邢桂芝，石哲群，褚金龍，房 成，張雅青

(1．唐山市工人醫(yī)院 檢驗(yàn)科，河北 唐山063000；2.唐山市康復(fù)醫(yī)療中心；3.唐山市工人醫(yī)院 血液科)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的發(fā)病是多種免疫系統(tǒng)功能異常的結(jié)果，患者體內(nèi)會(huì)出現(xiàn)T細(xì)胞功能異常、B細(xì)胞高度活化、NK細(xì)胞活性降低等病理改變，進(jìn)而可引起多種自身抗體的產(chǎn)生和免疫復(fù)合物的沉積，最終引發(fā)SLE相關(guān)組織損傷的出現(xiàn)，因此，有關(guān)細(xì)胞免疫和體液免疫失衡的課題始終是SLE相關(guān)研究領(lǐng)域的焦點(diǎn)問題[1]。本研究針對(duì)自身抗體檢測對(duì)SLE的診斷價(jià)值進(jìn)行了觀察和分析，現(xiàn)將研究的具體情況報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1研究對(duì)象

選取2011年6月至2012年12月我院收治的SLE患者100例作為SLE組，所有納入患者均符合美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)于1997年修訂的SLE診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)[2]，其中，男性患者為13例，女性患者為87例，患者平均年齡為(33.8±10.6)歲；選取同期我院收治的其他自身免疫病患者100例作為OAID組，其中，61例為干燥綜合征患者，25例為類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者，14例為系統(tǒng)性硬化癥患者，男性患者為15例，女性患者為85例，患者平均年齡為(41.6±12.9)；選取同期在我院查體正常者100例作為對(duì)照組，納入的研究對(duì)象均無自身免疫病，其中，男性16例，女性84例，平均年齡為(38.7±11.3)。3組研究對(duì)象在年齡、性別構(gòu)成方面的差異均無顯著性(P>0.05)。

1.2觀察指標(biāo)和檢測方法

對(duì)3組研究對(duì)象的血清抗核抗體(ANAIgG)、抗雙鏈DNA 抗體(抗dsDNA 抗體)、14種特異性IgG類自身抗體的表達(dá)陽性率進(jìn)行檢測和比較。具體方法如下：采集3組研究對(duì)象的清晨空腹靜脈血，以每分鐘3 000 r的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心后分離血清，保存于-20℃冰箱內(nèi)待測。血清標(biāo)本用PBS緩沖液進(jìn)行1∶100和1∶1 000稀釋，以陰陽血清作為對(duì)照，加入異硫氰酸熒光素FITC標(biāo)記的抗人球蛋白，應(yīng)用間接免疫熒光法(IIF法)，以人喉癌細(xì)胞Hep-2 及猴肝細(xì)胞為基質(zhì)，在熒光顯微鏡(德國歐蒙公司生產(chǎn))下對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行觀察，檢測(ANAIgG)的表達(dá)水平，以效價(jià)大于1∶100為陽性結(jié)果，以綠蠅短膜蟲為基質(zhì)，測定血清抗dsDNA 抗體的表達(dá)陽性率；將血清樣本稀釋后，加入堿性磷酸酶標(biāo)記的抗人IgG、溫育清洗后，采用線性免疫檢測法(LIA法)測定抗核抗體譜中14種抗體的表達(dá)陽性率，應(yīng)用EURO Line Scan 軟件對(duì)染色結(jié)果的灰度值進(jìn)行掃描，灰度值≤5時(shí)判定為陰性，灰度值在6至10之間時(shí)判定為弱陽性，灰度值≥11時(shí)判定為陽性。

1.3數(shù)據(jù)處理方法

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用EXCEL建立數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各組自身抗體表達(dá)陽性率之間的比較采用卡方檢驗(yàn)進(jìn)行分析，應(yīng)用Logistic多元回歸篩選用于SLE診斷的自身抗體指標(biāo)，以P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對(duì)象各類自身抗體表達(dá)陽性率的比較

見表1。

表1 3組研究對(duì)象各類自身抗體表達(dá)陽性率的比較(例，%)

注：與OAID組比較，*P<0.05

2.2SLE診斷相關(guān)自身抗體指標(biāo)的篩選以是否SLE患病為因變量(診斷標(biāo)準(zhǔn)為SLE臨床診斷金標(biāo)準(zhǔn))，以各自身抗體表達(dá)情況為自變量，應(yīng)用Logistic多元回歸進(jìn)行相關(guān)因素分析，見表2。

2.3各自身抗體的單項(xiàng)檢測及聯(lián)合檢測對(duì)SLE的診斷價(jià)值見表3。

表2 Logisctic 回歸篩選SLE診斷相關(guān)自身抗體指標(biāo)結(jié)果

表3 各自身抗體的單項(xiàng)檢測及聯(lián)合檢測對(duì)SLE的診斷價(jià)值

注：與單項(xiàng)自身抗體檢測，*P<0.05

3 討論

SLE是可以累及多個(gè)系統(tǒng)、多個(gè)器官的自身免疫性疾病，根據(jù)相關(guān)調(diào)查研究數(shù)據(jù)，我國女性人群中SLE患病率可達(dá)100/10萬，顯著高于白種人群女性的患病率，這也提示了遺傳基因的差異可能與SLE相關(guān)免疫功能異常具有相關(guān)性[3，4]。SLE常發(fā)生于免疫系統(tǒng)的自身耐受功能崩潰后，免疫系統(tǒng)中大量細(xì)胞因子的釋放和激活、自身抗體和免疫復(fù)合物的產(chǎn)生都參與了SLE發(fā)病和進(jìn)展的過程[5]。因此，血清自身抗體檢測用于SLE早期診斷的臨床意義是巨大的。本研究選取了IIF法和LIA法兩種方法進(jìn)行血清標(biāo)本中自身抗體表達(dá)情況的檢測，在各類自身抗體中，抗dsDNA抗體可對(duì)細(xì)胞功能產(chǎn)生干擾并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而且能夠侵入腎小球膜細(xì)胞并引發(fā)細(xì)胞增殖，從而最終導(dǎo)致蛋白尿的產(chǎn)生，因此，該抗體是SLE早期診斷的重要自身抗體指標(biāo)之一。組蛋白是細(xì)胞核內(nèi)含量最高的蛋白質(zhì)，也是構(gòu)成染色體的重要物質(zhì)，SLE患者血清中抗Histone抗體的產(chǎn)生與其出現(xiàn)白細(xì)胞減少和溶血性貧血等癥狀具有明顯的相關(guān)性[6]，本研究中應(yīng)用LIA法對(duì)抗Histone抗體等多種自身抗體進(jìn)行檢測。

已有很多研究證實(shí)，應(yīng)用多種自身抗體聯(lián)合檢測的方法可提高SLE診斷的敏感度，減少SLE的漏診率，但是由于開展研究的自身抗體項(xiàng)目有限、檢測方法難以普及、缺乏多中心大樣本隨機(jī)對(duì)照研究證據(jù)等原因，實(shí)際的研究中很少能進(jìn)行全面的自身抗體分析[7-9]。因此，既提高診斷效能又比較經(jīng)濟(jì)的最佳診斷策略是根據(jù)患者癥狀開展幾種特異自身抗體聯(lián)合檢測[10]。本研究結(jié)果顯示，SLE組患者的抗dsDNA抗體、抗nRNP/Sm抗體、抗Sm抗體、ARPA抗體、AnuA抗體、抗Histone抗體的表達(dá)陽性率均顯著高于OAID組(P<0.05)，Logistic多元回歸分析顯示，抗dsDNA 抗體、抗Sm抗體、AnuA抗體、抗Histone抗體、ARPA抗體等五項(xiàng)指標(biāo)最終被納入Logistic多元回歸方程，其表達(dá)陽性率與SLE的患病情況具有相關(guān)性(P<0.05)，說明上述五項(xiàng)自身抗體指標(biāo)的表達(dá)是SLE發(fā)病的相關(guān)危險(xiǎn)因素，可作為SLE早期診斷的參考指標(biāo)；應(yīng)用上述五種自身抗體進(jìn)行單項(xiàng)檢測時(shí)，敏感度均在20%-44%，應(yīng)用五種自身抗體聯(lián)合檢測時(shí)，敏感度為84%，顯著高于應(yīng)用單項(xiàng)檢測(P<0.05)，而與單項(xiàng)抗體檢測的特異性的差異無顯著性(P>0.05)，且聯(lián)合檢測的約登指數(shù)顯著高于單項(xiàng)自身抗體檢測(P<0.05)，說明應(yīng)用多種自身抗體聯(lián)合檢測可提高診斷的敏感度和總體效能，且不會(huì)對(duì)診斷的特異度造成顯著的影響。

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