高翠紅，高慶雙，范志娟，王景豐

(1.唐山市婦幼保健院 檢驗科，河北 唐山063000；2.天津市第三中心醫(yī)院 檢驗科，天津300170；3.唐山市工人醫(yī)院)

肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的發(fā)病率在我國居惡性腫瘤發(fā)病率的第2位。研究發(fā)現(xiàn)，機體的免疫功能狀態(tài)與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，原發(fā)性肝癌患者在荷瘤狀態(tài)下機體的免疫功能發(fā)生紊亂。一般認為腫瘤的免疫主要是細胞免疫[1,2]，T淋巴細胞亞群是反映機體細胞免疫功能的一個指標。為了探討全血T淋巴細胞亞群在肝癌患者中的診斷意義，本實驗采用流式細胞術(shù)分析了外周血淋巴細胞亞群中CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值的變化，并將其診斷效率進行了評估。

1 對象與方法

1.1對象

選取我院和唐山市工人醫(yī)院2012年5月至10月肝癌住院病人125例,其中男性68例，女性57例，平均年齡60歲。所有病例均為臨床確診病例,均經(jīng)過病理學明確診斷，并排除其他疾病。肝癌的診斷標準依照1999年第四屆全國肝癌學術(shù)會議的標準。正常人50例為唐山市工人醫(yī)院健康體檢人員，其中男性30例，女性20例，平均年齡55.4歲。所有受試者均經(jīng)體檢和實驗室檢測證實心、肝、腎和胰臟功能正常，實驗前未服用任何藥物，符合NCCLS要求的健康人群標準。在對照組病例的選取上，我們挑選一些與肝癌病人年齡、性別相匹配的健康人的樣本與肝癌病人進行比較，從而盡量減少疾病以外的因素帶來的誤差。兩組性別、年齡經(jīng)方差分析及卡方檢驗無統(tǒng)計學差異(P<0.05)。

1.2方法

取受檢者經(jīng)EDTA鉀鹽抗凝的空腹靜脈血2 ml，采用流式細胞術(shù)(FCM)檢測外周血中的T淋巴細胞亞群，儀器為美國BeckmanCoulter 公司EPICS-XL型流式細胞儀，試劑為Coulter公司進口試劑。

1.3統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1肝癌患者和正常人血T淋巴細胞亞群的比較見表1。

表1 肝癌患者和正常人血T淋巴細胞亞群的比較

由表1得出，肝癌患者CD8+明顯高于健康對照組(P<0.05)，而CD3+、CD4+及CD4+/ CD8+比值則顯著低于健康對照組(P<0.05),差異有統(tǒng)計學意義。

2.2T淋巴細胞亞群對肝癌患者的診斷價值見圖1、表2。

3 討論

評價診斷效率的兩個最基本指標為靈敏度和特異性。ROC曲線恰能從這兩個方面評價一個試驗的效能并通過曲線下面積直觀表示，便于不同方法間的比較。ROC曲線描述了診斷試驗區(qū)分患者與非患者的固有能力，不受患病率的影響，綜合了靈敏度、特異性兩個指標，而且考慮了所有可能的診斷界值得影響，因而能更客觀全面地評價診斷試驗的準確性，可用于診斷臨界點的正確選擇，對臨床實驗室工作尤為重要[3]。用ROC曲線下面積(AUC)評價診斷實驗的準確性，根據(jù)Sweets的判斷標準，AUC在0.5以下，說明實驗沒有診斷價值，在0.5-0.7之間有較低的準確性，在0.7-0.9之間有一定的準確性，>0.9則有較高的準確性。本研究ROC分析結(jié)果見表2，以AUC值來判斷，提示CD4+、CD8+有較高的診斷價值，CD3+診斷價值較低，CD4+/CD8+比值診斷價值最高。

圖1 CD3+、CD4+、CD8+ 及CD4+/ CD8+比值診斷肝癌的ROC曲線

項目AUC靈敏度特異性標準誤CD3+0.66523.0%95.0%0.054CD4+0.73025.2%96.3%0.051CD8+0.78428.4%96.7%0.046CD4+/CD8+0.94893.0%90.0%0.020

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機體細胞免疫功能狀態(tài)密切相關(guān)。T細胞在免疫應(yīng)答中起主導作用。T淋巴細胞按其表面標志物和功能不同分為CD4+T細胞亞群和CD8+T細胞亞群，前者主要為輔助性 T細胞(Th),后者包括抑制性T細胞(Ts)及殺傷性T細胞(Tc)。CD4+T細胞促進免疫應(yīng)答,其可影響B(tài)細胞抗體產(chǎn)生和促進CD8+T細胞活性，增強細胞毒性反應(yīng)。CD8+抑制免疫反應(yīng),其為殺傷性T細胞，直接發(fā)揮細胞毒性作用。細胞免疫的穩(wěn)定有賴于該兩亞群間的平衡。這種平衡失調(diào)將造成CD4+/CD8+比值的相應(yīng)改變,李菊香等[4]通過實驗證實與正常對照組相比，肝癌患者CD4+細胞數(shù)量明顯減少，CD8+細胞數(shù)量增多，CD4+/CD8+比值下降，主要原因可能是肝癌患者體內(nèi)癌細胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)化，生長因子 以及分泌一些體液性或可溶性因子，抑制-β(TGF-β) CD4+，T細胞應(yīng)答和活性細胞毒性 細胞的產(chǎn)生，導致CD4+/CD8+比值失衡?；颊呖俆細胞總數(shù)的CD3+下降,CD4+數(shù)量降低,CD8+細胞計數(shù)正常,是HCC患者細胞免疫功能失衡的一個表現(xiàn),在臨床中有必要使用能調(diào)節(jié)細胞免疫的藥物。本文結(jié)果表明,肝癌患者的CD3+、CD4+細胞百分比明顯低于正常人 (P<0.05),CD8+細胞百分比比正常人明顯升高(P<0.05),CD4+/CD8+比值比正常人顯著降低(P<0.05);與以往研究相符。說明肝癌患者的細胞免疫功能明顯下降,Th細胞減少,表明其免疫輔助功能降低。

由圖1ROC曲線分析結(jié)果顯示，在診斷效率上，全血CD3+的靈敏度和特異性較CD4+、CD8+低。可見獨立測定全血CD3+水平對診斷肝癌意義不大。

從表2可知，全血CD4+/ CD8+比值對診斷肝癌較CD4+、CD8+高。ROC曲線上距離左上角最近一點，兼顧靈敏度和特異度最大，此時，CD4+/ CD8+=0.263，CD4+/ CD8+比值有最佳診斷效率，靈敏度=93.0%，特異性=90.0%。AUC=0.948.由此可見，在診斷肝癌時，測定CD4+/CD8+比值優(yōu)于CD4+、CD8+的單項檢測。由此我們認為臨床檢測 T淋巴細胞亞群的含量對腫瘤的診斷起到一定的作用。由于CD4+細胞具有促進B細胞功能，輔助B細胞產(chǎn)生免疫抗體作用，而CD4+細胞則可抑制B細胞產(chǎn)生抗體或抑制細胞免疫反應(yīng),以 CD4+/CD8+比值為中心的免疫調(diào)節(jié)細胞是機體免疫狀態(tài)的中心環(huán)節(jié)[5，6]?？砂袰D4+/CD8+值作為機體免疫調(diào)節(jié)功能的指標用于判斷病情這對肝癌的早期發(fā)現(xiàn)和治療至關(guān)重要。

綜上所述，全血CD3+、CD4+、CD8+濃度及其CD4+/CD8+比值可作為臨床診斷肝癌的輔助指標，但真正有診斷價值的指標是CD4+/CD8+比值。

參考文獻：

[1]盧香蘭，李 霞，王萍萍，等.惡性腫瘤患者T細胞亞群和SL2R的變化及意義[J].中國醫(yī)科大學學報，2004,33(3)：243.

[2]陳復興，劉軍權(quán)，周忠海，等.癌癥患者T細胞亞群的臨床意義[J].細胞與分子免疫學雜志，2002,18(1)55.

[3]劉萃紅.應(yīng)用ROC曲線評價5項生化指標對肝炎的診斷價值[J].鄭州大學學報(醫(yī)學版)，2008,43(6)：1236.

[4]李菊香，蘇運欽，朱梓年,等.肝癌患者手術(shù)前后 細胞亞群的變化特點及其意義[J].暨南大學學報,2007,28(6):602.

[5]Khazaie K,von Boehmer H.The impact of CD4+CD25+Tregon tumor specific CD8+T cell cytotoxicity and cancer[J].Sem in Cancer Biol,2006,16(2):124.

[6]YASUTOMO K.The cellular andmolecularmechanism of CD4+/CD8+lineage commitment[J].J Med Invest,2002,49(1-2):1.