賴添武 趙權(quán) 徐奎 莫志和 林坤娟 黃敏 林世雨

(廣西防城港市中醫(yī)醫(yī)院 防城港 538021)

直腸癌是常見惡性腫瘤之一，2011年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示直腸癌在全球新增惡性腫瘤中排名第二，因其導(dǎo)致的死亡排名第三[1]。隨著我國社會(huì)的不斷進(jìn)步，人們生活習(xí)慣、飲食習(xí)慣及環(huán)境和遺傳因素的影響，直腸癌發(fā)病率已明顯增加，是繼肺癌、胃癌的又一大惡性腫瘤[2]。

外科手術(shù)切除病灶仍是可切除直腸癌的首選治療方式，傳統(tǒng)的外科開腹手術(shù)在上個(gè)40年代已基本發(fā)展成熟。上世紀(jì)90年代以來，腹腔鏡手術(shù)技術(shù)逐步在各個(gè)國家開展，因其創(chuàng)傷小，術(shù)后恢復(fù)快等優(yōu)勢(shì)在各類手術(shù)中廣泛開展[3]。

目前腹腔鏡手術(shù)已經(jīng)成為直腸癌的標(biāo)準(zhǔn)手術(shù)方式之一，研究顯示對(duì)于可切除的直腸癌而言，腹腔鏡手術(shù)的效果并不亞于開腹手術(shù)[4]。免疫系統(tǒng)功能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)都有極為密切的關(guān)系。然而，兩種不同手術(shù)方式對(duì)患者免疫系統(tǒng)的影響還存在爭議，尤其在惡性腫瘤，機(jī)體免疫系統(tǒng)已經(jīng)十分脆弱的情況下。為評(píng)估兩種手術(shù)方式對(duì)患者免疫系統(tǒng)的影響，本研究以外周NK細(xì)胞為研究對(duì)象，明確腹腔鏡手術(shù)與開腹手術(shù)對(duì)NK細(xì)胞功能的影響。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 研究納入2012年01月至2013年12月在防城港市中醫(yī)醫(yī)院收治直腸癌患者45例，隨機(jī)分為腹腔鏡手術(shù)組23例，開腹手術(shù)組22例，兩組患者在性別、年齡、Dukes 分期、平均手術(shù)時(shí)間上比較，差異無顯著性(P>0.05)。見表1。

表1 入組患者的一般資料

1.2 病例診斷標(biāo)準(zhǔn) ①符合術(shù)前纖維結(jié)直腸鏡和病理活檢證實(shí)直腸癌者(腫瘤距肛門距離≤10 cm)；②年齡在18～80歲之間；③無嚴(yán)重心、肝、肺、腦、腎等臟器合并癥；④無腹部手術(shù)史；⑤直腸癌為原發(fā)癌灶，不伴其他臟器來源的腫瘤；⑥直腸癌為單一病灶，無多發(fā)癌灶或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；⑦既往無惡性腫瘤史者。

1.3 病例排除標(biāo)準(zhǔn) ①病變已屬晚期，手術(shù)不能切除或原發(fā)灶雖切除，但遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病灶無法切除者；②術(shù)前、術(shù)中，直至術(shù)后第6 d接受化療者；③伴有任何氣腹禁忌證者；④急性腸梗阻者；⑤妊娠者；⑥直腸癌灶有浸潤者。

1.4 治療干預(yù)手段 兩組患者在圍手術(shù)期處置保持一致，麻醉方式采用氣管插管全身麻醉。腹腔鏡手術(shù)組按常規(guī)行4 ～5 孔操作，壓力維持在2 kPa。開腹手術(shù)組取腹部旁正中或經(jīng)腹直肌切口，兩組患者按直腸癌根治術(shù)施行手術(shù)。兩組患者的不同方式手術(shù)均由同一組醫(yī)生完成。

1.5 研究標(biāo)本采集 兩組患者在術(shù)前1 d，術(shù)后第3 d，術(shù)后第7 d采集外周靜脈血5 mL，輕輕混勻，于0～4°C保鮮冰箱暫時(shí)放置，隨后轉(zhuǎn)入-70℃凍存?zhèn)錂z。

1.6 主要儀器和試劑 小鼠抗人單克隆抗體CD16+56+-FITC購自美國BECKMAN COULTER公司，Human NK cell isolation kit 購自德國 Miltenyi Biotec公司，K562細(xì)胞株購自中科院上海細(xì)胞庫。FACS Cabilur流式細(xì)胞儀(美國BD公司)，SM-3全自動(dòng)酶免分析儀(北京天石醫(yī)療有限公司)。

1.7 研究指標(biāo)檢測 流式細(xì)胞儀檢測外周NK細(xì)胞：在流式細(xì)胞管中加入CD16+56+-FITC 20 μL，并設(shè)陰性對(duì)照組，再于每管加100 μL 待測樣品，常溫下避光25～35 min；分別加入溶血素2 mL混勻，上離心機(jī)離心10 min，去上清液；加入2 mL PBS混勻，上離心機(jī)離心10 min，去上清液；加入5%甲醛500 μL；上流式細(xì)胞儀檢測。MTT法檢測NK細(xì)胞殺傷力：參照Human NK cell isolation kit試劑盒說明書分選人外周NK細(xì)胞；以K562細(xì)胞株作為靶細(xì)胞，參照孫衛(wèi)民的方法[5]計(jì)算NK細(xì)胞殺傷力。

2 結(jié) 果

2.1 NK細(xì)胞功能在兩組患者術(shù)前與術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)變化情況 經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測外周NK細(xì)胞情況，發(fā)現(xiàn)術(shù)前兩組患者外周NK細(xì)胞差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，然而在術(shù)后第3 d和第7 d腹腔鏡手術(shù)組患者外周NK細(xì)胞均比開腹手術(shù)組患者明顯增多，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩組患者不同時(shí)間點(diǎn)NK細(xì)胞殺傷活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

組別時(shí)間NK細(xì)胞(%)NK細(xì)胞殺傷活性(%)開腹手術(shù)組術(shù)前1天15.05±5.9173.51±7.61(n=22)術(shù)后3天13.09±4.1472.38±8.11術(shù)后7天14.38±4.7274.37±6.77腹腔鏡手術(shù)組術(shù)前1天15.84±5.04△72.98±5.98△(n=23)術(shù)后3天15.67±3.39*73.21±6.05△術(shù)后7天17.67±4.53*75.08±7.24△

注.△與開腹手術(shù)組同時(shí)間點(diǎn)比較P>0.05，*與開腹手術(shù)組同時(shí)間點(diǎn)比較P<0.05

3 討 論

腫瘤免疫主要以細(xì)胞免疫為主，執(zhí)行細(xì)胞免疫功能的細(xì)胞主要有殺傷性T細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，以上三種細(xì)胞均可直接殺傷靶細(xì)胞。NK細(xì)胞是一群不同于T、B淋巴細(xì)胞的大顆粒淋巴細(xì)胞，主要分布于血液及外周淋巴器官，約占人外周血5%～10%的淋巴細(xì)胞[6]。NK細(xì)胞是先天效應(yīng)細(xì)胞，被譽(yù)為天然免疫的核心細(xì)胞，在不需要抗原提呈細(xì)胞的活化或誘導(dǎo)情況下，NK細(xì)胞即可擁有在不損傷正常細(xì)胞的前提下殺傷腫瘤細(xì)胞的能力[7]?？杀Ｗo(hù)宿主抵御外來細(xì)菌、病毒、寄生蟲入侵及清除體內(nèi)腫瘤細(xì)胞，起到天然免疫監(jiān)視作用[8]。NK細(xì)胞直接殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制與效應(yīng)T細(xì)胞極為相似，包括穿孔素/顆粒酶途徑、Fas與FasL途徑和TNFR途徑[9]。NK細(xì)胞功能狀態(tài)與腫瘤免疫逃逸關(guān)系密切[10]。

腹腔鏡直腸癌根治術(shù)是一種安全且有效的手術(shù)方式，其療效并不低于傳統(tǒng)開腹手術(shù)，與開腹手術(shù)比較腹腔鏡手術(shù)創(chuàng)傷明顯減少，術(shù)后疼痛輕、腸道功能恢復(fù)快，住院日短、并發(fā)癥少。目前，腹腔鏡手術(shù)已在各大醫(yī)院廣泛開展，然而該手術(shù)方式對(duì)免疫系統(tǒng)的影響并不明確[11]。腹腔鏡手術(shù)及開腹手術(shù)的創(chuàng)傷均可對(duì)患者造成打擊，手術(shù)創(chuàng)傷誘發(fā)的應(yīng)激狀態(tài)是免疫損傷的關(guān)鍵。按照常規(guī)，術(shù)后3天是應(yīng)激反應(yīng)的高峰，術(shù)后7天可基本恢復(fù)到術(shù)前水平[12]。研究已經(jīng)證實(shí)開腹手術(shù)對(duì)免疫系統(tǒng)打擊明顯，外周CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞明顯下降[13]。本研究也證實(shí)開腹手術(shù)組患者外周NK細(xì)胞在術(shù)后第3天明顯下降，與腹腔鏡手術(shù)組患者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在術(shù)后第7天也得到同樣的結(jié)果，可見，開腹手術(shù)對(duì)外周NK細(xì)胞有明顯影響，而腹腔鏡手術(shù)影響較小。課題組進(jìn)一步研究了NK細(xì)胞的殺傷活性，發(fā)現(xiàn)兩組患者不同時(shí)間點(diǎn)NK細(xì)胞殺傷活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明手術(shù)方式對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性無影響。

綜上所述，腹腔鏡手術(shù)對(duì)患者免疫系統(tǒng)影響小，且對(duì)機(jī)體創(chuàng)傷少，術(shù)后疼痛輕、腸道功能恢復(fù)快，住院日短、并發(fā)癥少，值得廣泛開展和推廣。

參 考 文 獻(xiàn)

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