楊曉娜

（保山學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院，云南 保山 678000）

1 生姜離體快繁的意義

生姜(Zingiber offwinale Rose)為姜科屬的多年生宿根植物，是一年生蔬菜作物，生姜營養(yǎng)豐富，且具有藥用價(jià)值[1-2]，需求量很大,是人民生活中不可缺少的藥食兼用型植物，原產(chǎn)我國及東南亞地區(qū)。由于生姜不開花結(jié)實(shí)，不能利用有性繁殖進(jìn)行育種，生產(chǎn)上長期以成熟根狀莖為種源進(jìn)行無性繁殖，不僅繁殖系數(shù)低，容易造成姜體內(nèi)多種病毒及青枯假單孢桿菌（Ralstonia solanacearum）積累，而且易通過帶病的種姜傳播病害，例如姜青枯腐爛病(姜瘟)、猝倒病(根腐病)[3]。目前國內(nèi)外對生姜病毒的防治仍沒有特效藥和抗病品種，因此造成了生姜優(yōu)良種性退化，品質(zhì)變劣，藥用成分含量不穩(wěn)定，產(chǎn)量降低，嚴(yán)重的可造成30%～50%的減產(chǎn)[4]。通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可以解決上述問題，但成本較高，限制了該項(xiàng)技術(shù)的發(fā)展。所以開展生姜及種苗快速繁殖技術(shù)研究，可以為生姜種苗產(chǎn)業(yè)化奠定技術(shù)基礎(chǔ)。

2 生姜離體快繁的研究進(jìn)展

隨著植物組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)的不斷成熟，對生姜的不同外植體進(jìn)行組培的研究已有一些報(bào)道，如：1995年張秀清等以生姜生長點(diǎn)為外植體，研究得出在含KT或BAA的培養(yǎng)基都能生根[5]。同年黃菊輝等以生姜莖尖和葉鞘切段為外植體，研究提出NAA對生根是絕對且必要的，6-BA和NAA可促進(jìn)生姜幼芽發(fā)生，且具有相互增益效應(yīng)[6]。1999年潘學(xué)峰等用生姜莖尖為外植體[7]。2002年李承永等用生姜根狀莖為外植體,進(jìn)行了離體培養(yǎng)研究[8]。2002年徐燕等以生姜芽尖為外植體，MS為基本培養(yǎng)基，添加不同的激素配比，在MS+BA1.0 mg／L上誘導(dǎo)分化形成苗，在1.5MS+BA2.0 mg／L+IBAO.5 mg／L上繼代培養(yǎng)可達(dá)到快繁的目的，生根適宜的培養(yǎng)基為MS+NAAO.1 mg／L，通過該生產(chǎn)體系，可在短期內(nèi)生產(chǎn)出大量的健壯合格苗，達(dá)到快繁目的[9]。2002年唐玉明等研究用不同的處理方法對生姜組織培養(yǎng)的影響，認(rèn)為加入BA的培養(yǎng)基，愈傷組織誘導(dǎo)率明顯高于加入KT的培養(yǎng)基，BA更有利于生姜愈傷組織的分化[10]。2003年張玲等用生姜的成熟根狀莖、幼芽肉質(zhì)基部和假莖作外植體進(jìn)行快繁的技術(shù)，結(jié)果表明愈傷組織的誘導(dǎo)僅出現(xiàn)在添加了2,4-D的培養(yǎng)基中，NAA對誘導(dǎo)愈傷組織沒有效果[11-12]。2006年雷開榮對生姜組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)進(jìn)行了研究，建立了生姜試管苗增殖與生根同步培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程[13]。這些研究結(jié)果為生姜的快繁提供了技術(shù)基礎(chǔ)。

3 生姜離體快繁的技術(shù)路線

姜塊→培養(yǎng)催芽→姜芽 （外植體）→消毒→解剖鏡下剝?nèi)?.2～0.3mm的莖尖→接種（脫分化培養(yǎng)基）→誘導(dǎo)愈傷組織→接種（再分化培養(yǎng)基）→誘導(dǎo)芽分化→繼代培養(yǎng)→叢芽→接種（生根培養(yǎng)基）→生根培養(yǎng)→煉苗移栽→大田準(zhǔn)備和移栽→田間管理→上市銷售

4 材料與方法

4.1 材料

外植體的選擇：

選用四川樂山五指黃姜。將姜塊在流水下反復(fù)沖洗干凈，涼干水分后放置在消過毒的砂盤中，用細(xì)砂覆蓋，澆上少量的水分，將砂盤放至35～37℃的高溫下培養(yǎng)催芽。當(dāng)姜芽萌發(fā)至2～3cm時(shí)，及時(shí)切下作為接種材料外植體[14]。

4.2 外植體的消毒

將切取下來的幼芽在流水下沖洗2～3h，在50℃度高溫下，快速處理5min；此后，用0.1%HgCl2消毒10min，沖洗6～7次，再用5%的次氯酸鈉液消毒5min，無菌水反復(fù)沖洗4～5次。在解剖鏡下剝?nèi)〈笮?.2～0.3mm 的莖尖，待接種[14]。

4.3 培養(yǎng)基

初代培養(yǎng)：脫分化培養(yǎng)基MS+KT 2mg／L+NAA 0.5mg／L;繼代培養(yǎng)：再分化培養(yǎng)基 MS+KT 2mg／L+NAA 0.5mg／L;生根培養(yǎng)基：MS+NAA 1.5mg／L+KT1mg／L

4.4 初代培養(yǎng)物的建立

在25～26℃溫度下，將剝?nèi)〈笮?.2～0.3mm的莖尖接種在MS+KT 2mg／L+NAA 0.5mg／L（脫分化培養(yǎng)基）上的莖尖，經(jīng)過 4～6 周的暗培養(yǎng)，誘導(dǎo)出愈傷組織[13]。

4.5 芽分化和幼芽繼代

將分化出的愈傷組織，接種于MS+KT 2mg／L+NAA 0.5mg／L（再分化培養(yǎng)基），在室溫25～26℃度下，經(jīng)過4～5周的光培養(yǎng)后，培養(yǎng)基上的愈傷組織分化出叢生芽，經(jīng)過第二代繼代培養(yǎng)，叢生芽的分化數(shù)量不斷增加[13]。

4.6 生根培養(yǎng)

當(dāng)試管苗長至2～5cm時(shí)，及時(shí)地將叢芽切割成單株接種在MS+NAA 1.5mg／L+KT1mg／L（生根培養(yǎng)基）上，經(jīng)過 30～40d 的壯苗生根培養(yǎng)后，根長達(dá)到2～3cm時(shí)，準(zhǔn)備煉苗移栽[13]。

4.7 煉苗移栽

把長達(dá)2～3cm的根在自然光照和28～30℃的溫度條件下煉苗25d左右，當(dāng)苗高7～10cm有4～5條白色長根時(shí)，從瓶內(nèi)取出洗凈培養(yǎng)基，然后移栽至大棚盛有熟土+腐熟有機(jī)肥(2：1)的營養(yǎng)杯種植。此時(shí)棚內(nèi)溫度保持在25～30℃，相對濕度80%，棚頂覆蓋遮陽網(wǎng)。1個(gè)月后，植株高達(dá)10～15cm時(shí)，揭開棚頂遮陽網(wǎng)煉苗1周，然后直接進(jìn)行大田種植[14]。

4.8 大田準(zhǔn)備和移栽

選擇平坦、肥沃的土地，要求土壤濕潤，不積水，開好排水溝。田塊經(jīng)兩犁兩耙后平整土地，然后按東西向挖深溝，溝深30cm，溝底寬30cm，畦高60cm，溝與溝之間約30cm。挖好溝后先在溝內(nèi)覆一層熟土約10cm，將農(nóng)家肥與復(fù)合肥混合放在熟土上面，再覆上一層熟土，然后把生姜組培苗去掉營養(yǎng)袋種入溝內(nèi)。株距20-25cm，密度6000～7000／667m2。種好后澆定根水?；适┺r(nóng)家肥2500kg／667m2，復(fù)合肥50kg／667m2、兩者混合施人溝底[15]。

4.9 田間管理

組培苗種植后1周開始長出新根，視墑情適當(dāng)澆水。第一次追腐熟糞水 500-750kg／667m2，或尿素 4-5kg／667m2、對水 250kg／667m2。6～7月份生姜組培苗苗高30cm、有1～2個(gè)分枝時(shí)施第一次壯苗肥(復(fù)合肥75kg／667m2)。8月份植株進(jìn)入生長旺盛期，植株生長速度加快，生長量大，追施長效完全肥，混適量速效肥(花生麩肥75kg／667m2，復(fù)合肥10kg／667m2)，偏重施磷、鉀肥，可以促進(jìn)根莖肥大，減少病害。生姜喜濕潤，忌水。在生姜組培苗定植約20d后結(jié)合松土除草培土。生姜苗封行后不宜中耕。11～12月份為生姜的收獲期，選擇晴天收獲生姜，收獲后的生姜放在屋內(nèi)陰涼處晾干，然后貯藏，作為第二原種備用，或上市銷售[15]。

5 生姜組培苗的市場前景

利用組織培養(yǎng)技術(shù)，限制病毒在植物分生組織的擴(kuò)散速度，快速繁殖脫毒脫菌種苗，能克服種性退化，提高抗逆生疏，有效防治植物病毒病。目前經(jīng)實(shí)踐統(tǒng)計(jì)證明，生姜的組培苗當(dāng)年種植當(dāng)年收獲，平均產(chǎn)量約2900kg／667m2，比普通姜增產(chǎn)10%。第二年用組培生姜原種種植，平均產(chǎn)量可達(dá)4200kg／667m2，比普通姜增產(chǎn)約30%。組培姜單重增大，均勻整齊，皮色光亮，色澤鮮黃，質(zhì)量好，辣味濃，商品性好，市場銷路好[15]。

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