趙劍 夏大勝 李彬 李超 張峰

內(nèi)脂素又稱為前B細胞克隆增強因子，是一種由脂肪組織分泌的細胞因子，臨床研究發(fā)現(xiàn)冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(冠心病)患者存在高內(nèi)脂素血癥[1]。磷酸化c-jun是激活蛋白-1的活性形式，可作為核轉(zhuǎn)錄因子對動脈粥樣硬化形成過程中各種炎癥因子的生成進行調(diào)控；CD40L是相對分子量為39×103的Ⅱ型跨膜蛋白，主要表達于血小板膜表面，通過與CD40結(jié)合實現(xiàn)炎癥信號細胞內(nèi)傳導(dǎo)。磷酸化c-jun與CD40L是體內(nèi)重要的炎癥反應(yīng)標志物，研究顯示冠心病患者磷酸化c-jun及CD40L水平升高[2-3]。組織因子(TF)是凝血途徑的啟動因子，與動脈粥樣硬化整個病理過程關(guān)系密切[4]。本研究旨在探討冠心病患者內(nèi)脂素與炎癥標志物磷酸化c-jun 、CD40L及組織因子的關(guān)系。

對象與方法

一、 研究對象

隨機選取2012年9月 至2014年3月首次在天津市第一中心醫(yī)院心內(nèi)科住院治療的75例不穩(wěn)定型心絞痛(UAP)患者、65例穩(wěn)定型心絞痛(SAP)患者，均經(jīng)冠狀動脈造影確診,符合中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)會制定的UAP或SAP診斷標準[5]。對照組60例，為冠狀動脈造影正常、運動平板實驗陰性的患者。所選研究對象均為排除腦血管疾病、周圍動脈疾病、感染、全身免疫性疾病、肝腎功能不全、惡性腫瘤者的患者，且均未服用過影響血液炎性因子水平的藥物，如激素類、免疫抑制劑、他汀類等藥物。

二、方 法

1.內(nèi)脂素、磷酸化c-jun、TF、組織因子途徑抑制物(TFPI)指標檢測

所有受試對象隔夜禁食12 h，清晨7時采集肘靜脈血5 ml，室溫下放置2 h后，以3 000×g離心10 min分離血清，-80℃冰箱中保存待檢查。內(nèi)脂素試劑盒購自美國ADL公司，磷酸化c-jun試劑盒購自美國CST公司，TF、TFPI試劑盒購自美國ADI公司，均采用雙抗體夾心ELISA，嚴格按試劑盒說明書進行操作。通過計算機軟件計算出內(nèi)脂素、磷酸化c-jun、TF、TFPI血清水平。

2.血小板表面CD40L表達水平測定

受試者隔夜禁食12 h，清晨7時采取肘靜脈血2 ml,加入含1%的EDTA抗凝試管中，全血檢測血小板CD40L。流式抗體FTIC Mouse IgGκ及FTIC anti-human CD40L購自美國 BD PharMingen公司，按說明書要求進行操作。取2支FALCON管，分別標記(+)和(-)，兩管均加入標本(EDTA-K2抗凝靜脈血)5 μl。向(-)管中加入FTIC Mouse IgGκ 20 μl，向(+)管中加入FTIC anti-human CD40L 20 μl，混勻。室溫避光靜置30 min。每管加入生理鹽水2 ml，混勻，2 000 rpm離心5 min，棄上清。再向每管加入生理鹽水1 ml，混勻，通過流式細胞儀統(tǒng)計血小板膜CD40L平均熒光強度。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié) 果

一、UAP組、SAP組、對照組患者一般臨床資料比較

UAP組、SAP組、對照組一般臨床資料比較見表1。

表1 UAP組、SAP組、對照組患者一般臨床資料比較

二、UAP組、SAP組、對照組患者血清內(nèi)脂素、磷酸化c-jun、CD40L、TF、TFPI及TF/TFPI水平的比較

UAP組患者血清內(nèi)脂素、磷酸化c-jun、CD40L、TF、TFPI水平及TF/TFPI值高于SAP組及對照組(P<0.05或P<0.01)；SAP組上述指標均高于對照組(P<0.05或P<0.01)，見表2。

三、線性相關(guān)分析

冠心病患者內(nèi)脂素水平與磷酸化c-jun、CD40L、TF、TFPI水平及TF/TFPI值呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.66、0.57、0.56、0.53、0.47(P均<0.01)。

表2 三組患者血清內(nèi)脂素、磷酸化c-jun、CD40L、TF、TFPI及TF/TFPI的比較

四、多重線性逐步回歸分析

以冠心病患者年齡、性別(女=0，男=1)、吸煙史(否=0，是=1)、糖尿病史(否=0，是=1)、高血壓病史(否=0，是=1)、BMI、WHR、TC、TG、LDL-C、HDL-C、空腹血糖、空腹胰島素及內(nèi)脂素為自變量，分別以磷酸化c-jun、CD40L、組織因子為因變量，進行多重線性逐步回歸分析，結(jié)果顯示血清內(nèi)脂素水平與磷酸化c-jun、CD40L、TF水平呈獨立正相關(guān)，見表3-5。

表3 冠心病患者血清磷酸化c-jun水平影響因素的多重線性回歸分析

表4 冠心病患者血清CD40L水平影響因素的多重線性回歸分析

表5 冠心病患者血清TF水平影響因素的多重線性回歸分析

討 論

近年來人們對脂肪組織內(nèi)分泌特性有了新的認識，以內(nèi)脂素為代表的脂肪細胞因子日益受到關(guān)注。本研究結(jié)果顯示冠心病患者表現(xiàn)為高內(nèi)脂素血癥，且血漿內(nèi)脂素水平與病情程度相關(guān)。其機制可能是高內(nèi)脂素血癥通過促進內(nèi)皮細胞增生、誘導(dǎo)血管平滑肌細胞增殖與變性、促進血小板聚集而影響冠狀動脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展[5]。

內(nèi)脂素與炎癥反應(yīng)關(guān)系密切，是體內(nèi)重要的促炎癥因子。研究顯示內(nèi)脂素通過促進IL-6、IL-8、MCP-1等炎癥因子分泌和釋放、誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子NF-kB活化參與機體炎癥反應(yīng)[6-7]。磷酸化c-jun與CD40L是體內(nèi)重要的炎癥反應(yīng)標志物，本文結(jié)果表明冠心病患者磷酸化c-jun與CD40L水平明顯升高；線性相關(guān)分析顯示血清內(nèi)脂素水平與磷酸化c-jun及CD40L呈正相關(guān)，在校正混雜因素后，二者仍呈獨立正相關(guān)。磷酸化c-jun可以促進內(nèi)皮細胞黏附分子產(chǎn)生、增加趨化因子表達，并通過促進巨噬細胞表面LOX-1表達增加泡沫細胞生成，進而促進動脈粥樣硬化形成與發(fā)展。研究表明高內(nèi)脂素血癥通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)提高內(nèi)皮細胞活性氧化物(ROS)水平，ROS可以增加內(nèi)脂素信號傳導(dǎo)途徑上c-jun氨基末端激酶磷酸化強度，進而促進c-jun活化[8]。另外，內(nèi)脂素通過刺激血管緊張素原生成、增加血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性促進血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)產(chǎn)生，AngⅡ與受體AT1特異性結(jié)合，通過MAPK-JNK等細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)通路實現(xiàn)c-jun磷酸化[9-10]。CD40L又稱腫瘤壞死因子相關(guān)激活蛋白，存在于血小板α顆粒中，在血小板激活后迅速表達于血小板表面，與內(nèi)皮細胞表達CD40相互作用實現(xiàn)炎癥信號細胞內(nèi)傳導(dǎo)。內(nèi)脂素通過促進內(nèi)皮細胞炎癥反應(yīng)，致內(nèi)皮損傷，激活凝血途徑；誘導(dǎo)嗜酸粒細胞分泌血小板活化因子，促進血小板活化，提高 CD40L表達水平[11]。

TF即第三凝血因子，又稱組織凝血活酶，是一個分子量約47 KD的跨膜糖蛋白，在啟動凝血反應(yīng)時，細胞表面TF首先與Ⅶa和(或)Ⅶ結(jié)合成TF-Ⅶa或TF-Ⅶ復(fù)合物。TF既是凝血因子Ⅶ(FⅦ)在細胞表面的受體，又是FⅦ或激活的因子Ⅶ的輔因子，它與Ⅶ或Ⅶa形成復(fù)合物，進而激活凝血因子Ⅹ與凝血因子Ⅸ，同時啟動內(nèi)、外兩條凝血途徑。血液中單核/巨噬細胞、多形核白細胞等均可表達TF，TF/FⅦa促進單核細胞向巨噬細胞轉(zhuǎn)化，并誘導(dǎo)巨噬細胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，同時通過調(diào)控細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，促進成纖維細胞、單核細胞等遷移和增殖，參與動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展[12]。本研究發(fā)現(xiàn)冠心病患者血清TF水平升高，且UAP組高于SAP組；內(nèi)脂素與TF水平呈獨立正相關(guān)。高內(nèi)脂素血癥通過上調(diào)炎癥相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子NF-kB活性，引起TF mRNA轉(zhuǎn)錄增加，促進內(nèi)皮細胞中組織因子合成[13]。高內(nèi)脂素血癥刺激單核/巨噬細胞分泌TNF-α、IL-6、IL-12，促進T淋巴細胞分泌IL-2、TNF-α、IL-18等細胞因子；影響肝臟分泌CRP；導(dǎo)致內(nèi)皮細胞炎癥反應(yīng)，加劇內(nèi)皮損傷、斑塊破裂，進而促進組織因子表達。TFPI是生理條件下血液中存在的一種天然抗凝物質(zhì)，可直接抑制FXa活性，也可形成TFPI-FXa-FⅦa-TF復(fù)合物抑制FⅦa-TF活性，抑制血栓形成。本文結(jié)果提示內(nèi)脂素與TFPI、TF/TFPI呈正相關(guān)，表明內(nèi)脂素在引起TF升高的同時，TFPI的表達也會代償性升高，但增加的TFPI不能阻斷TF所介導(dǎo)的凝血活性，TF-TFPI系統(tǒng)的失衡會隨著內(nèi)脂素水平升高而加劇。

綜上所述，血清內(nèi)脂素水平升高能夠促進炎癥標志物磷酸化c-jun、CD40L及組織因子表達,進而影響動脈粥樣硬化形成與發(fā)展。

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