汪海寧

近些年來，我國心肌細(xì)胞肥大的人數(shù)正呈現(xiàn)急速上升的趨勢，由于存在諸多未解問題，引來社會(huì)一片熱議。目前，臨床醫(yī)學(xué)中，尚無黃芪多糖在體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞肥大的藥理方面的報(bào)道，王新平、張朝云等人從實(shí)驗(yàn)角度方面探討這方面的問題。對(duì)此，本文借助自己的臨床實(shí)踐，探析黃芪多糖對(duì)脂多糖誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞肥大的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取新生的SD大鼠出生日為1～3 d，雌雄不限，將其作為研究對(duì)象，將其細(xì)胞按照規(guī)定培養(yǎng)2 d之后，同時(shí)設(shè)定對(duì)照組、模型組，按照黃芪多糖的濃度設(shè)定為低、中、高質(zhì)量組。

1.2 方法 藥品與試劑：黃芪多糖（天津賽諾制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z 20040086），質(zhì)量分?jǐn)?shù)為98%。脂多糖（LPS）為Sigm a公司生產(chǎn)；DMEM培養(yǎng)基選用Gibco公司的產(chǎn)品；胎牛血清選取杭州四季青生物工程材料有限公司的產(chǎn)品；Fluo-3/Am選取江蘇碧云天生物工程公司的產(chǎn)品；大鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA檢測試劑盒為研域化學(xué)試劑有限公司的產(chǎn)品；RT-PCR試劑盒，選用的為大連寶生物工程有限公司的產(chǎn)品[1]。對(duì)體外乳鼠心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)，在對(duì)細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)性地培養(yǎng)2 d之后，對(duì)其分為對(duì)照組、黃芪多糖低、中、高質(zhì)量濃度組。選用的對(duì)照組不實(shí)施任何處理措施，

黃芪多糖低、中、高質(zhì)量濃度組則分別選用黃芪多糖1、10、100mg/L的孵育乳鼠心肌細(xì)胞，而后依據(jù)規(guī)定的步驟加進(jìn)LPS 1mg/L。

應(yīng)用計(jì)算機(jī)的圖像分析系統(tǒng)測量這些細(xì)胞的體積，采用RT-PCR法認(rèn)真地檢測大白鼠心房利鈉多肽(ANP)m RNA表達(dá)[2]，應(yīng)用ELISA法檢測這些細(xì)胞中的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量，應(yīng)用Fluo-3/Am熒光染色劑來承載這些細(xì)胞，進(jìn)而在激光共聚焦的顯微鏡下檢測細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度([Ca2+]i)的短時(shí)間的變化[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本文采用的數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS 17.0軟件來詳細(xì)分析統(tǒng)計(jì)的，同時(shí)為加強(qiáng)可信度，本文的計(jì)量的資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)來表示，文中的實(shí)驗(yàn)中數(shù)據(jù)均為使用的平均值。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)過以上實(shí)驗(yàn)檢測，與對(duì)照組相比，LPS 1mg/L能夠讓機(jī)體的心肌細(xì)胞的體積明顯地變大，心房利鈉多肽(ANP)mRNA的表達(dá)能力明顯地提高，細(xì)胞分泌的TNF-α蛋白的含量也呈現(xiàn)一個(gè)直線上升的趨勢，并且機(jī)體的心肌細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i的短時(shí)間的峰值有顯著地增大(P<0.05)。在與模型組的比較中，黃芪多糖的低、中、高質(zhì)量組在預(yù)先服藥之后，能夠有效地抑制機(jī)體心肌細(xì)胞體積得增大，讓機(jī)體細(xì)胞所產(chǎn)生的TNF-α得到明顯地降低，心房利鈉多肽(ANP)mRNA的表達(dá)能力明顯地下降(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)中還可以發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖的中、高質(zhì)量組的以上兩個(gè)指標(biāo)都能夠達(dá)到對(duì)照組所要求的水平(P>0.05)。黃芪多糖的高質(zhì)量組能夠有效地拮抗LPS，將對(duì)這一正常的心肌細(xì)胞內(nèi)的[Ca2+]i在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生巨大地增幅作用(P<0.05)。

3 討論

黃芪多糖中的黃芪為最主要的活性成分，可以起到調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫力、抵抗腫瘤、抗菌、修復(fù)受損的神經(jīng)、延遲細(xì)胞衰老等功效。脂多糖（LPS）為誘導(dǎo)機(jī)體的心肌細(xì)胞釋放相應(yīng)的炎癥細(xì)胞因子的非常有作用的刺激性的因素，一般LPS結(jié)合蛋白（LBP）連接在一起，再傳遞到單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的表面，與他們的特異性受體的CD 14發(fā)展成LPS/LBP/CD 14的復(fù)合物，這一復(fù)合物就能夠與Toll樣的受體4（TLR 4）產(chǎn)生相互協(xié)作的功效，開啟機(jī)體細(xì)胞內(nèi)的多種的信號(hào)通路，讓他們發(fā)生多種的炎癥因子表達(dá)，這樣就能夠增加心肌細(xì)胞的肥厚，降低心肌的收縮功能，以及讓心肌細(xì)胞大量的死亡[4]。臨床多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖對(duì)脂多糖誘導(dǎo)大白鼠的腹腔巨噬細(xì)胞中所發(fā)出的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等有著不一樣的抑制功效，這就說明能夠透過抑制機(jī)體的炎癥因子的分泌，就可以減輕對(duì)組織細(xì)胞的傷害，起到較好的保護(hù)功效[5]。黃芪多糖還可以極大地改善糖尿病模型的大白鼠機(jī)體內(nèi)的物質(zhì)代謝的功能，進(jìn)一步降低心肌鈣的含量，這就將對(duì)心肌超微結(jié)構(gòu)起到非常好的保護(hù)功效。

綜上所述，黃芪多糖對(duì)脂多糖誘導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞肥大可以起到非常好的保護(hù)效果，改善機(jī)體的生活質(zhì)量，其機(jī)理與降低[Ca2+]i、抑制TNF-α的產(chǎn)生等有著密切地聯(lián)系，對(duì)于一些機(jī)理仍需進(jìn)一步探索。

[1] Liu CJ,Cheng YC,Lee KW,et al.Lipopolysaccharide induces cellular hypertrophy through calcineurin/NFAT-3 signaling pathway in H9 c 2 myocardiac cells[J].Molecular and Cellular Biochemistry,2008,12(4):113-114.

[2] 李曉冬,王寶,王建芳,等.銀杏葉提取物對(duì)U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞的促凋亡作用[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2013,19(14):183-184.

[3] 張桂菊,陳海霞.康艾扶正片對(duì)惡性腫瘤治療作用的療效觀察[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2011,17(15):193-194.

[4] 蘇旭春,梁傍順,鄔曉東,等.黃芪多糖對(duì)化療后氣虛證患者青紫舌的改善作用[J].中草藥,2010,12(1):213-214.

[5] 王秋寧,王洪新,楊育紅,等.黃芪甲苷對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)的乳大鼠心肌細(xì)胞肥大的保護(hù)作用[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2011,13(1):263-264.