石 鵬, 張一兵, 劉志飛, 霍炳越, 李紅民, 張 潔

(1. 河北聯(lián)合大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院, 河北 唐山, 063009; 河北省唐山市人民醫(yī)院,2. 泌尿二科; 3. 病理科, 河北 唐山, 063001)

前列腺癌是全球發(fā)病率第2、死亡率第6的男性惡性腫瘤[1]，其發(fā)生發(fā)展機(jī)制涉及多種因素。在腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中，多種血管生成因子參與調(diào)控腫瘤血管的生成，其中血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)起著關(guān)鍵性作用，目前已知其活性最強(qiáng)，與惡性腫瘤的淋巴管轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。張力蛋白同源第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶基因(PTEN)是1997年發(fā)現(xiàn)1個(gè)抑癌基因，其中基因突變或缺失是癌癥發(fā)病的重要機(jī)制之一，影響到腫瘤的轉(zhuǎn)移、病理分化和預(yù)后[2]。本研究通過免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)VEGF和PTEN蛋白在前列腺癌組織中的表達(dá)，并探討其臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2012年8月—2014年4月在唐山市人民醫(yī)院經(jīng)病理檢查證實(shí)的前列腺癌組織標(biāo)本56例，患者年齡50～79歲，平均(67.8±12.3)歲；所有患者術(shù)前均未行化療及激素治療；根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)及國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)推薦的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[3], 早期(Ⅰ期+Ⅱ期)38例，晚期(Ⅲ期+Ⅳ期)18例。Gleason組織學(xué)分級(jí)[4]: 高分化組(Gleason評(píng)分2～4)15例，中分化組(Gleason評(píng)分5～6)19例，低分化組(Gleason評(píng)分7～10)22例。同時(shí)選取30例行前列腺結(jié)節(jié)性增生摘除術(shù)患者組織標(biāo)本為陰性對(duì)照，患者年齡55～84歲，平均(65.4±18.1)歲。2組年齡等一般資料無顯著性差異(P>0.05), 具有可比性。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法

所有標(biāo)本經(jīng)中性甲醛固定，石蠟包埋脫蠟和水化，厚度約4 μm連續(xù)切片，微波抗原修復(fù)，預(yù)處理組織切片，滴加一抗-鼠抗人PTEN單克隆抗體(美國(guó)Santa Cruz公司)、免抗人VEGF多克隆抗體(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司)，3%過氧化氫去離子水孵育5 min。PBS沖洗3 min×3次；滴加一抗, 37 ℃孵育1 h, PBS沖洗3 min×3次，最后加入二抗和鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化酶溶液, 37 ℃孵育15 min, PBS沖洗3 min×3次；做DAB染色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，封片，鹽酸酒精分化、100%乙醇脫水、氨水返藍(lán)5 min; 二甲苯透明、中性樹膠封片、鏡檢。以PTEN染色陽性的良性前列腺組織和VEGF染色陽性的膀胱癌組織作為陽性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

VEGF染色陽性為胞質(zhì)呈棕褐色, PTEN蛋白染色陽性為細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕褐色顆粒。結(jié)果由2名不知情病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲評(píng)判。在400倍視野下每例標(biāo)本隨機(jī)選取不重復(fù)5個(gè)視野，以陽性細(xì)胞數(shù)所占比例的平均值作為該病例的細(xì)胞陽性率(%), 陽性率≥10%的標(biāo)本判為表達(dá)陽性，陽性率<10%則判為表達(dá)陰性。

2 結(jié) 果

2.1 2組VEGF和PTEN蛋白表達(dá)情況

PTEN蛋白在前列腺癌組織中與良性結(jié)節(jié)性增生前列腺組織中的陽性表達(dá)率分別為33.93%(19/56)和100%(30/30)，2組比較差異顯著(P<0.01)。VEGF蛋白在2組中陽性表達(dá)率分別為67.86%(38/56)和30.00%(9/30)，2組比較差異顯著(P<0.01)。

2.2 VEGF和PTEN蛋白與前列腺癌患者臨床、病理特征的關(guān)系

VEGF和PTEN蛋白的陽性表達(dá)率與年齡無顯著相關(guān)性(P>0.05)；不同TNM分期組織中VEGF及PTEN蛋白表達(dá)陽性率差異顯著(P<0.05); 高分化組VEGF蛋白表達(dá)最低，低分化組最高，3組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而高分化組PTEN蛋白陽性表達(dá)率顯著高于中、低分化組(P<0.05)。見表1。

表1 VEGF和PTEN蛋白表達(dá)與前列腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 VEGF和PTEN蛋白表達(dá)的相關(guān)性

對(duì)56例前列腺癌組織進(jìn)行Spearman等級(jí)相關(guān)性分析。結(jié)果表明隨TNM分期的增高，VEGF與PTEN蛋白表達(dá)顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.543，P<0.05)。

3 討 論

目前前列腺癌治療指南中，Gleason分級(jí)、前列腺特異性抗原(PSA)水平和前列腺組織穿刺活檢是決定治療方案的最重要的指標(biāo)[5]，但在PSA診斷灰區(qū)，穿刺活檢陽性率低，而即使PSA處于正常范圍，前列腺穿刺陽性率也常有發(fā)生。國(guó)內(nèi)外前列腺癌診斷治療技術(shù)不斷取得進(jìn)展，但其死亡率仍未顯著下降[6]。早期局限性前列腺癌采用根治性前列腺切除術(shù)或放射治療后可以治愈；而局部晚期和轉(zhuǎn)移性前列腺癌通常預(yù)后不良。目前臨床上用于預(yù)測(cè)患者預(yù)后最好的指標(biāo)是病理Gleason組織分級(jí)，通常分?jǐn)?shù)越高的患者預(yù)后較差。因此在早期診斷方面，亟須找到合適的特異性分子診斷標(biāo)記物。

腫瘤迅速生長(zhǎng)增大依賴新生血管形成來供應(yīng)營(yíng)養(yǎng)，在達(dá)到1～2 mm的直徑后若無新生血管生成，腫瘤將不再增大。因此，誘導(dǎo)血管的生成是惡性腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移的重要前提。VEGF作為最重要的促血管生成因子之一，一方面可與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的受體結(jié)合，促進(jìn)其分化和趨化，刺激血管生成，另一方面可直接作用于內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞分裂及遷移血管的構(gòu)建。研究[7]表明VEGF在各種實(shí)體腫瘤發(fā)生與發(fā)展中起重要作用，其在組織中的表達(dá)水平反映了該區(qū)域血管生成活性。VEDF在前列腺癌新生血管的生成和維持方面具有重要作用[8]，其分泌亦受雄激素調(diào)節(jié)[9]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)VEGF的表達(dá)在年齡間無顯著差異，而在前列腺癌組織中的表達(dá)水平顯著高于良性增生的前列腺組織，且隨前列腺癌組織TNM分期的增加而顯著增加，卻隨前列腺癌組織分化程度的升高而降低，與趙芳芳等[10]研究一致，說明VEGF可能是前列腺癌預(yù)后不良的預(yù)測(cè)指標(biāo)之一。

前列腺癌發(fā)病涉及多種基因、多種信號(hào)通路，如癌基因的激活、抑癌基因的失活等。PTEN是繼p53以來克隆到的又一個(gè)重要的腫瘤抑制基因，定位于人類染色體10q23，其編碼的蛋白即蛋白酪氨酸磷酸酶，能穩(wěn)定和增強(qiáng)細(xì)胞間粘附，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，從而抑制腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及腫瘤血管形成。研究表明多種惡性腫瘤組織或細(xì)胞株中PTEN基因存在高頻缺失或突變，及表達(dá)障礙等[11]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白在前列腺癌中的表達(dá)顯著低于對(duì)照組，且隨前列腺癌臨床分期和病理分級(jí)的增加而下降，與國(guó)外研究報(bào)道一致[12]。由此提示PTEN在前列腺癌中存在高頻突變或缺失，且前列腺癌組織分化程度越低、臨床分期越高，其丟失率越高。

Choorapoikayil等[13]研究表明，PTEN基因突變可誘導(dǎo)VEGF表達(dá)量及活性增加，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和腫瘤微血管形成，從而使腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力增高。本研究發(fā)現(xiàn)，在前列腺癌組織中VEGF與PTEN的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與上述報(bào)道一致，表明兩種基因在前列腺癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移的病理過程中可能具有負(fù)調(diào)節(jié)作用。因此將PTEN基因作為前列腺癌治療新靶點(diǎn)，在此基礎(chǔ)上同時(shí)抑制VEGF活性，從而抑制癌癥發(fā)生與發(fā)展，將成為治療前列腺癌行之有效的新策略。

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