夏三琴 (廣東省高州市第二人民醫(yī)院耳鼻喉科，廣東 茂名 525200)

ERCC1基因蛋白表達(dá)與鼻咽癌順鉑輔助化療耐藥的關(guān)系

夏三琴 (廣東省高州市第二人民醫(yī)院耳鼻喉科，廣東 茂名 525200)

目的：探討ERCC1基因蛋白表達(dá)與鼻咽癌順鉑輔助化療耐藥的關(guān)系。方法：回顧性分析收集的鼻咽癌組織標(biāo)本38例與正常鼻咽組織30例作為對(duì)照來(lái)進(jìn)行了測(cè)定以及分析。結(jié)果：對(duì)收集的38例鼻咽癌組織中放療加化療耐藥者30例，其中ERCCl陽(yáng)性表達(dá)23例(76.67%);放療加化療敏感者26例，ERCCl陽(yáng)性表達(dá)者為8例(30.77%)，放療加化療耐藥組ERCCl陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=56.6/81.2=0.693，P＜0.05)。結(jié)論：揭示ERCCl與鼻咽癌發(fā)病及耐藥性的關(guān)系，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療有明顯意義。值得臨床推廣

ERCC1基因蛋白;輔助化療;鼻咽癌

鼻咽癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，據(jù)筆者近年來(lái)查閱的資料以及統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)鼻咽癌的發(fā)病率明顯增加，況且還有明顯的年輕化趨勢(shì)。故而研究該腫瘤的進(jìn)展也明顯地加快，因此從治療上也發(fā)生了明顯改進(jìn)，從以往的放療、化療演變成當(dāng)今的綜合治療——放療加新輔助化療。進(jìn)而也強(qiáng)調(diào)治療的個(gè)性化。目前的新輔助化療治療方案已被證實(shí)為行之有效的治療手段［4］，該治療手段可以用于縮小腫瘤瘤體體積，減少腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移，并可有效消除其他部位的隱性轉(zhuǎn)移。新輔助化療已成為鼻咽癌患者綜合治療的常規(guī)手段之一。順鉑是目前鼻咽癌放療加化療中使用廣泛的化療藥物。但是目前傳統(tǒng)治療鼻咽癌的方法，療效已經(jīng)到了瓶頸，如何利用腫瘤基因標(biāo)記物預(yù)測(cè)療效，突破療效瓶頸，成為當(dāng)今研究熱門(mén)。本課題用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)ERCCl在正常鼻咽組織以及鼻咽癌患者腫瘤組織表達(dá)，從基因?qū)W方面來(lái)分析鼻咽癌細(xì)胞ERCCl表達(dá)與順鉑化療耐藥的關(guān)系，總結(jié)出ERCCl與鼻咽癌發(fā)病及耐藥性的相關(guān)性，來(lái)給以指導(dǎo)鼻咽癌患者實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療。其意義在于可以明顯減少鼻咽癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移機(jī)會(huì)，從而明顯提高鼻咽癌患者的生存率，減少家庭及社會(huì)的負(fù)擔(dān)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇收集我院耳鼻喉科2006年3月～2012年3月手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的鼻咽癌組織標(biāo)本38例，患者的年齡為21～75歲，平均53歲。按照我國(guó)權(quán)威的病理分期標(biāo)準(zhǔn)：I期11例，Ⅱ期6例，Ⅲ期20例，Ⅳ期1例;組織學(xué)分類(lèi)：鱗狀細(xì)胞癌27例，腺癌6例，未分化癌5例，泡狀核細(xì)胞癌1例;組織學(xué)分級(jí)：高分化11例，中分化8例，低分化13例，未分化6例。所有組織標(biāo)本取得后均用甲醛固定，石蠟包埋保存。由兩位病理科專(zhuān)家重新核對(duì)了組織標(biāo)本和切片，復(fù)核了診斷，并臨床資料保存完好的病例;另取正常卵巢組織30例作為對(duì)照組。

1.2 方法：免疫組化染色。

1.2.1 試劑：采用的試劑有即用型快捷免疫組化MaxvisionTM鼠抗兔，濃縮型鼠抗人ERCCl單克隆抗體(一抗)和HRP(二抗)廣譜的DAB顯色試劑盒以及檢測(cè)試劑盒，均購(gòu)自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 免疫組化染色方法：將采集的組織標(biāo)本通過(guò)專(zhuān)業(yè)切片，常規(guī)脫蠟水化，再置入檸檬酸鹽(一定比例)緩沖液中行抗原修復(fù)(必須是通過(guò)高溫高壓)，等待冷卻后用自來(lái)水沖洗切片，沖洗5 min連續(xù)3次;滴加3%過(guò)氧化氫室溫下孵育10 min，放置在4℃的冰箱24 h，PBS沖洗5 min連續(xù)3次;滴an－抗，室溫下孵育15 min，PBS沖洗5 min連續(xù)3次;DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹(shù)膠封片。

1.2.3 染色結(jié)果：采用雙盲法來(lái)觀察，在切片各個(gè)部位各隨機(jī)選取一個(gè)約400倍視野，來(lái)觀察不同視野中細(xì)胞染色的情況來(lái)計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分比。判定結(jié)果：陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜10%的代表陰性;10%～30%為弱陽(yáng)性;30% ～70%為中度陽(yáng)性;＞70%強(qiáng)陽(yáng)性。

1.2.4 嚴(yán)格、真實(shí)、準(zhǔn)確做好各項(xiàng)數(shù)據(jù)的記錄、整理。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：使用SPSSl6.0進(jìn)行分析;2個(gè)和3個(gè)樣本率的比較用χ2檢驗(yàn)，生存率的計(jì)算用Life Table方法，生存分析用Kaplan－Meier計(jì)算法和 Log－rank test時(shí)序檢驗(yàn);P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 鼻咽癌組織中ERCCl的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系：ERCCl陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀［4］。臨床上采集30例正常鼻咽組織，38例中晚期鼻咽癌組織進(jìn)行比較：對(duì)照組38例，陽(yáng)性表達(dá)31例(占81.2%)，正常鼻咽組織30例，陽(yáng)性表達(dá)17例(占56.6%)，差異性P=56.6/81.2=0.693，P＞0.05。

ERCCl表達(dá)與中晚期鼻咽癌患者的年齡、組織學(xué)類(lèi)型、組織學(xué)分級(jí)以及腫瘤發(fā)生的部位等臨床病理特征及發(fā)病率均無(wú)明顯的相關(guān)性［3］(P＞0.05)。

2.2 鼻咽癌組織ERCCl表達(dá)與順鉑化療耐藥的關(guān)系：38例鼻咽癌組織中放療加化療耐藥者30例，其中ERCCl陽(yáng)性表達(dá)23例(76.67%);放療加化療敏感者26例，ERCCl陽(yáng)性表達(dá)者為8例(30.77%)，放療加化療耐藥組ERCCl陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(72～11.87，P＜0.05)。耐藥組積分值為(5.17±3.38)分，敏感組積分值為(2.38±2.26)分，放療加化療耐藥組積分值明顯高于敏感組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.656，P＜0.05)。

3 討論

目前，醫(yī)學(xué)界已有共識(shí)，對(duì)于鼻咽癌治療的難點(diǎn)為鼻咽癌細(xì)胞對(duì)化療藥物，尤其是對(duì)一線化療藥順鉑產(chǎn)生耐藥性，嚴(yán)重阻斷了化療藥物的抗腫瘤效應(yīng)。順鉑是鼻咽癌新輔助、輔助化療中常用的藥物，進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后與DNA結(jié)合，形成鉑－DNA加合物(Pt－DNA加合物)，導(dǎo)致DNA鏈內(nèi)或鏈間交鏈，干擾DNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制，從而抑制腫瘤細(xì)胞的分裂。核苷酸切除修復(fù)(NER)能力與鉑類(lèi)藥物的耐藥密切相關(guān)。ERCCl基因蛋白在NER通路中對(duì)于識(shí)別和去除Pt－DNA，加合物、修復(fù)DNA鏈間交鏈、參與DNA再合成過(guò)程至關(guān)重要，ERCC1過(guò)表達(dá)可使停滯在G2/M期的損傷DNA迅速修復(fù)，尤其是ERCC1能使順鉑誘導(dǎo)的DNA絡(luò)合物的清除增加，導(dǎo)致其對(duì)順鉑耐藥。鼻咽癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤，中晚期近年來(lái)鼻咽癌發(fā)病增加，且有年輕化趨勢(shì)，腫瘤進(jìn)展也加快。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，中晚期鼻咽癌患者5年生存率約為20%左右。況且鼻咽癌細(xì)胞對(duì)化療藥物在中晚期鼻咽癌患者中敏感性漸差，特別是一線化療藥順鉑的耐藥性尤為明顯，故而嚴(yán)重影響抗腫瘤藥物的療效。多數(shù)患者由于耐藥或抗藥性，因出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致治療失敗。本課題用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)ERCCl在正常鼻咽組織以及鼻咽癌患者的腫瘤細(xì)胞組織中的表達(dá)，從組織基因水平上了解癌變的細(xì)胞ERCCl表達(dá)與臨床一線常用規(guī)藥物－順鉑的化療耐藥的相關(guān)性，從而揭示ERCCl與鼻咽癌發(fā)病及其耐藥性的相關(guān)性，來(lái)指導(dǎo)臨床鼻咽癌病人的個(gè)體化治療。其意義在于可以明顯減少鼻咽癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移機(jī)會(huì)，從而明顯提高鼻咽癌患者生存率，減少家庭及社會(huì)的負(fù)擔(dān)，減少醫(yī)療資源的浪費(fèi).其將產(chǎn)生良好社會(huì)及經(jīng)濟(jì)效益，故而值得臨床推廣。

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［2］王鳳明，孫 健，朱 莉，等.放化療綜合治療局部晚期鼻咽癌113例療效觀察［J］.實(shí)用癌癥雜志，2007，22(1)：77.［3］梁 穎，高劍銘，胡偉漢，等.誘導(dǎo)化療聯(lián)合同期放化療對(duì)局部晚期鼻咽癌的遠(yuǎn)期療效［J］.癌癥，2007，26(8)：885.

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2014－01－10 編校：李曉飛］