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(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長春 130021)

HPLC-ELSD法測定安神補腦液中維生素B1的含量

仲崇琳，楊美林

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長春 130021)

目的 建立測定安神補腦液中維生素B1的含量方法。方法 采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法(HPLC-ELSD)。色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為13 mmol/L乙酸銨(用乙酸調(diào)至pH 5.2)-乙腈(95∶5)，流速為0.3 mL/min；蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為115 ℃，霧化氣體為空氣或氮氣，氣體流速為2.8 L/min。結(jié)果 維生素Bl的進(jìn)樣量在1.008～5.04 μg范圍內(nèi),其峰面積的自然對數(shù)與進(jìn)樣量的自然對數(shù)具有良好的線性關(guān)系(r=0.999 3)，平均回收率為97.969%,RSD=1.26%(n=5)。結(jié)論 該方法靈敏、準(zhǔn)確，可用于安神補腦液中維生素B1含量測定。

安神補腦液；維生素B1；高效液相色譜法；蒸發(fā)光散射檢測器；含量測定

安神補腦液由鹿茸、制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草、大棗6味中藥及維生素B1為原料藥制成，對由神經(jīng)衰弱引起的失眠、多夢、健忘、頭暈、耳鳴、記憶力減退、頭痛等癥狀有顯著療效。對該癥同時引起的食欲不振、畏寒肢冷、腰膝酸軟、胃寒痙痛、四肢酸軟、倦怠乏力等癥狀也有顯效。筆者采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器法(HPLC-ELSD)測定安神補腦液中維生素B1的含量，旨在建立一種簡單易行、專屬性強(qiáng)、靈敏高的檢測方法，以用于該制劑的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)建立。

1 儀器與試劑

日本島津LC-10A高效液相色譜儀，Alltech 2000ES型蒸發(fā)光散射檢測器[美國奧泰科技(中國)有限公司]；N2000液相色譜工作站(浙江大學(xué)智達(dá)信息工程有限公司);安神補腦液(批號：120101至120110)；維生素B1對照品(衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所提供)；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱(迪馬公司)，流動相為13 mmol/L乙酸銨(用乙酸調(diào)至pH 5.2)-乙腈(95∶5)，流動相流速為：0.3 mL/min，采用蒸發(fā)光散射檢測器檢測，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為115 ℃，霧化氣體為空氣或氮氣，氣體流速為2.8 L/min。

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取維生素B1對照品適量，加水制成每1 mL含0.25 mg溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液的制備 精密量取本品25 mL，用乙酸乙酯提取3次，每次30 mL，棄去乙酸乙酯液，水層置水浴中揮去乙酸乙酯后，轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對照液干擾試驗 為進(jìn)一步考查實驗設(shè)計過程以及測定樣品中維生素B1方法及合理性，取不含維生素B1的陰性對照液10 μL，注入高效液相色譜儀，依法測定，結(jié)果陰性對照液色譜圖在維生素B1色譜峰相應(yīng)的保留時間處無干擾峰出現(xiàn)。

2.2 測定方法 精密吸取對照品溶液5，15 μL，供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀,測定，以外標(biāo)二點法對數(shù)方程計算，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密稱取維生素B1對照品適量，加水制成每1 mL中含維生素Bl0.252 mg的溶液,作為對照品溶液。分別精密吸取4，8，12，16，20 μL，注入高效液相色譜儀，以峰面積的自然對數(shù)為縱坐標(biāo),維生素B1進(jìn)樣量的自然對數(shù)為橫坐標(biāo)，線性回歸，回歸方程為：Y=5.941 8+1.109 8X(r=0.999 3)。結(jié)果在1.008～5.04 μg范圍內(nèi)維生素B1峰面積的自然對數(shù)與進(jìn)樣量的自然對數(shù)具有良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗 取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次10 μL，測各次峰面積，計算RSD=1.83%(n=5)，表明測定儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一批號供試品溶液，按2.2的含量測定方法測定，每隔2 h進(jìn)樣1次，測定峰面積，計算RSD=1.02%(n=5)，表明方法穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重現(xiàn)性試驗 取同一批號樣品，按含量測定方法進(jìn)行多次測定，計算RSD=1.11%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.5 回收率試驗 本試驗采用加樣回收法，精密稱取已知含量樣品5分，分別精密加入一定量維生素B1對照品溶液，按含量測定法進(jìn)行測定，結(jié)果平均回收率為97.969%,RSD為1.26%。

2.4 結(jié)果 根據(jù)確定的方法，精密吸取對照品溶液5，15 μL，供試品溶液10 μL,注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點法對數(shù)方程計算，測定10個批號的樣品，結(jié)果見表1。

表1 10批樣品含量測定結(jié)果

3 小結(jié)

3.1 供試品處理方法 安神補腦液是中西藥組合的復(fù)方制劑，為確保藥物中維生素B1含量測定的準(zhǔn)確性，比較了用乙酸乙酯提取和未用乙酸乙酯提取2種方法處理供試品過程中樣品的維生素B1的含量，結(jié)果用乙酸乙酯提取后，樣品的雜質(zhì)峰峰面積明顯降低，而對維生素B1的含量無任何影響[1-2]。

3.2 檢測器條件的選擇 ELSD檢測器具有高通用性，不受物質(zhì)本身化學(xué)結(jié)構(gòu)限制等優(yōu)點，試驗后發(fā)現(xiàn)其有較好的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和精密度[3-4]。

3.3 含量計算方法 為了減少實驗誤差，應(yīng)采用外標(biāo)二點法對數(shù)方程計算含量。本實驗分別對維生素B1峰面積的自然對數(shù)與進(jìn)樣量的自然對數(shù)進(jìn)行回歸，獲得了良好的線性關(guān)系；如果在線性范圍內(nèi)進(jìn)行對照品溶液兩點法校正和含量計算，則可以獲得準(zhǔn)確的測定結(jié)果[5]。

[1]畢月玲,李晶,陳學(xué)艷,等.HPLC-ELSD法測定山茱萸不同炮制品中齊墩果酸和熊果酸的含量[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2010,30(4):341-342.

[2]劉炎,王淑敏,劉志強(qiáng).當(dāng)歸補血湯中黃芪甲苷含量研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,24(1):29-30.

[3]趙宏峰,解生旭,韓冬,等.康艾注射液中黃芪甲苷的含量測定方法研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2008,24(6):651-652.

[4]崔麗娜,孫佳明,張輝.HPLC-ELSD法測定血栓心脈寧膠囊中膽酸的含量[J].吉林中醫(yī)藥,2011,31(2):165-166.

[5]王爽,張鈺泉,張幸,等.HPLC-ELSD法測定黃芪湯顆粒劑中黃芪甲苷的含量[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2011,27(6):1048-1049.

ContentdeterminationofVitaminB1inNervesBrainFluidbyHPLC-ELSD

ZHONG Chonglin,YANG Meilin

(Jilin Province Academy of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130021,China)

ObjectiveTo develop a method for the content determination of Vitamin B1in Nerves Brain Fluid.MethodsHPLC-ELSD was adopted.The determination was performed on octadecyl silane bonded silica as filler with mobile phase of 13 mm ammonium acetate (with acetic acid to PH5.2)-acetonitrile (95:5) at the flow rate of 0.3 mL/min.The drift tube temperature of ELSD detector was 115 ℃.Atomization for air or nitrogen gas,gas flow rate of 2.8 L/min.ResultsThe linear rang of vitamin B1was 1.008-5.04 μg(r=0.999 3) with an average recovery of 97.969%,RSD=1.26(n=5).ConclusionThe method is sensitive,accurate and suitable for content determination of vitamin B1in Nerves Brain Fluid.

nerves brain fluid;vitamin B1;HPLC;ELSD;content determination

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.017

仲崇琳(1964-),男,碩士,主任藥師。研究方向：中藥化學(xué)。

R284.1

：A

：2095-6258(2014)04-0609-02

2014-02-11)