李比海，羅麗娟，梁興林，金石軍，饒軍華

(廣東藍(lán)島生物技術(shù)有限公司，廣州 510555)

早孕期的陰道出血，在人類妊娠早期的發(fā)生率較高，有研究表明早孕期的陰道出血，導(dǎo)致的早產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)達(dá)到了20%，而有關(guān)的機(jī)制并不明確[1-3]。食蟹猴在生理上與人類比較相近，遺傳物質(zhì)同源性、中樞系統(tǒng)、呼吸及消化循環(huán)系統(tǒng)，與人類都有高度的相似性，是醫(yī)學(xué)研究中理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物[4]。早孕出血癥狀在食蟹猴的妊娠期也常有發(fā)生，但對(duì)其研究卻很少。這種現(xiàn)象，不能判斷是否是食蟹猴的正常生理現(xiàn)象，在B超確認(rèn)已經(jīng)懷孕的情況下會(huì)不斷地進(jìn)行給藥保胎；而在沒(méi)有B超等輔助檢查手段時(shí)，只通過(guò)一般的外觀狀態(tài)觀察，認(rèn)為陰道有血就是月經(jīng)血，錯(cuò)誤地判定為猴子正常的月經(jīng)。本文通過(guò)研究食蟹猴的早孕期出血現(xiàn)象及與流產(chǎn)之間的相關(guān)性，從而為食蟹猴的相關(guān)生殖研究提供一些參考數(shù)據(jù)，為進(jìn)一步了解人類的相關(guān)機(jī)制做基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

由廣東藍(lán)島生物技術(shù)有限公司提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(粵)2009-0010)。健康SPF級(jí)雌性食蟹猴78頭：年齡3～8歲，體重3.2 ～ 5.0 kg，其中初產(chǎn)雌性食蟹猴45頭，經(jīng)產(chǎn)33頭只；配種用健康SPF級(jí)雄性食蟹猴12頭只：年齡8 ～ 13歲。試驗(yàn)期間每頭猴除交配期公母配對(duì)合籠外，均單籠飼養(yǎng)(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(粵)2008-0088)，溫度(18～26)℃，光照12 h明暗交替，自動(dòng)控制系統(tǒng)進(jìn)行定時(shí)排風(fēng)。

1.2 儀器設(shè)備：

B超：意大利百勝(esaote)生產(chǎn)，型號(hào)：MyLabTM30CV。

1.3 試劑：

黃體酮注射液(浙江仙琚制藥生產(chǎn)，批號(hào)110417)；維生素E(南寧富萊欣生物科技有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20110206)

1.4 月經(jīng)觀察

每天上午和下午各1次觀察月經(jīng)狀況，一般上午觀察時(shí)間是在沖洗猴房和單籠之前進(jìn)行，首先觀察猴籠下糞盤(pán)有無(wú)血跡，再看會(huì)陰外部有無(wú)血跡，并使用生理鹽水沖洗食蟹猴會(huì)陰口后，使用無(wú)菌棉簽擦拭陰道，觀察陰道內(nèi)有無(wú)月經(jīng)血，有血跡則視為有月經(jīng)，每次觀察到的出血第1天為此猴本次月經(jīng)周期第1天(D1)。

1.5 合籠交配

通過(guò)雌性食蟹猴的月經(jīng)期確定交配日，在月經(jīng)首日后的第12 ～ 14天將雌猴和雄猴按1∶1比例同籠交配3 d，同籠的第二天記為懷孕第0天(GD0)。交配結(jié)束后，雌雄分籠。未懷孕雌猴繼續(xù)觀察月經(jīng)周期，并進(jìn)行下一次交配。

1.6 B超檢查

在雌猴懷孕的第22天觀察到孕囊，即宮內(nèi)出現(xiàn)圓形的光環(huán)和無(wú)回聲暗區(qū)時(shí)判定為懷孕(圖1)。未觀察到孕囊判定為未孕(圖2)。所有雌猴懷孕的第30天，再次進(jìn)行B超檢查，觀察到胚芽和胎心閃動(dòng)時(shí)可進(jìn)一步確定該猴懷孕[5]。

1.7 食蟹猴早孕期出血癥狀界定

“1.6”小節(jié)中B超檢查已確定的懷孕猴，在這30 d的早孕期間有血樣液體從其陰道流出，則定義該猴有早孕出血癥狀。

1.8 保胎

在有早孕期出血食蟹猴中隨機(jī)選擇了10頭進(jìn)行藥物保胎對(duì)照，方法是：黃體酮注射液臀部肌肉注射，10 mg/次，1次/d；其次輔以維生素E拌料(米糊)飼喂，20 mg/次，1次/d；保胎1周。

2 結(jié)果

共78頭雌性食蟹猴用于交配。33頭經(jīng)產(chǎn)雌性食蟹猴懷孕20頭，早孕期出血的有18頭只，早孕期出血率為90%，早孕期出血后3個(gè)月內(nèi)流產(chǎn)的為0頭，早孕期出血引起的流產(chǎn)率為0%；45頭初產(chǎn)雌性食蟹猴懷孕的有20頭，早孕期有出血的有14頭，早孕期出血率為70%，早孕期出血后3個(gè)月內(nèi)流產(chǎn)的為0頭，早孕期出血引起的流產(chǎn)率為0%。綜合初產(chǎn)經(jīng)產(chǎn)雌性食蟹猴早孕期出血的比例達(dá)到了80%；雌性食蟹猴早孕期出血引起的平均流產(chǎn)率是0%。平均月經(jīng)周期為30.79 d，平均月經(jīng)天數(shù)為2.37 d，早孕期平均出血天數(shù)為5.36 d(最長(zhǎng)持續(xù)13 d，最短為1 d)。

選擇的5頭初產(chǎn)，5頭經(jīng)產(chǎn)有早孕出血食蟹猴進(jìn)行保胎(藥物)為對(duì)照，10頭猴均沒(méi)有流產(chǎn)；而其余22頭有早孕期出血但沒(méi)有進(jìn)行保胎的猴也沒(méi)有流產(chǎn)。結(jié)果顯示，保胎與不保胎沒(méi)有差異性，流產(chǎn)率均為0%。

B超結(jié)果，懷孕和未孕食蟹猴子宮B超圖像見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 懷孕猴子宮B超圖像

圖2 未孕猴子宮B超圖像

3 討論

食蟹猴早孕出血率達(dá)到了80%，與流產(chǎn)率的0%沒(méi)有相關(guān)性，早孕期陰道出血是食蟹猴的一個(gè)正常的生理現(xiàn)象。而藥物保胎的對(duì)照結(jié)果表明，對(duì)早孕期出血的食蟹猴進(jìn)行藥物保胎是非必要的。

分析食蟹猴早孕期陰道出血這一現(xiàn)象的機(jī)制。食蟹猴于懷孕后的第一個(gè)月出現(xiàn)陰道出血，而出血的時(shí)間剛好是在理論月經(jīng)期內(nèi)，從而推測(cè)可能是因?yàn)榕咛ブ埠?，子宮還有大面積空腔，空腔在激素低的情況下，月經(jīng)周期正常到來(lái)，內(nèi)膜脫落和更新而出血。早孕期陰道出血時(shí)間平均達(dá)到了5～6 d，相較于正常的月經(jīng)時(shí)間2～3 d，明顯延長(zhǎng)。這一現(xiàn)象，也可能正是因?yàn)榈图に厮较聦?duì)子宮內(nèi)膜的控制失調(diào)。而研究過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)早孕期經(jīng)產(chǎn)猴的出血率高于初產(chǎn)猴，這可能的原因是初產(chǎn)猴身體還處于發(fā)育期[6]，孕期激素水平調(diào)控能力強(qiáng)于經(jīng)產(chǎn)猴。

由于食蟹猴與人有高度的相似性，對(duì)比將人在早孕期的陰道出血現(xiàn)象視為一類病癥，是導(dǎo)致流產(chǎn)的重要因素[7]提出了質(zhì)疑。相應(yīng)的人在早孕月經(jīng)期內(nèi)的陰道出血，也可能是在低激素情況下的一個(gè)正常現(xiàn)象。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李文英，李丹，王強(qiáng)，等. 早孕期出血249例分析[J]. 河北醫(yī)藥, 2003, 4(25): 260.

[2] Louis R. Sibal, Kurt J. Samson. Nonhuman Primates: A Critical Role in Current Disease Research [J]. Institute for Laboratory Animal Research Journal, 2001, 2(42): 74-84.

[3] 周美茜，蔡暢，黃引平. 早孕期陰道出血與早產(chǎn)關(guān)系的臨床研究[J]. 臨床研究, 2011,49: 40-42.

[4] Gomez R, Romero R, Nien J K, et al. Idiopathic vaginal bleeding during pregnancy as the only clinical manifestation of intrauterine infection[J]. J Matern Fetal Neonatal Med, 2005, 18(1)：31-37.

[5] 李志雄，高玲霞，范春梅, 等. B-型超聲波診斷獼猴早期妊娠[J]. 上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué), 1998, 18(1): 26-28.

[6] 陳翠蓮. 初產(chǎn)母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬營(yíng)養(yǎng)需要[J]. 廣東飼料, 2013, 6(22): 33-35.

[7] 盧翠云，莫志衛(wèi). 妊娠早期陰道出血的相關(guān)因素及治療[J]. 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2013, 10(34): 1437-1438.