游國(guó)葉，熊大偉

(信陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院 藥學(xué)院，河南 信陽 464000)

腸蟲清膠囊的主藥成分為阿苯達(dá)唑，阿苯達(dá)唑(Albendazole，ABZ)又名丙硫咪唑，化學(xué)名為5-丙硫基-1H-苯并咪唑-2-氨基甲酸甲酯，為一廣譜高效低毒的驅(qū)蟲藥．該藥由美國(guó)Smith Kline公司1977年首次上市，臨床上廣泛用于治療各種蠕蟲感染性疾病，其作用機(jī)理主要在于抑制蟲體延胡索酸還原酶，阻止蟲體能量的生成，從而達(dá)到殺滅蟲體的目的。該藥對(duì)人體及動(dòng)物寄生的線蟲、吸蟲、滌蟲均有強(qiáng)大的驅(qū)殺作用，并可顯著抑制蟲卵發(fā)育，在體內(nèi)無積蓄作用，其驅(qū)蟲譜、療效及毒性等均優(yōu)于目前已投產(chǎn)的其他抗蠕蟲藥物，該藥現(xiàn)已被列入醫(yī)保產(chǎn)品，成為臨床上用于治療各種蠕蟲感染性疾病的首選藥物[1]。在阿苯噠唑原料的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中，其含量測(cè)定在美國(guó)藥典29版、歐洲藥典5.0版和中國(guó)藥典2010年版[2]中均為滴定法，其膠囊劑含量測(cè)定在中國(guó)藥典2010年版規(guī)定的方法為分光光度法，利用295nm處的吸收系數(shù)計(jì)算含量[2]。HPLC法測(cè)定阿苯達(dá)唑的含量的報(bào)道較為少見[3]，我們通過建立HPLC法測(cè)定腸蟲清膠囊中阿苯達(dá)唑的含量，方法快速、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters2695高效液相色譜儀，Waters2996紫外檢測(cè)器 (美國(guó)Waters公司)；BP211D型半微量電子天平；PHS—2CA數(shù)字式酸度計(jì)(上海理達(dá)儀器廠)。

1.2 試藥

腸蟲清膠囊 (新鄉(xiāng)市同心藥業(yè)，批號(hào)20080110，20080113，20080117，規(guī)格0.2g)；阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?(中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)所，批號(hào)100373-200301)；純化水(新鄉(xiāng)市平安藥業(yè)有限公司)；甲醇為色譜純(江蘇國(guó)達(dá)，200704)，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

阿苯達(dá)唑?yàn)閴A性化合物，和硅膠柱的硅醇基有較強(qiáng)的相互作用，會(huì)造成強(qiáng)保留，因此應(yīng)選擇硅醇相互作用弱的色譜柱，Luna C18的硅醇相互作用約為0.2[3]，能夠獲得理想的分析結(jié)果。

流動(dòng)相之一應(yīng)該選擇緩沖液，以獲得穩(wěn)定的保留時(shí)間，同時(shí)為了解決阿苯達(dá)唑的溶解性問題，選取0.1 mol/L醋酸銨緩沖液(用醋酸調(diào)節(jié)pH至3.1)。當(dāng)緩沖液和甲醇的比例調(diào)整到40∶60時(shí)，阿苯達(dá)唑的保留時(shí)間在穩(wěn)定在9.8 min左右。流量為1 mL/min，柱溫20℃。

取阿苯噠唑?qū)φ掌酚么姿崛芙?，流?dòng)相稀釋成1 mg/mL，在200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，阿苯噠唑在288 nm處有最大吸收，故紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)為288 nm。

所以色譜條件為：

色譜柱：Luna C18(5μm,(250×4.6)mm)；流動(dòng)相：甲醇-0.1 mol/L醋酸銨緩沖液(用醋酸調(diào)節(jié)pH至3.1)(60：40)；檢測(cè)波長(zhǎng)：288 nm；流量：1 mL/min;進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：20℃。

在上述色譜條件下，阿苯達(dá)唑的色譜圖見圖1，和雜質(zhì)峰的分離度大于1.5，拖尾因子1.03，理論塔板數(shù)按阿苯達(dá)唑計(jì)算大于3 500。

圖1 阿苯達(dá)唑的色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?0 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，準(zhǔn)確量取5.0 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，稀釋成0.5 mg/mL對(duì)照品液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿苯達(dá)唑50 mg)，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液5.0 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖勻，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密稱取干燥至恒重的阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?0 mg，置50 mL量瓶中，加醋酸10 mL，振搖使溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得阿苯達(dá)唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液。分別準(zhǔn)確量取1.0，2.0，4.0，5.0，6.0，8.0和10.0 mL阿苯達(dá)唑?qū)φ掌穬?chǔ)備液置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相定容，搖均，即成0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.8，1.0 mg/mL系列溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)濃度作線性回歸，結(jié)果見圖2。結(jié)果表明，阿苯達(dá)唑在0.1～1.0 mg/mL濃度范圍內(nèi)A=2.85×106C+6.5×104，r=0.999 5,線性關(guān)系良好。

圖2 阿苯達(dá)唑的線性關(guān)系

2.4 精密度試驗(yàn)

取0.5 mg/mL阿苯達(dá)唑?qū)φ掌啡芤?，?.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，精密度試驗(yàn)RSD為0.40%，精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)20080113樣品，按2.3項(xiàng)下方法制備6份供試液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為0.66%，重復(fù)性良好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品(20080113)細(xì)粉約50 mg，分別加入高、中、低(20 mg、40 mg、60 mg)不同量干燥至恒重的阿苯達(dá)唑?qū)φ掌?，?份，按含量測(cè)定方法進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液在放置時(shí)間為0、2、4、6、10 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為0.52%，穩(wěn)定性良好。

2.8 定量限

按信噪比為3(S/N=3)對(duì)最低檢測(cè)限進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，當(dāng)進(jìn)樣濃度為0.25μg/mL時(shí)，阿苯噠唑峰信號(hào)約為基線噪音的3倍，即最低檢測(cè)濃度為0.25μg/mL。

3 樣品含量測(cè)定

取3批樣品各20粒膠囊，傾出內(nèi)容物，囊殼用小刷拭凈，精密稱定，精密稱取適量(約相當(dāng)于阿苯達(dá)唑50 mg)，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供品溶液。分別取供試液和2.2.1項(xiàng)下對(duì)照品液，在2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，用峰面積外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

注：樣品含量計(jì)算方法為

4 討論

阿苯達(dá)唑微溶于丙酮、乙酸，不溶于乙醇、水，溶于乙酸[3]，制約了流動(dòng)相的選擇，采用甲醇-醋酸銨緩沖液為流動(dòng)相，通過調(diào)整流動(dòng)相比例和PH值,既解決了溶解性問題,也獲得了較好的系統(tǒng)適用性。

雖然藥典規(guī)定的分光光度法在295 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收值，但在我們實(shí)驗(yàn)的色譜條件下，阿苯達(dá)唑的最大吸收在288 nm處，這是因?yàn)樵趐H3.1時(shí)，阿苯達(dá)唑以離子狀態(tài)存在，共軛結(jié)構(gòu)減少，最大吸收向短波方向移動(dòng)。

與中國(guó)藥典規(guī)定的分光光度法相比，本法能夠排除雜質(zhì)干擾，準(zhǔn)確度高，重復(fù)性、穩(wěn)定性好。

參考文獻(xiàn)：

[1] 萬啟惠．廣譜驅(qū)蠕蟲新藥—— 丙硫咪唑[J].遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1988，11(1)：73-74.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005:290.

[3] 邵超.HPLC法測(cè)定阿苯達(dá)唑顆粒的含量[J].黑龍江醫(yī)藥，2011，3(5)：31.