王秀麗, 段惠潔, 張國(guó)慶, 劉春玲

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 肺內(nèi)科, 新疆 烏魯木齊, 830000)

肺癌是中國(guó)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤[1]。肺腺癌、肺鱗癌是肺癌中最主要的兩種病理類(lèi)型。近年來(lái)，肺腺癌的診斷預(yù)測(cè)指標(biāo)不斷涌現(xiàn)，如表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)，棘皮動(dòng)物微管相關(guān)蛋白樣4-間變性淋巴瘤激酶(EML4-ALK)融合基因等。而肺鱗癌的診治卻發(fā)展緩慢，療效預(yù)測(cè)指標(biāo)較少、治療藥物有限,因此迫切需要找到一些對(duì)肺鱗癌療效預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性較高的指標(biāo)，從而指導(dǎo)臨床用藥。多西他賽是治療肺鱗癌的常用藥，以微管為作用靶點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)微管相關(guān)蛋白Stathmin和Ⅲ型β微管蛋白(β-tubulinⅢ)對(duì)微管類(lèi)化療藥物有較好地療效預(yù)測(cè)作用[2-5], 本研究擬以β-tubulinⅢ和Stathmin為候選指標(biāo)，通過(guò)前瞻性研究的方法找出預(yù)測(cè)多西他賽治療肺鱗癌療效的優(yōu)選標(biāo)志物或標(biāo)志物組合。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2007年10月—2012年8月新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科收治的肺鱗癌的患者95例，入組標(biāo)準(zhǔn): ① 經(jīng)纖維支氣管鏡或穿刺活檢或手術(shù)切除病理組織學(xué)明確診斷為肺鱗癌，且為初治者; ② 按國(guó)際TNM分期為ⅢB～Ⅳ期; ③ 至少有1個(gè)單徑可測(cè)量的病灶; ④ 年齡18～75歲，身體狀況ECOG評(píng)分0～1分，預(yù)計(jì)生存期≥3個(gè)月; ⑤ 無(wú)主要器官的功能障礙; ⑥ 入選患者均簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 正在接受其他抗腫瘤治療者; ② 妊娠、哺乳期或未育患者; ③ 原發(fā)性腦瘤或中樞神經(jīng)轉(zhuǎn)移瘤病情未控者; ④ 其他惡性腫瘤病史者; ⑤ 化膿性及慢性感染性傷口遷延不愈者; ⑥ 患有不易控制的精神病者; ⑦ 化療禁忌證者。其中男69例，女26例；年齡36～77歲，中位年齡66歲。年齡<60歲28例，≥60歲67例；不吸煙或少吸煙34例，大量吸煙61例; ECOG評(píng)分0分43例, 1分52例; ⅢB期45例，Ⅳ期50例。

1.2 方法

1.2.1 治療方案：收集入組患者的病理標(biāo)本及臨床資料，完善治療前檢查，明確分期，行多西他賽聯(lián)合順鉑方案化療：多西他賽75 mg/m2, 靜脈滴注d1, 順鉑30 mg/m2, 靜脈點(diǎn)滴d1～3，每21 d為1個(gè)化療周期?；?個(gè)周期后進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。對(duì)于疾病進(jìn)展者依據(jù)NCCN指南更換治療方案，并進(jìn)入隨訪，對(duì)于有效者，可繼續(xù)該方案治療，最多可達(dá)6個(gè)周期，以最佳療效作為最終療效評(píng)價(jià)。化療結(jié)束后定期復(fù)查、隨訪直至病變進(jìn)展或死亡。

1.2.2 檢測(cè)方法：免疫組化SP法檢測(cè)β-tubulinⅢ與Stathmin蛋白表達(dá)，β-tubulinⅢ與Stathmin一抗均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司，免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。收集入組患者的組織學(xué)標(biāo)本，制備4～5 μm厚的切片，按免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)β-tubulinⅢ、Stathmin的表達(dá)。用已知Stathmin、β-tubulinⅢ蛋白表達(dá)陽(yáng)性的切片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 觀察指標(biāo)

根據(jù)實(shí)體瘤的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)進(jìn)行總體最佳療效評(píng)價(jià)[6], 包括完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩(wěn)定(SD)、疾病進(jìn)展(PD)。主要觀察指標(biāo)為客觀有效率(ORR)；次要觀察指標(biāo)是疾病進(jìn)展時(shí)間(TTP)和總生存期(OS)?？陀^有效率(ORR)：定義為CR+PR病例所占所有病例百分比。TTP: 指患者第一次給藥至任何有記錄的病變進(jìn)展之日或任何原因引起的死亡之日的時(shí)間。OS: 患者開(kāi)始治療至患者死亡或末次隨訪時(shí)間。

1.4 染色結(jié)果判定

染色結(jié)果由病理科醫(yī)生進(jìn)行診斷和病理分級(jí)。每張切片在10×40倍鏡下，隨機(jī)選取5個(gè)視野，按腫瘤細(xì)胞著色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞率分別進(jìn)行計(jì)分。0分為陰性(-)，1～2分為陽(yáng)性(+)，3～6分為中度陽(yáng)性(2+)，7～9分為強(qiáng)陽(yáng)性(3+)。分析結(jié)果時(shí), ≤2分為陰性即低表達(dá), >2分為陽(yáng)性，即高表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1 臨床療效

95例患者中CR 0例, PR 31例, SD 37例, PD 27例; ORR為32.6%(31/95)。

2.2 不同臨床資料中Stathmin及β-tubulinⅢ蛋白的表達(dá)

β-tubulinⅢ和Stathmin均表達(dá)在腫瘤細(xì)胞的胞漿中，見(jiàn)圖1。

β-tubulinⅢ高表達(dá)50例, β-tubulinⅢ低表達(dá)組45例; Stathmin高表達(dá)53例, Stathmin低表達(dá)42例。β-tubulinⅢ和Stathmin陽(yáng)性表達(dá)在不同年齡、性別、吸煙情況中分布無(wú)顯著差異(P>0.05), 但在不同TNM分期、ECOG評(píng)分中分布差異顯著(P<0.05或P<0.01), 在ECOG評(píng)分欠佳、分期較晚的病例中陽(yáng)性表達(dá)率較高。見(jiàn)表1。

圖1 肺鱗癌組織中β-tubulinⅢ和Stathmin的表達(dá)水平

表1 Stathmin及β-tubulinⅢ蛋白的表達(dá)與臨床資料的關(guān)系

2.3 β-tubulinⅢ、Stathmin表達(dá)與多西他賽化療療效的關(guān)系

β-tubulinⅢ及Stathmin各自高表達(dá)組ORR均顯著低于各自低表達(dá)組(P<0.05)。β-tubulinⅢ、Stathmin均低表達(dá)組(雙低組)ORR為61.9%, β-tubulinⅢ、Stathmin均高表達(dá)組(雙高組)的ORR為20.7%, 雙低組ORR顯著高于雙高組(P<0.01), 并高于β-tubulinⅢ高表達(dá)組和Stathmin高表達(dá)組(P<0.01), 見(jiàn)表2。

2.4 β-tubulinⅢ、Stathmin表達(dá)與TTP、OS之間的關(guān)系

β-tubulinⅢ低表達(dá)組TTP和OS均優(yōu)于高表達(dá)組(P<0.01)。Stathmin低表達(dá)組TTP和OS也優(yōu)于高表達(dá)組(P<0.01)。雙低組患者的TTP和OS均顯著優(yōu)于β-tubulinⅢ低表達(dá)組、Stathmin低表達(dá)組和雙高組(P<0.01)。見(jiàn)表3。

表2 β-tubulinⅢ及Stathmin表達(dá)與化療療效的關(guān)系

表3 β-tubulinⅢ及Stathmin不同表達(dá)組間TTP及OS比較

3 討 論

肺鱗癌約占原發(fā)性肺癌的30%，沒(méi)有較好的靶向治療手段，細(xì)胞毒性藥物化療仍是晚期肺鱗癌的標(biāo)準(zhǔn)治療。多西他賽是一種半合成的紫杉烷類(lèi)廣譜抗腫瘤藥物，是肺鱗癌的主要治療藥物之一，通過(guò)促進(jìn)微管聚合并抑制微管解聚從而使腫瘤細(xì)胞的有絲分裂終止并凋亡[7]，從而達(dá)到抗腫瘤作用[8]。和其他化療藥物一樣，多西他賽的耐藥性是限制其臨床應(yīng)用的主要原因之一。在個(gè)體化治療模式逐漸推廣的今天，找到較好的療效預(yù)測(cè)指標(biāo)，避免無(wú)效化療是改善肺鱗癌治療效果的可行方法。Stathmin蛋白是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種微管不穩(wěn)定蛋白，在細(xì)胞周期運(yùn)行中調(diào)控微管的動(dòng)態(tài)平衡。Stathmin在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)[9]。研究[10]發(fā)現(xiàn)，Stathmin高表達(dá)會(huì)影響紫杉類(lèi)藥物和微管的結(jié)合，從而導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞對(duì)紫杉類(lèi)藥物的反應(yīng)下降。微管蛋白β-tubulinⅢ是另一種與作用于微管的化療藥物敏感性關(guān)系最密切的標(biāo)志物，在胃癌、乳腺癌、肺癌等惡性腫瘤中的研究中，均提示β-tubulinⅢ是預(yù)測(cè)微管類(lèi)化療藥物療效的潛在指標(biāo)[4-5]。

本研究結(jié)果顯示，β-tubulinⅢ與Stathmin表達(dá)在患者的性別、年齡、吸煙史等臨床特征分布方面差異不明顯，而在ECOG評(píng)分欠佳、分期較晚、療效差的病例中陽(yáng)性表達(dá)率較高，提示β-tubulinⅢ與Stathmin蛋白水平高表達(dá)是肺鱗癌治療的不良預(yù)后因素。結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，β-tubulinⅢ和Stathmin作為單獨(dú)預(yù)測(cè)指標(biāo)來(lái)預(yù)測(cè)多西他賽的近期、遠(yuǎn)期療效都有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值，和文獻(xiàn)報(bào)道相符[11-12]。而β-tubulinⅢ和Stathmin蛋白均低表達(dá)的病例在ORR和長(zhǎng)期生存方面均顯著優(yōu)于二者均高表達(dá)組及單獨(dú)低表達(dá)組，提示兩個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)療效的預(yù)測(cè)更加準(zhǔn)確和敏感。蒲驍麟等通過(guò)western-blot方法進(jìn)行了β-tubulinⅢ和Stathmin檢測(cè)，分析了二者對(duì)長(zhǎng)春瑞濱療效的預(yù)測(cè)作用[13-14]，和本研究結(jié)果一致，進(jìn)一步驗(yàn)證了β-tubulinⅢ和Stathmin聯(lián)合檢測(cè)在微管類(lèi)藥物療效預(yù)測(cè)中的準(zhǔn)確性[15]。

本研究證明了晚期肺鱗癌中β-tubulinⅢ與Stathmin蛋白表達(dá)水平對(duì)多西他賽的療效及預(yù)后有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值，能夠?yàn)榉西[癌的個(gè)體化治療提供一定的參考價(jià)值，且免疫組化方法簡(jiǎn)便易行，適合臨床常規(guī)檢測(cè)。

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