李彩蓉，甘受益，黃紅霞

(1．湖北科技學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2．咸寧市中心醫(yī)院心內(nèi)科)

糖尿病(DM)是以長期高血糖為主要特征的代謝綜合征，可導(dǎo)致眼、神經(jīng)、腎臟、心血管等多臟器的慢性損害[1]。目前認(rèn)為糖尿病心肌病變的主要發(fā)病機(jī)制與細(xì)胞內(nèi)Ca2+穩(wěn)態(tài)失衡、氧化應(yīng)激、細(xì)胞外基質(zhì)的作用、細(xì)胞因子、脂肪酸的異常代謝有密切關(guān)系[2]。丹參酮ⅡA磺酸鈉(TSN)是從傳統(tǒng)中藥丹參的根系中提取的生物活性成分，在臨床上應(yīng)用廣泛[3]。本實驗通過建立糖尿病大鼠模型，探討丹參酮ⅡA磺酸鈉干預(yù)后對糖尿病大鼠心肌氧化應(yīng)激的影響。

1 材料與方法

1.1 動物模型與分組 清潔級近交系雄性Wister大鼠(180～220g)(由湖北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供)，飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境，每籠5只。將50只大鼠予以基礎(chǔ)飼料(脂肪10%，碳水化合物60%，蛋白質(zhì)22%，其他8%)喂養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周。隨機(jī)分為正常對照組(10只)，仍以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。余40只參照文獻(xiàn)[2]建立2型糖尿病模型。造模成功后取血糖較高的30只隨機(jī)分為3組：DM模型組(10只)，DM+TSN小劑量(10 mg/kg)干預(yù)組(10只)，DM+TSN大劑量(20 mg/kg)干預(yù)組(10只)，繼續(xù)給予高脂飲食，所有動物繼續(xù)喂養(yǎng)8周。

1.2 藥物和試劑 TSN由上海第一生化藥業(yè)有限公司，鏈脲佐菌素購自美國Sigma公司。丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(TAC)、一氧化氮(NO)、巰基(SH)測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3 標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測 所有動物給藥8周后，處死前夜大鼠禁食過夜，自由飲水。剪斷頸動脈取全血6～8ml，離心分離血清，待測各項指標(biāo)。并處死動物，迅速取出心臟，部分組織進(jìn)行手工勻漿，制成10%的組織勻漿。

1.4 血清及心肌組織氧化應(yīng)激指標(biāo)測定 采用菲羅啉比色法測定血清及心肌組織中TAC；硫代巴比妥酸(TBA)比色法測定血清及心肌組織中MDA含量；二硫硝基苯甲酸法測定SH含量；硝酸還原法檢測血清及心肌組織中NO含量。以上檢測按試劑盒說明書操作。

1.5 CK、LDH和cTnI含量測定 生化法測定CK，LDH含量。酶聯(lián)免疫法檢測cTnI含量。

2 結(jié) 果

2.1 實驗動物的基本情況 DM模型組大鼠出現(xiàn)多尿、多飲、多食狀態(tài)，毛色逐漸失去光澤甚至灰暗，精神萎靡，行動遲緩。TSN干預(yù)組上述情況較DM模型組明顯減輕。

2.2 TSN對糖尿病大鼠血清CK、LDH、cTnI含量的影響 DM模型組與正常對照組比較，血清中CK、LDH和cTnI含量增加(P<0.01)。小劑量TSN干預(yù)后，可降低糖尿病大鼠血清中CK、LDH和cTnI含量，但與DM模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異，和正常對照組比較，仍較高均有統(tǒng)計學(xué)差異，(P<0.05)。大劑量TSN干預(yù)后血清中CK、LDH和cTnI含量與DM模型組比較，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，其中血清中LDH和cTnI與正常對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)果見表1。

表1 TSN對糖尿病大鼠血清CK、LDH和cTnI含量的影響

2.3 TSN對糖尿病大鼠血清MDA、TAC、SH和NO含量的影響 與正常對照組比較，DM模型組血清MDA明顯升高，血清TAC、SH、NO比正常對照組均明顯降低，兩組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。兩組TSN干預(yù)后血清中TAC、SH和NO明顯升高，與DM模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)。大劑量TSN干預(yù)后還能明顯降低MDA含量，與DM組比較，有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。兩組TSN干預(yù)后血清中MDA、TAC、SH、NO與正常對照組比較，均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)。結(jié)果見表2。

表2 TSN對糖尿病大鼠血清MDA、TAC、SH、NO的影響

2.4 TSN對糖尿病大鼠心臟組織MDA、TAC、SH和NO含量的影響 與正常對照組比較，DM模型組心肌組織中MDA明顯升高， TAC、SH、NO含量明顯降低，兩組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。兩組TSN干預(yù)后能升高心肌組織中TAC和SH含量，與DM模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)。大劑量TSN干預(yù)后還能降低MDA含量，升高NO含量，與糖尿病模型組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，兩組TSN干預(yù)后心臟組織中MDA、TAC、SH、NO與正常對照組比較，均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05，P<0.01)。結(jié)果見表3。

表3 TSN對糖尿病大鼠心臟組織MDA、TAC、SH、NO的影響

3 討 論

糖尿病心肌病變是一類不同于高血壓、冠心病等的糖尿病特有的一類心臟疾病。心臟是人體最活躍的臟器之一，為完成各種生理活動心臟內(nèi)存在大量的細(xì)胞酶，乳酸脫氫酶是參與體內(nèi)能量代謝過程中的一個重要的酶[4]。肌酸激酶的功能是在生理水平上維持細(xì)胞內(nèi)的三磷酸腺苷濃度。心肌肌鈣蛋白I(cTnI)可檢出微小心肌損害，成為心肌細(xì)胞損傷敏感性和特異性最強(qiáng)的標(biāo)志物之一[5]。在本實驗中檢查結(jié)果提示糖尿病大鼠模型組血清中CK、LDH和cTnI(三者為肌肉組織急慢性損傷的標(biāo)志)含量升高，使用TSN后，血清中CK、LDH和cTnI含量下降，說明TSN對心肌具有保護(hù)作用。

氧化應(yīng)激是導(dǎo)致心血管疾病的重要原因之一，機(jī)體遭受各種有害刺激時，體內(nèi)活性自由基產(chǎn)生過多，氧化程度超過氧化物的清除，氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡[6]。MDA是脂質(zhì)過氧化物，其含量的變化可直接反應(yīng)氧化程度。體內(nèi)存在多種抗氧化物，可清除體內(nèi)產(chǎn)生的各種活性氧，阻止活性氧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的產(chǎn)生，因此測定組織和血漿中的TAC具有重要的生物學(xué)意義[7]。細(xì)胞和組織內(nèi)蛋白巰基的氧化狀態(tài)可指示氧化應(yīng)激。研究結(jié)果顯示糖尿病大鼠體內(nèi)大量活性氧產(chǎn)生，血清和心肌組織MDA水平明顯升高，TAC、SH水平明顯下降，經(jīng)TSN干預(yù)后，血清和心肌組織MDA水平明顯下降，TAC、SH水平明顯改善，結(jié)果顯示TSN對糖尿病大鼠體內(nèi)氧化/抗氧化整體防御體系有良好的調(diào)節(jié)作用。

NO是維持冠狀動脈舒張反應(yīng)的重要物質(zhì)。冠狀動脈內(nèi)一定量的一氧化氮的釋放，能夠維持較低的冠狀動脈阻力，保證心臟充足的供血，特別是慢性心腦血管的人，能大大減少冠狀動脈缺血的危害，防止冠心病的發(fā)作。本研究結(jié)果顯示糖尿病組心肌組織NO指標(biāo)明顯低于正常對照組，而TSN能升高NO水平。

綜上所述，TSN對糖尿病大鼠心肌具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制心肌氧化應(yīng)激有關(guān)。

[1]Battiprolu PK，Gillette TG，Wang ZV，et al.Diabetic cardiomyopathy:mechanisms and therapeutic targets[J].Drug Discov Today Dis Mech，2010,7(2):e135

[2]Bugger H，Abel ED.Molecular mechanisms of diabetic cardiomyopathy[J].Diabetologia，2014 ，57(4):660

[3]Gao S，Liu Z，Li H，et al.Cardiovascular actions and therapeutic potential of tanshinone ⅡA[J].Atherosclerosis，2012,220(1):3

[4]Ma H，Li SY，Brownlee M，et al.Advanced glycation endproduct (AGE) accumulation and AGE receptor (RAGE) up-regulation contribute to the onset of diabetic cardiomyopathy[J].J Cell Mol Med,2009，13(8B):1751

[5]劉忠和，余薇，劉超,等.姜黃素對糖尿病大鼠心肌的保護(hù)作用[J].中國病理生理雜志,2014,30(4)：725

[6]胡娟.大蒜素對糖尿病大鼠血清抗氧化作用的研究[J].湖北科技學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2014,28(1):12

[7]夏文華,饒玉霞.2型糖尿病患者內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量和功能研究[J].咸寧學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2012,26(1):12