-899.

[3]徐翠蓮,杜林洳,樊素芳,等．多糖的提取、分離純化及分析鑒定方法研究[J]. 河南科學(xué)，2009，27(12)：1 524-1 529.

[4]王新琪 ，蔡廣知 ，韓 梅 ,等．冬瓜皮多糖提取工藝研究[J]. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32(1)：54-57,61.