呂立勛 李唐棣 趙琳琳 趙利剛 吳范武

(河北聯(lián)合大學(xué)藥學(xué)院藥物制劑學(xué)科，河北 唐山 063000)

實驗研究

三清降糖緩釋片對糖尿病兔胰島素抵抗的影響※

呂立勛 李唐棣 趙琳琳 趙利剛 吳范武1

(河北聯(lián)合大學(xué)藥學(xué)院藥物制劑學(xué)科，河北 唐山 063000)

目的觀察三清降糖緩釋片對糖尿病兔胰島素抵抗的影響。方法將40只健康成年雄性家兔隨機分為5組，即空白對照組、模型對照組、格列美脲片組、三清降糖湯劑組和三清降糖緩釋片組，每組8只。空白對照組予普通飼料喂養(yǎng)，其余4組均予普通飼料+高脂高糖飼料喂養(yǎng)，制備糖尿病模型?？瞻讓φ战M、模型對照組予純凈水灌胃，三清降糖湯組予三清降糖湯混懸液灌胃，三清降糖緩釋片組予三清降糖緩釋片整片服用，格列美脲片組予格列美脲片整片服用。于給藥4周末，觀察各組空腹血糖(FPG)、血脂[總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)]、血清胰島素(FINS)及腫瘤壞死因子α(TNF-α)變化。結(jié)果模型對照組FPG、FINS、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)及TNF-α均較空白對照組升高(P<0.01)，說明造模成功；與模型對照組比較，格列美脲片組、三清降糖湯組及三清降糖緩釋片組FPG、FINS、HOMA-IR及TNF-α均下降 (P<0.05)。模型對照組TG、TC及LDL-C均高于空白對照組(P<0.01)，HDL-C 低于空白對照組(P<0.01)。與模型對照組比較，格列美脲片組、三清降糖湯組及三清降糖緩釋片組TG、TC及LDL-C 均降低 (P<0.05)，HDL-C 升高(P<0.05)。結(jié)論三清降糖緩釋片對糖尿病兔具有降血糖、降血脂作用。

疾病模型，動物；糖尿??；胰島素抗藥性；中藥療法；黃芩

糖尿病(diabetes mellitus，DM)是由于胰島素分泌缺陷和(或)胰島素作用缺陷而引起慢性血漿葡萄糖水平增高為特征的代謝性疾病。近年來，全球DM發(fā)病率增長迅速，已成為繼腫瘤、心血管病變之后第三大嚴重威脅人類健康的慢性疾病[1]。我們根據(jù)DM的中醫(yī)辨治規(guī)律，結(jié)合現(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究的最新進展，自擬三清降糖方經(jīng)臨床試用療效較好[1]，但是臨床應(yīng)用湯劑服藥次數(shù)多，劑量大，使用不便，患者依從性差。本研究通過動物實驗觀察自擬三清降糖緩釋片對血糖、血脂及腫瘤壞死因子α(TNF-α)的影響，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康成年雄性家兔40只，體質(zhì)量(2.0±0.2) kg，購自北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號SLXK(京)2009-0004，普通飼料，自由飲水，溫度(25±2)℃，相對濕度50%～70%。

1.1.2 藥物與試劑 ①三清降糖緩釋片(河北聯(lián)合大學(xué)藥學(xué)院藥物制劑實驗室自制)，方中黃連、黃芩、知母、生地黃、桑白皮、地骨皮、干姜7味藥材，購于北京同仁堂唐山連鎖藥店有限公司，經(jīng)河北聯(lián)合大學(xué)鑒定，符合《中華人民共和國藥典》2010年版：一部項下規(guī)定[2]；按5∶5∶5∶5∶5∶3∶3的質(zhì)量比例混合共9.3kg，加8倍量水煎煮2h，共2次，合并藥液濃縮得藥膏，密封后置冰箱內(nèi)冷藏備用，臨用時加純凈水配成不同濃度的混懸液；②普通飼料由河北聯(lián)合大學(xué)動物實驗中心提供；③高脂高糖飼料配制：基礎(chǔ)飼料58%，豬油8%，蔗糖23%，蛋黃10%，膽固醇1%；④鏈脲佐菌素(STZ，美國sigma公司，批號B56981)；⑤格列美脲片(北京北陸藥業(yè)股份有限公司，國藥準字H20041838)；⑥生化檢測試劑盒均購自中生北控生物科技股份有限公司。

1.1.3 儀器 酶標儀(Bio-RAD Model 680)；-20℃冰箱(海爾)；Microlab300半自動生化分析儀(Vital Scientific N.V)；高速低溫冷凍離心機( 20000r/min，4℃，eppendorf，Centrifuge 5804R)。

1.2 方法

1.2.1 動物分組 將40只健康成年雄性家兔，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機分為5組，即空白對照組、模型對照組、格列美脲片組、三清降糖湯劑組和三清降糖緩釋片組，每組8只。

1.2.2 模型制備 空白對照組予普通飼料150g/d喂養(yǎng)，其余4組均予75g/d普通飼料+75g/d 高脂高糖飼料喂養(yǎng)。4周后，除空白對照組，其余4組家兔禁食12h后經(jīng)耳緣靜脈一次性注射0.1mol/L的檸檬酸鈉緩沖液 (pH4.5)在冰塊上新鮮配制成的1% STZ溶液50mg/kg。3d后抽取禁食12h的家兔耳緣靜脈血，測定空腹血糖(FPG)，以其值≥11.1mmol/L并出現(xiàn)多飲、多食、多尿表現(xiàn)作為成模標準[3]。

1.2.3 給藥方法 空白對照組、模型對照組予純凈水20mL灌胃；三清降糖湯組予三清降糖緩釋片混懸液2.5g/kg(以生藥量計)灌胃，每日3次；三清降糖緩釋片組予三清降糖緩釋片15mg/kg(以黃芩苷計)，每日1次；格列美脲片組予格列美脲片0.1mg/kg，每日1次。連續(xù)給藥4周。三清降糖緩釋片、格列美脲片必須整片服用，使用半圓桶型兔子固定器固定，暴露頭部，在兔的兩頰部從下顎處緊緊擠壓，從兩口角按向口腔內(nèi)；把開口器插入口腔，固定開口器事先將片劑固定在待插胃管一端，另一端插入合適的硬管；把帶有藥物的一端順著食管插入胃管，硬管往藥物端推進，直到出現(xiàn)落空感，片劑灌入胃內(nèi)，拔出胃管。

1.3 觀察指標及方法 于給藥4周末，禁食12h后，耳緣靜脈采血低溫分離血清(3000r/min，10min)，血清-20℃保存。FPG、血脂[總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)]、血清胰島素(FINS)及TNF-α均按照試劑盒說明書測定。胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=(FPG×FINS)/22.5。

2 結(jié) 果

2.1 各組家兔FPG、FINS及TNF-α變化 見表1。

n劑量(g/kg)FPG(mmol/L)FINS(mU/L)HOMA-IRTNF-α(g/L)空白對照組8-5．75±0．866．86±1．371．74±0．0760．52±6．89模型對照組8-12．31±2．52?11．23±2．09?6．16±0．23?81．24±7．23?格列美脲片組80．1×10-37．79±1．35△8．13±1．02△2．81±0．08△72．13±7．25△三清降糖湯組82．57．96±0．94△8．26±1．18△2．92±0．09△73．26±7．16△三清降糖緩釋片組815×10-37．62±1．17△8．24±1．75△2．79±0．09△71．24±7．51△

與空白對照組比較，*P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.05

由表1可見，模型對照組FPG、FINS、HOMA-IR及TNF-α均較空白對照組升高(P<0.01)，說明造模成功；與模型對照組比較，格列美脲片組、三清降糖湯組及三清降糖緩釋片組FPG、FINS、HOMA-IR及TNF-α均下降 (P<0.05)，但各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 各組家兔血脂變化 見表2。

由表2可見，模型對照組TG、TC及LDL-C均高于空白對照組(P<0.01)，HDL-C 低于空白對照組(P<0.01)，說明造模成功。與模型對照組比較，格列美脲片組、三清降糖湯組及三清降糖緩釋片組TG、TC及LDL-C 均降低 (P<0.05)，HDL-C 升高(P<0.05)，但各組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

n劑量(g/kg)TGTCHDL-CLDL-C空白對照組8-0．96±0．281．56±0．300．78±0．170．45±0．11模型對照組8-2．17±0．53?2．35±0．47?0．46±0．12?1．32±0．16?格列美脲片組80．1×10-31．09±0．15△1．83±0．36△0．55±0．15△0．73±0．13△三清降糖湯組82．51．13±0．24△1．86±0．38△0．57±0．15△0．76±0．14△三清降糖緩釋片組815×10-31．08±0．18△1．82±0．39△0．53±0．14△0．71±0．15△

與空白對照組比較，*P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.05

3 討 論

DM屬中醫(yī)學(xué)消渴范疇，因消渴陰虛燥熱日久，陰陽兩虛，肺脾腎諸臟俱損，我們臨床觀察發(fā)現(xiàn)，初發(fā)2型糖尿病患者表現(xiàn)為明顯的熱象，特點為上焦肺胃實熱兼有下焦陰虛內(nèi)熱，虛實夾雜，以實熱為主，據(jù)此按照中醫(yī)的辨證組方原則自擬三清降糖方。以黃芩、黃連清肺胃實熱，為君藥；生地黃、知母、桑白皮、地骨皮滋陰降火清肺，為臣藥；干姜辛熱以防諸藥寒涼太過，為佐藥。全方實熱與虛熱并清，肺、脾、腎同治，故稱為三清，用于治療糖尿病，特別是青壯年患者，取得了較好的臨床療效。

DM發(fā)病的中心環(huán)節(jié)是胰島素分泌的不足和胰島素抵抗，臨床表現(xiàn)主要是糖脂代謝紊亂。導(dǎo)致胰島素抵抗的病因很多，TNF-α增多是其中之一。TNF-α主要是由單核巨噬細胞分泌的炎癥因子，炎癥因子介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)可能參與了DM的發(fā)病過程，且炎癥因子還導(dǎo)致胰島β 細胞分泌胰島素功能受損，從而產(chǎn)生胰島素抵抗。同時其參與T、B 淋巴細胞的激活，促進炎癥細胞發(fā)生聚集與黏附，誘發(fā)慢性炎癥反應(yīng)和內(nèi)皮功能紊亂，在胰島素抵抗中也起重要作用[4]。TNF-α活性增強還可以促進脂肪分解引起血漿游離脂肪酸(FFA)水平增高，抑制肌肉組織胰島素受體的酪氨酸激酶的活性，抑制胰島素受體底物-1(IRS-1)的磷酸化和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(Glut4)的表達，從而導(dǎo)致胰島素抵抗和高胰島素血癥，TNF-α水平與胰島素敏感性呈獨立負相關(guān)[5]。TG含量增多也被認為是胰島素抵抗的原因之一，B細胞內(nèi)TG積聚過多可造成其功能減退[6]。本研究結(jié)果顯示，給藥4周后，三清降糖緩釋片組血糖、TNF-α、血脂水平與模型對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，與格列美脲片組、三清降糖湯組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，表明三清降糖緩釋片可改善血清脂質(zhì)水平、血漿胰島素濃度、胰島素敏感性，在降低血糖的同時，有提高胰島素敏感性、降低胰島素抵抗的作用，為下一步的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。因為兔β細胞對STZ不敏感，格列美脲片根據(jù)劑量要求重新壓制等原因，可能使實驗結(jié)果不能全面客觀的反映，我們將待確定適宜參比制劑進行生物等效性實驗，且對三清降糖緩釋片體內(nèi)藥動學(xué)進一步研究，以便為臨床選擇藥物提供參考。

[1] 高秀娟，吳范武，馬會霞，等.三清降糖方改善2型糖尿病患者胰島素抵抗的臨床研究[J].西部中醫(yī)藥，2012，25(4)：58-59.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：282，197，115.

[3] 方厚華，仇志華．糖尿病動物模型的研究進展[J].實驗動物科學(xué)與管理，2001，18(2)：39-42．

[4] 張華珍，楊矯，蘇言輝，等.羅格列酮對2型糖尿病患者胰島素敏感性和血清炎癥因子的影響[J].華西醫(yī)學(xué)，2009，24(7)：1730-1732.

[5] 張萌，馮建華，張詔.清解合劑對2型糖尿病炎癥因子水平的影響[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2009，33(6)：486-488.

[6] 黃江榮，杜亞明，鄢進，等.加味苓桂術(shù)甘湯對代謝綜合征大鼠血清抵抗素、脂聯(lián)素、胰島素、胰島素抵抗的影響[J].中國實驗方劑學(xué)雜志，2013，19(6)：227-230.

(本文編輯：習 沙)

Effectsofsustained-releaseSanqingjiangtangtabletoninsulinresistanceindiabeticrabbits

LVLixun,LITangdi,ZHAOLinlin,etal.

SchoolofPharmaceuticalSciences,HebeiUnitedUniversity,Hebei,Tangshan063000

ObjectiveTo observe the effect of sustained-release Sanqingjiangtang tablets on insulin resistance in diabetic rabbits.MethodsTo induce diabetes in healthy male rabbits by high fat sugar and high salt diet，and then inject streptozotocin (STZ).50healthy male rabbits were divided into5groups randomly, control group, model group, glimepiride group，Sanqingjiangtang decoction and sustained-release tablets group.Intragastric administration of the corresponding drugs respectively for 4weeks，and then measuring blood glucose, blood lipid, insulin, TNF-α and calculating HOMA-IR．ResultsFPG, FINS, HOMA-IR and TNF-α in model group were increased as compared with those in control group (P<0.01).FPG, FINS, HOMA-IR and TNF-α in glimepiride group，Sanqingjiangtang decoction and sustained-release tablets group were decreased as compared with those in model group (P<0.05).The levels of TG, TC and LDL-C in model group were higher than those in control group (P<0.01).HDL-C in model group was lower (P<0.01).The levels of TG, TC and LDL-C in glimepiride group，Sanqingjiangtang decoction and sustained-release tablets group were lower than those in model group (P<0.05).HDL-C was higher (P<0.05).ConclusionSanqingjiangtang sustained-release tablets can significantly decrease blood lipid and glucose in diabetic rabbits.

Disease models；Animal；Diabetes；Insulin resistance；Traditional Chinese medicine therapy；Scutellaria baicalensis

※ 項目來源：唐山市科學(xué)技術(shù)局2011年唐山市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計劃(第一批)(編號：1113020112a)

呂立勛(1972—)，女，副教授，碩士。研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及制劑。

R-332；R458.5；R587.301；R654.3；R915

A

1002-2619(2014)10-1543-03

2013-09-17)

1 河北聯(lián)合大學(xué)中醫(yī)學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)教研室，河北 唐山 063000