于 飛，張 浪，梁 青，傅 晟，張 駿，呂昕澤，方珍文

(1. 天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點實驗室，天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津 300070；2. 天津國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院，天津 300457；3. 南開大學(xué)藥學(xué)院，天津 300071；4. 廣西食品藥品檢驗所，廣西 530021)

大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant-induced arthritis，AIA)模型是研究類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)及抗RA藥效評價常用的一種動物模型[1]。目前，關(guān)于AIA模型的研究主要集中于探討關(guān)節(jié)病理過程與疾病機制，對于關(guān)節(jié)外的血常規(guī)等生理指標(biāo)的研究較少。本文對AIA大鼠的血常規(guī)指標(biāo)進行分析探討，旨在為RA的研究提供參考?，F(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 實驗材料

完全弗氏佐劑(complete freund’s adjuvant, CFA)，購于sigma公司。SPF級Wistar大鼠，雄性40只，體重200±20 g，購于軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，SCXK(軍)2007-004。

1.2 佐劑性關(guān)節(jié)炎模型建立

Wistar大鼠隨機分成對照組和模型組，各20只。模型組大鼠右后足趾皮內(nèi)注射0.1 mL CFA，對照組大鼠同部位注射等量生理鹽水。注射后每隔4 d評價關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重程度，評分標(biāo)準(zhǔn)[2]如下：0分，正常；1分，踝關(guān)節(jié)有紅斑及輕微腫脹；2分，踝關(guān)節(jié)至跖關(guān)節(jié)或掌關(guān)節(jié)有紅斑及輕微腫脹；3分，踝關(guān)節(jié)至掌關(guān)節(jié)或跖趾關(guān)節(jié)有紅斑及中度腫脹；4分，踝關(guān)節(jié)至趾關(guān)節(jié)有紅斑及重度腫脹。每只足趾單獨評分，將四肢評分相加作為關(guān)節(jié)炎評分。建模后第28天處死大鼠，取趾關(guān)節(jié)行病理切片觀察。

1.3 血常規(guī)分析

注射CFA 28 d后，眼靜脈取血，EDTA-K2抗凝用于血常規(guī)分析。血常規(guī)分析采用全自動血球分析儀(sysmex XT2000i，Japan)。

1.4 統(tǒng)計方法

±SD表示，組間比較采用t檢驗，P < 0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 佐劑性關(guān)節(jié)炎模型

模型組Wistar大鼠注射CFA后足爪明顯腫脹，出現(xiàn)體重下降、關(guān)節(jié)變形、皮膚紅腫甚至潰爛等癥狀(彩插6圖1A、B)。AIA大鼠關(guān)節(jié)炎評分明顯高于正常組的評分，差異極顯著(P< 0.01)(表1)。病理切片觀察發(fā)現(xiàn)，與正常鼠相比，AIA大鼠關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損，軟骨面破壞、局部纖維化，滑膜組織增生，關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量炎性細胞浸潤(彩插6圖1C、1D)。

2.2 血常規(guī)分析

AIA大鼠和正常大鼠的血常規(guī)測量結(jié)果見表1。27個檢測指標(biāo)中，與正常大鼠相比，AIA大鼠有14個指標(biāo)有顯著性差異(P< 0.01)，分別為白細胞分類計數(shù)的WBC、NEUT(%)、LYMPH%、MONO和網(wǎng)織紅細胞的RET、HFP、MFP、LFP、IFP以及紅細胞的MCV、MCH、RDW-SD、RDW-CV。

表1 AIA大鼠與正常大鼠血常規(guī)指標(biāo)測定結(jié)果(n=10)

3 討論

AIA大鼠模型廣泛應(yīng)用于RA研究，對于抗RA藥物的發(fā)現(xiàn)有重要的作用。然而，對于該模型的血常規(guī)研究較少，缺乏相關(guān)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

本研究成功建立了AIA大鼠模型，外觀可見關(guān)節(jié)變形、皮膚紅腫甚至潰爛等癥狀，并通過病理切片觀察到AIA大鼠關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損。血常規(guī)分析發(fā)現(xiàn)，AIA大鼠的白細胞出現(xiàn)明顯變化。與正常大鼠比較，AIA大鼠WBC、NEUT、LYMPH和MONO均明顯上升，差異極其顯著性(P< 0.01)，此結(jié)果與史智勇等[3]研究結(jié)果相似。血液中的單核細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞等白細胞在趨化因子的作用下游出血管，不斷向炎癥部位聚集，釋放氧自由基、細胞因子等物質(zhì)，參與RA的發(fā)展[4]。本研究結(jié)果進一步說明，與人類相似，白細胞參與并介導(dǎo)AIA大鼠關(guān)節(jié)炎的形成與發(fā)展。在疾病活動期，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血小板計數(shù)會明顯升高，甚至達到正常值的1～2倍[5]。與人的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎不同，本組AIA大鼠血小板無明顯變化，這可能與AIA模型的發(fā)病機制和進程不同有關(guān)。

MCV、MCH的顯著降低，提示AIA大鼠出現(xiàn)慢性病性貧血(anemia of chronic disease, ACD)，這與人的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相似。貧血是RA常見的一種關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，30%左右的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者會出現(xiàn)ACD[6]，其病理機制較為復(fù)雜，主要與細胞因子有關(guān)。腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor α, TNF-α)，白介素-1(interleukin-1, IL-1)，白介素-6 (IL-6)，干擾素-γ(interferon-γ, INF-γ)等細胞因子和NO等炎癥介質(zhì)可以抑制骨髓紅系造血，促進骨髓紅系前體細胞凋亡，減少促紅細胞生成素的分泌，促使鐵代謝異常[7]。研究表明，AIA大鼠血清及炎癥部位的TNF-α、IL-1、IL-6、INF-γ和NO等與RA相關(guān)的細胞因子及炎癥介質(zhì)均有不同程度的升高[8]，提示AIA大鼠貧血機制可能與人類相同。網(wǎng)織紅細胞出現(xiàn)明顯升高，說明AIA大鼠的骨髓造血功能增強，進一步提示AIA大鼠有類似人類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的ACD癥狀。

綜上所述，AIA大鼠白細胞明顯上升，會出現(xiàn)類似于人類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的慢性病性貧血。AIA大鼠可以用于模擬人的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎伴貧血病。

參考文獻：

[1] 劉元剛，劉樹滔，饒平凡. 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎嚙齒動物模型的研究進展[J]. 中國實驗動物學(xué)報，2007,15(6)：470-473.

[2] 魏偉，吳希美，李元建. 藥理實驗方法學(xué)[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：749-757.

[3] 史智勇，朱發(fā)仁，王風(fēng)琴，等. 實驗性關(guān)節(jié)炎大鼠的血液常規(guī)測定值[J]. 上海實驗動物科學(xué)，1999，19(3)：169-171.

[4] Szekanecz Z, Koch AE, Kunkel SL,etal. Cytokines in rheumatoid arthritis: potential targets for pharmacological intervention[J]. Drugs Aging, 1998,12:377-390.

[5] 白洲霞. 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎實驗室檢測指標(biāo)的分析探討[J]. 甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2006，23(3)：50-52.

[6] 李振玲. 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎貧血機制研究進展[J]. 中日友好醫(yī)院學(xué)報，2005，19(3)：175-178.

[7] 王亮，卓光生. 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎血液學(xué)改變機制的研究進展[J]. 醫(yī)學(xué)綜述，2006，12(4)：205-206.

[8] 田俊閣，盧偉偉，平立峰. 中藥對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠細胞因子影響的研究進展[J]. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18(30)：3774-3776.