周利娟

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)反映了子宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的連續(xù)過程, 通過篩查發(fā)現(xiàn)CIN, 及時(shí)治療高級(jí)別病變, 是預(yù)防子宮頸癌行之有效的措施［1］。研究已表明, 生殖道感染人乳頭瘤病毒(HPV)是婦女宮頸癌和癌前病變的主要危險(xiǎn)因素,HPV L1殼蛋白是HPV 感染復(fù)制早期所必須的結(jié)構(gòu)蛋白, 故可通過檢測(cè)HPV L1殼蛋白來(lái)研究HPV感染狀態(tài)。細(xì)胞外基質(zhì)( extracellular matrix, ECM) 降解對(duì)于腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移和血管生成至關(guān)重要。基質(zhì)金屬蛋白酶( MMPs) 是降解ECM 的重要酶類, MMP-2可能在宮頸癌細(xì)胞增殖、血管生成、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等過程中發(fā)揮重要作用。本研究通過免疫組化檢測(cè)HPV L1蛋白及MMP-2在不同宮頸病變過程的表達(dá)情況, 探討其在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌發(fā)展中的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選2010年9月～2013年9月許昌市中心醫(yī)院手術(shù)治療的宮頸疾病患者121例, 術(shù)前HPV-DNA均為陽(yáng)性, 其中宮頸鱗狀細(xì)胞癌(SCC)30例、CIN 58例(其中CIN I、CINⅠ、CINⅢ分別為18例、19例、21例), 正常宮頸33例(因子宮良性病變而行子宮全切除標(biāo)本, 術(shù)前宮頸外觀正常, 術(shù)后病理診斷為宮頸炎標(biāo)本)。所有患者均無(wú)宮頸錐切、子宮切除、放化療史。

1.2 方法 MMP-2及HPV L1檢測(cè)法應(yīng)用鏈霉素親生物素-過氧化物酶法(SP法)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 試劑 HPV L1鼠抗人單克隆抗體購(gòu)自賽泰公司, SP試劑盒及DAB酶底物顯色劑等均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。兔抗人MMP-2抗體購(gòu)自北京博奧森科技實(shí)業(yè)有限公司。

1.4 判斷和評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) MMP-2結(jié)果按照以下評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)［2］進(jìn)行半定量判斷：兩位病理醫(yī)師專家各自獨(dú)立觀察隨機(jī)每例切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野進(jìn)行結(jié)果判定。按染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占百分比綜合計(jì)分。即：0分為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%, 1分為5%～25%, 2分為 26%～50%, 3分為51%～75%, 4分為>75% 。按著色強(qiáng)度記分：1分為染色呈淡黃色, 2分為染色呈黃色, 3分為染色呈棕黃色。兩種記分的乘積即為陽(yáng)性強(qiáng)度：0分為陰性(-), 1～4分為弱陽(yáng)性(+), 5～8分為中度陽(yáng)性(++), 9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。有一個(gè)被染色的細(xì)胞核呈紅色即認(rèn)為HPV L1 殼蛋白表達(dá)呈陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)和Fishers 確切概率法, 相關(guān)分析使用單因素直線相關(guān)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV L1殼蛋白和MMP-2在不同宮頸病變組織中的表達(dá) HPV L1殼蛋白在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組陽(yáng)性表達(dá)分別為69.69%(23/33)、83.33% (15/18)、36.84%(7/19)、4.70%(1/21)、0(0/30)。CIN 中 為 37.93%(23/58)。除了CINⅢ與SCC比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)外, 其他不同宮頸病變間比較, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；MMP-2在正常宮頸組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組的陽(yáng)性表達(dá)分別為 6.06%(2/33)、33.33%(6/18)、57.89%(11/19)、66.66%(14/21)、76.66%(23/30), CIN 中 53.44%(31/58)。正常組織中MMP-2 的陽(yáng)性率明顯低于CIN組及SCC組。MMP-2 在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較, 三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表 1。

2.2 HPV L1 殼蛋白和MMP-2的相關(guān)性 CIN I組中HPV L1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率最高, 隨著病變程度的增加, 其陽(yáng)性表達(dá)率明顯下降。SCC組中MMP-2陽(yáng)性表達(dá)率最高, 隨著病變程度的增加, 其陽(yáng)性表達(dá)率明顯增加經(jīng)相關(guān)性結(jié)果分析顯示宮頸病變中HPV L1殼蛋白與MMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),見表2。

表1 HPV L1 殼蛋白和MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC 組的表達(dá)情況(n, %)

表2 HPV L1殼蛋白和MMP-2的相關(guān)性

3 討論

宮頸癌是婦科常見腫瘤之一, 有年輕化的趨勢(shì), 主要源于對(duì)婦女進(jìn)行有效的宮頸篩查和癌前病變的早期診斷, 宮頸癌的5 年生存率在90%以上, 因此有效地預(yù)測(cè)宮頸癌的早期病變即可通過早期干預(yù)降低宮頸癌的死亡率［3］。

目前已證實(shí)高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要原因。近年感染HPV的有效評(píng)估指標(biāo)為L(zhǎng)1蛋白, 宮頸惡變程度的增高, HPV L1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率降低。Lee H等［4］則提出宿主病毒相互干擾學(xué)說(shuō), 即隨著CIN分度的升高甚則惡變, 可缺失L1殼蛋白。HPV L1殼蛋白陰性提示感染HPV具有進(jìn)展性, 出現(xiàn)宮頸癌或CIN的高發(fā)病率。作者的研究表明隨著宮頸病變級(jí)別的增高, HPV L1殼蛋白在慢性宮頸炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宮頸鱗癌陽(yáng)性表達(dá)逐漸減少, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 同相關(guān)研究一致。

基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是降解ECM 的重要酶類。MMP-2為MMPs家族成員, 推測(cè) MMP-2的陽(yáng)性表達(dá)提示, 腫瘤細(xì)胞擁有侵襲、轉(zhuǎn)移的能力, 細(xì)胞就具有惡性侵略的特性［5］。滕燕伊等［6］采用免疫組化研究顯示：MMP-2在宮頸癌中的表達(dá)高于CIN及正常宮頸組織, 并認(rèn)為 MMP-2是早期腫瘤的標(biāo)志。作者的研究表明MMP-2 在正常宮頸組、CIN組、SCC組的陽(yáng)性表達(dá)分別為6.06%(2/33)、53.44%(31/58)、76.66%(23/30), 正常組織中MMP-2的陽(yáng)性率明顯低于CIN 組及SCC組。MMP-2在正常宮頸組、CIN組、SCC組比較, 三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 同相關(guān)研究一致；作者同時(shí)檢測(cè)HPV L1殼蛋白和MMP-2的表達(dá)顯示兩者在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展過程中具有負(fù)相關(guān), 提示兩者聯(lián)合能用于宮頸癌的早期診斷、預(yù)后判斷及術(shù)后早期復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的隨訪監(jiān)測(cè), 但仍需多中心研究結(jié)論。

綜上所述, 通過對(duì)不同宮頸組織中HPV L1蛋白與MMP-2的免疫組化測(cè)定表明：HPV Ll蛋白表達(dá)隨著宮頸病變程度的加重而下降；MMP-2隨著宮頸病變程度的加重而增加。因此, 作者推測(cè)HPV L1蛋白與MMP-2在宮頸病變的發(fā)生發(fā)展中具有一定意義, 可以幫助了解宮頸的病變程度,預(yù)測(cè)宮頸病變的發(fā)展趨勢(shì)。

［1］謝幸.婦產(chǎn)科學(xué).第8版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2013:301-302.

［2］朱華, 施錚錚, 楊孝軍, 等.Survivin、Bcl-2、HPV 16 /18在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志, 2010, 26 (1):57.

［3］陳恒禧, 甘曉玲, 傅璟.HPV L1 檢測(cè)預(yù)測(cè)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變預(yù)后的意義.現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展, 2009, 18(11):865.

［4］Lee H, Lee KJ, Jung CK, et al.Expression of HPVL1 capsid protein in cervical specimens with HPV infection.Diagn Cytopathol, 2008,36(12):864.

［5］Banerji A, Chakrabarti J, Mitra A, et al.Cell menbrane-associated MT1-MMP-dependent activation of pro-MMP-2 in A375 melanoma cells.J Env Path Tox Oncol, 2005, 24(1):3-17.

［6］滕燕伊 , 劉曉云 , 鄭洪 , 等 .Ki-67、MMP-7、MMP-2 在宮頸 CIN 和宮頸癌中的表達(dá)及意義.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2010,35(7):989-991.