徐 暘，何滟澦，閆 靜

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040)

虎眼萬年青(Ornithogalum caudatum Ait)為百合科虎眼萬年青屬常綠多年生草本植物的干燥全草，又名胡連萬年青、海蔥、葫蘆蘭、珍珠草、鳥乳花，屬常見的觀賞花卉，原產(chǎn)于非洲南部，我國各地廣泛栽培[1－2].虎眼萬年青味甘、性微寒，歸肝、脾經(jīng)，具有清熱解毒，消堅散結(jié)的功能，是民間常用中藥材，將其莖葉搗碎外敷可以消除疔瘡癰癤、無名腫痛，內(nèi)服則能化瘀解毒，治療肝硬化、肝炎等疾病[3]，近年研究發(fā)現(xiàn)其有很強(qiáng)的抗癌活性[4－6]，目前對于虎眼萬年青的研究主要集中在抗腫瘤及其對機(jī)體調(diào)節(jié)免疫方向和化學(xué)成分方向，對于其抗氧化作用的實驗研究尚未見報道.因此，本文用虎眼萬年青乙醇提取物中粗總皂苷對小鼠體內(nèi)抗氧化功能進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步深入探討虎眼萬年青具有抗癌、鎮(zhèn)痛抗炎和提高免疫力等生物活性提供理論和技術(shù)支持.

1 材料和方法

1.1 儀器

R－202旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物技術(shù)有限公司);JY系列藥物電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司);UV160型紫外可見光分光光度計(島津公司).

1.2 材料

虎眼萬年青購買于吉林省白山市長白縣;昆明種小鼠購買于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心;SOD、MDA試劑盒購于南京建成生物試劑公司.

1.3 方法

1.3.1 藥物的提取與分離

稱取虎眼萬年青干燥粗粉適量，用70%乙醇加熱回流提取，提取3次，合并提取液，抽濾后55℃低壓濃縮，得到虎眼萬年青乙醇提取物的水溶液依次用乙醚和水飽和的正丁醇萃取，正丁醇層進(jìn)行濃縮、烘干，得虎眼萬年青粗總皂苷浸膏，放置4℃冰箱中備用.

1.3.2 動物處理

取昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重18～22 g，在實驗室適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，隨機(jī)分成5組，每組10只，灌胃給藥，灌胃前小鼠禁食不禁水12 h.

第一組空白對照組給予蒸餾水(10 mL/kg)，第二組陽性對照組(Vc組)給予Vc水溶液(10 mL/kg、15 mg/kg)，現(xiàn)用現(xiàn)配;第三組高劑量組給予虎眼萬年青總皂苷(20 mL/kg、30 mg/kg)，第四組中劑量組給予虎眼萬年青總皂苷(10 mL/kg、15 mg/kg)，第五組低劑量組給予虎眼萬年青總皂苷(5 mL/kg、7.5 mg/kg).

1.3.3 SOD和MDA的含量測定

每天灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃14 d，最后一次灌胃后30 min后摘眼球取血，血液凝固后，4℃，3 000 r/min離心10 min，制成血清待用.將采完血的小鼠頸椎脫臼法處死，取出肝臟，用冰冷的生理鹽水洗滌數(shù)次，濾紙吸干水分，稱取1 g放入小燒杯中剪碎，轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器中，用0.86%的生理鹽水配成10%的肝組織勻漿，充分研磨數(shù)次后使組織勻漿化后以4 000 r/min離心10 min，收集上清液待用.

SOD活性檢測:分別輕取血清10 μL和10%的肝組織勻漿液30 μL，按照檢測試劑盒說明書操作，依次加入各種試劑，混勻，置37℃恒溫水浴鍋加熱40 min后，加入顯色劑，混勻，室溫放置10 min，于550 nm波長處，1 cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色，測定測試管及對照管的吸光度值.

血清中總SOD活力(U/mL)=[(對照管吸光度值一測定管吸光度值)/對照管吸光度值]/50%×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)×樣本測試前的稀釋倍數(shù)

組織勻漿中SOD活力(U/mL)=[(對照管吸光度值一測定管吸光度值)/對照管吸光度值]/50% ×反應(yīng)液總體積/取樣量(mL)/待測樣本蛋白濃度(mgproL/mL)

MDA含量檢測:分別輕取血清10 μL和10%的肝組織勻漿液10 μL，按照檢測試劑盒說明書，將試劑依次加入各個試管，渦旋混勻器混勻，試管口用保鮮膜扎緊，用針頭刺一小孔，95℃水浴40 min，取出后流水冷卻，532 nm波長處，l cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色，測定各管的吸光度.

血清中MDA含量=[(測定管吸光度值－測定空白管吸光度值)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度值－標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度值)]×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 nmol/mL)

組織中MDA含量=[(測定管吸光度值－測定空白管吸光度值)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度值－標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度值)]×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 nmol/mL)/待測樣品蛋白濃度(mgproL/mL)

1.3.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果分析

虎眼萬年青粗總皂苷濃度為高、中、低(30、15、7.5 mg/kg)時小鼠血清中SOD的活力均顯著高于空白組中SOD的活力;小鼠血中MDA的含量極顯著的低于空白組(P＜0.01).與空白組相比，高、中、低各劑量組中MDA的含量均存在顯著性差異，高、中劑量組中SOD的活力存在顯著性差異(P＜0.01)，低劑量組中SOD的活力存在顯著性差異(P ＜0.05);與 Vc對照組(15 mg/kg)相比，高劑量組血中SOD的活力顯著高于對照組(P＜0.01)，高劑量組血中MDA的含量無顯著性差異.實驗組血中SOD的活力隨著濃度的增高而提高，MDA的含量也隨著濃度的增高而降低.

虎眼萬年青乙醇提取物中粗總皂苷濃度的高、中、低(30、15、7.5 mg/kg)在小鼠肝組織中 MDA的含量極顯著的低于空白組(P＜0.01)，SOD的活力均顯著高于空白組中的SOD的活力(P＜0.01).與空白組相比，高劑量組中MDA的含量與SOD的活力均有顯著性差異(P＜0.01)，中、低劑量組中MDA的含量存在顯著性差異(P＜0.05);與Vc對照組(15 mg/kg)相比，高劑量組中MDA的含量顯著低于Vc對照組(P＜0.05)，SOD的活力無顯著性差異.虎眼萬年青乙醇提取物可以顯著的提高小鼠體內(nèi)SOD的活力和顯著的降低體內(nèi)MDA的含量，尤其是高劑量組中SOD的活力顯著高于空白組(P＜0.01)，MDA的含量極顯著的低于空白組(P＜0.01).實驗中肝組織中SOD的活力隨著濃度的增高而提高，MDA的含量也隨著濃度的增高而降低.

表1 虎眼萬年青提取物對小鼠血清和肝組織MDA含量的影響±S，n=10)

表1 虎眼萬年青提取物對小鼠血清和肝組織MDA含量的影響±S，n=10)

4.062 8 ±0.549 0 3.646 9 ±0.609 3 Vc對照組 2.229 8 ±0.814 9 2.814 1 ±0.580 4高劑量組 2.087 3 ±0.553 3 2.557 2 ±0.119 1中劑量組 2.353 6 ±0.589 6 2.896 1 ±0.479 6低劑量組/%空白組血中MDA的含量/% 肝組織中MDA的含量2.604 2 ±0.436 5 2.937 9 ±0.464 6

表2 虎眼萬年青提取物對小鼠血清和肝組織SOD活力的影響(±S，n=10)

表2 虎眼萬年青提取物對小鼠血清和肝組織SOD活力的影響(±S，n=10)

血中SOD的活力/(U·mL－1)肝組織中SOD的活力/(U·mL－1)99.171 ±10.399 4 85.039 8 ±3.989 4 Vc對照組 294.407 ±11.298 0 101.478 6 ±3.431 1高劑量組 314.534 0 ±19.288 3 102.976 0 ±3.336 0中劑量組 190.583 ±15.590 5 87.423 0 ±4.562 7低劑量組空白組113.58 ±16.013 2 85.735 0 ±5.248 6

3 討論

丙二醛(MDA)是動物體內(nèi)多元不飽和脂質(zhì)氧化的終產(chǎn)物之一，其含量的高低可以反映體內(nèi)不飽和脂質(zhì)的過氧化程度，間接地反映出細(xì)胞膜的損傷程度.從表1可以看出，虎眼萬年青乙醇提取物中粗總皂苷可以有效的降低MDA在血液和肝臟中的數(shù)量，降低機(jī)體被脂質(zhì)過氧化，減輕機(jī)體被自由基損壞的程度.超氧化物歧化酶(SOD)是體內(nèi)一種重要的氧自由基清除劑，能夠平衡機(jī)體的氧自由基，從而避免當(dāng)體內(nèi)超氧陰離子自由基濃度過高時引起的不良反應(yīng)，對機(jī)體的氧化與抗氧化平衡有著重要的作用.當(dāng)體內(nèi)自由基水平失衡時會導(dǎo)致各種疾病(腫瘤、衰老、炎癥等)，SOD能清除超氧離子自由基O2

－·，保護(hù)細(xì)胞免受損傷.因此SOD活力的高低與衰老、腫瘤、炎癥等有著密切的關(guān)系.如表2可以看出虎眼萬年青乙醇提取物可以顯著的增加體內(nèi)SOD的數(shù)量，提高體內(nèi)SOD的活力，其高劑量組(30 mg/kg)的抗氧化能力可以與Vc(15 mg/kg)對照組抗氧化的能力相仿，隨著藥物濃度的增高，體內(nèi)的SOD的活力也隨之增大.

虎眼萬年青乙醇提取物中含有皂苷、生物堿、黃酮、香豆素類等多種成分，本實驗采用70%乙醇加熱回流提取虎眼萬年青總皂苷進(jìn)行動物實驗，高劑量組(30 mg/kg)的抗氧化能力可以與Vc(15 mg/kg)對照組抗氧化的能力相近，通過SOD和MDA的結(jié)果分析得知虎眼萬年青總皂苷成分具有一定的抗氧化效果，可以有效的提高體內(nèi)清除超氧陰離子自由基的能力和降低MDA在血液和肝臟中的數(shù)量，有助于增強(qiáng)機(jī)體清除自由基的能力，具有一定的抗氧化作用，這對保護(hù)細(xì)胞，延緩衰老具有重要意義，但其作用機(jī)理和有效活性成分則有待于進(jìn)一步研究.

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