魚毛毛， 劉金姣， 王雨楠， 連 冠， 王宇輝， 劉國(guó)慶， 祁 榮

(北京大學(xué)心血管研究所，分子心血管學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100191)

急性胰腺炎(acutepancreatitis，AP)是由于胰腺分泌的消化酶自我消化胰腺及其周圍組織而導(dǎo)致的嚴(yán)重的急性炎癥反應(yīng)[1]，并可能繼發(fā)一系列的多器官功能障礙，是臨床上危急重癥中較難治療的疾病之一[2]。AP的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，其發(fā)生發(fā)展受多種因素影響[3]，其中胰酶活化以及炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子和氧自由基大量產(chǎn)生引發(fā)機(jī)體超強(qiáng)的炎癥反應(yīng)是造成AP早期病理?yè)p害的主要機(jī)制。此外，AP時(shí)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能遭到損害，引起和(或)加重細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+水平的增高，從而導(dǎo)致胰腺腺泡細(xì)胞凋亡也是AP發(fā)展的一個(gè)重要機(jī)制[4]。

In following years, many of the original colonists celebrated the autumn harvest with a feast of thanks.

雨蛙肽(caerulein)是膽囊收縮素(cholecystokinin,CCK)的類似物，小鼠腹腔過(guò)量給予雨蛙肽刺激，可以引起類似于人類急性胰腺炎疾病時(shí)的生化及病理生理改變[5-6]。因此，雨蛙肽誘導(dǎo)的急性胰腺炎小鼠模型對(duì)臨床研究急性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制、病理過(guò)程、診斷及藥物干預(yù)治療效果等方面有重要意義。

葡萄多酚(grapepolyphenol,GP)是從葡萄中提取的天然植物多酚類活性物質(zhì)，廣泛存在于葡萄的皮、籽、果肉中，主要成分包括表兒茶酸等酚酸類、黃烷醇類、花色苷類、黃酮醇類和縮聚單寧等物質(zhì)；其中含量最高的為原花色苷，可達(dá)80%～85%[7]。在眾多植物多酚中，以葡萄多酚清除自由基能力最強(qiáng)，其有效成分的抗氧化能力為維生素E的 50倍，是維生素C的20倍左右，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最高效的抗氧化劑之一[8]。葡萄多酚還有保護(hù)心肌細(xì)胞[9]、降低血清膽固醇[10]、保護(hù)血管內(nèi)皮不受損傷[11]、防癌抗癌[12]、抗疲勞、抗炎、抗突變等生物活性。本研究旨在研究葡萄多酚對(duì)雨蛙肽誘導(dǎo)的小鼠急性胰腺炎的保護(hù)作用，并探討可能的機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 動(dòng)物

2月齡雌性ICR小鼠，體重約25 g，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。所有小鼠均在12 h光照、12 h 黑暗的標(biāo)準(zhǔn)周期下，于無(wú)菌設(shè)備中飼養(yǎng)，自由進(jìn)食及飲水。實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理管理委員會(huì)批準(zhǔn)。

2 主要試劑

葡萄多酚由新疆石河子西部牧業(yè)提供；Caerulein、TMB 和DEPC 購(gòu)自Sigma；α-淀粉酶測(cè)定試劑盒購(gòu)自北京中生北控生物科技股份有限公司；動(dòng)物組織總RNA Trizol提取液購(gòu)自北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限公司；TransScript First-Strand cDNA Synthesis Supermix購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司；Eva Green qPCR Master Mix購(gòu)自ABM；引物由北京諾賽基因組研究中心合成；Mac-2抗體(rabbit polyclonal IgG)購(gòu)自Santa Cruz；兔二步法檢測(cè)試劑盒、DAB顯色液均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

我國(guó)歷史上設(shè)置時(shí)間最長(zhǎng)的圖書管理機(jī)構(gòu)為秘書監(jiān)或秘書省。據(jù)史料記載，我國(guó)自東漢延熹二年（公元159年）開始，設(shè)置專門掌管朝廷典籍與藏書整理、編校工作的機(jī)構(gòu)秘書監(jiān)或秘書省，至洪武十三年（1380年），明太祖撤銷秘書監(jiān)為止，歷代沿襲了1200余年。

3 主要方法

夏天一身汗、冬天一身霜，晴天一身土、雨天一身泥。簡(jiǎn)短幾句話道出了養(yǎng)路工作的艱辛。他雖然身在中層領(lǐng)導(dǎo)崗位，仍然保持著養(yǎng)路工人的作風(fēng)。為了保證公路通暢，他同養(yǎng)路工人們一樣，冬天，不畏嚴(yán)寒，除雪保暢；夏天，不懼酷暑，奮戰(zhàn)一線，真心守護(hù)著公路，揮灑著青春和汗水。夏季工作，他迎著初升的太陽(yáng)，上路巡檢，安排工人處置病害。中午氣溫達(dá)到零上30多度，汗水浸透了橘黃色的工作服,艱難困苦并沒(méi)有嚇倒他，他帶領(lǐng)工人們以苦為樂(lè)、以路為業(yè)，用忘我的奉獻(xiàn)精神戰(zhàn)勝了困難，鋪平了道路。工作帶給他無(wú)盡的歡樂(lè)，豐富了他奮進(jìn)的心靈，鞭策他更加奮進(jìn)、更加執(zhí)著。

由表3可知，“小葉茼蒿”葉片的SPAD值x與葉綠素b含量y（單位：mg/g，下同）之間的相關(guān)性均表現(xiàn)為極顯著性差異，“大葉茼蒿”葉片SPAD值x與葉綠素b含量y(單位：mg/g，下同）之間的相關(guān)性則較差。其中“小葉茼蒿”的最佳函數(shù)模型是對(duì)數(shù)函數(shù)y=.5596Ln(x)-1.8316（r=0.845**），“大葉茼蒿”的最佳函數(shù)模型是線性函數(shù) y=0.0009x+0.2058（r=0.065）。

3.1.2 加大資金投入，豐富產(chǎn)品結(jié)構(gòu)。在旅游業(yè)還沒(méi)發(fā)展的時(shí)候，張家界主要以發(fā)展第一產(chǎn)業(yè)為主，第二三產(chǎn)業(yè)發(fā)展緩慢。在工業(yè)基礎(chǔ)薄弱的背景下，資金不足、基礎(chǔ)設(shè)施落后，導(dǎo)致第三產(chǎn)業(yè)的發(fā)展缺乏保障。生態(tài)旅游產(chǎn)品從規(guī)劃設(shè)計(jì)到投入實(shí)施都需要強(qiáng)有力的資金支持，城市化發(fā)展水平滯后成為制約張家界生態(tài)旅游業(yè)發(fā)展的一個(gè)瓶頸因素。同時(shí)，由于資金的短缺，導(dǎo)致旅游區(qū)基礎(chǔ)設(shè)施發(fā)展滯后，高品質(zhì)旅游接待設(shè)施數(shù)量少、餐飲業(yè)缺乏本地特色、購(gòu)物環(huán)境不良、旅游公共服務(wù)不達(dá)標(biāo)。以上綜合因素導(dǎo)致旅游產(chǎn)品缺乏良好的孵化環(huán)境，高品質(zhì)的生態(tài)產(chǎn)品沒(méi)有扎根的土壤。

3.2急性胰腺炎小鼠模型的建立 在藥物預(yù)處理小鼠的第7 d開始造模。造模前，所有實(shí)驗(yàn)小鼠自由飲水條件下禁食12 h。AP組以及GP預(yù)處理AP組小鼠腹腔注射caerulein(50 μg/kg)的生理鹽水溶液，每 h 1次，連續(xù)注射7次。NC組小鼠同法注射生理鹽水。予第1次注射后24 h處死小鼠，取胰腺組織，分別用于病理形態(tài)學(xué)及炎癥因子、氧化應(yīng)激標(biāo)志分子表達(dá)的研究。取肺組織，用于髓過(guò)氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性的測(cè)定。

與NC組相比，AP組小鼠的胰腺組織HO-1、SOD-1、SOD-2和NOX-2 mRNA表達(dá)上調(diào)，其中SOD-1和NOX-2的上調(diào)有顯著差異(P<0.05，P<0.01)，見圖5。GP預(yù)處理AP組小鼠的胰腺組織氧化應(yīng)激分子SOD-1、SOD-2和NOX-2 mRNA表達(dá)較AP模型組有明顯的下調(diào)(P<0.05，P<0.05，P<0.01)。結(jié)果表明，葡萄多酚能夠明顯下調(diào)AP時(shí)氧化應(yīng)激水平。

各組小鼠的胰腺組織病理切片HE染色結(jié)果見圖2。NC組小鼠胰腺形態(tài)結(jié)構(gòu)完好，無(wú)炎癥改變。與NC組相比，AP組小鼠胰腺組織有明顯的水腫改變，小葉間隙增寬、結(jié)構(gòu)紊亂，腺泡細(xì)胞局限性或廣泛性壞死，小葉間及壞死灶內(nèi)均有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)； GP預(yù)處理AP組小鼠胰腺組織的水腫，腺泡細(xì)胞的空泡、壞死，以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)較AP模型組明顯減輕。

3.5胰腺組織巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的觀察 用免疫組化法檢測(cè)胰腺組織中巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)情況，選擇Mac-2分子作為巨噬細(xì)胞表達(dá)的標(biāo)志分子。3%H2O2封閉胰腺切片的內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，10%正常羊血清孵育1h封閉。滴加抗Mac-2 Ⅰ抗(1∶200)，4 ℃冰箱中過(guò)夜。PBS緩沖液振蕩清洗切片3次后，滴加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Ⅱ抗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，常規(guī)封片。顯微鏡下觀察，棕染的細(xì)胞即為浸潤(rùn)的巨噬細(xì)胞。

表1 胰腺組織病理評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

HPF: high-power field.

3.6肺臟組織MPO活性的測(cè)定 參照文獻(xiàn)[15]的方法，采用分光光度分析法測(cè)量MPO的活性。將小鼠冰凍肺組織勻漿，應(yīng)用BCA法測(cè)量不同勻漿樣品的蛋白濃度。將勻漿樣品離心(16 000×g，15 min)，收集得到的沉淀物用磷酸鹽(pH 5.4，含0.5% HETAB和10 mmol/L EDTA)重懸，再次離心后得到上清。以TMB為底物，加入工作液，于650 nm處讀取吸光度(A)值，得到的結(jié)果用蛋白濃度校正，即為 MPO的活性。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

各組小鼠胰腺組織巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況見圖3。與NC組相比，AP組小鼠胰腺組織的小葉間隙以及壞死灶內(nèi)有大量的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。GP預(yù)處理AP組小鼠的胰腺組織均未見明顯的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)果表明，葡萄多酚能夠減輕AP時(shí)巨噬細(xì)胞對(duì)胰腺組織的浸潤(rùn)。

結(jié) 果

1 胰腺相對(duì)重量

對(duì)各組小鼠的胰腺切片進(jìn)行病理評(píng)分，結(jié)果顯示：與NC組相比，AP模型組水腫、炎癥、壞死、空泡等指標(biāo)的評(píng)分以及總分均顯著升高(P<0.05，P<0.01，P<0.05, P<0.01，P<0.01)，見圖2，提示造模成功。與AP組相比，GP預(yù)處理AP組小鼠的胰腺組織的水腫、炎癥以及空泡的評(píng)分明顯降低(P<0.05)，但壞死和病理總評(píng)分沒(méi)有明顯變化。結(jié)果表明，GP能夠顯著改善AP時(shí)胰腺的病理?yè)p傷，表現(xiàn)在減輕胰腺水腫、空泡，減少炎癥細(xì)胞對(duì)胰腺的浸潤(rùn)。

Figure 1. Changes of relative pancreas weight of mice from each group.Mean±SD.n=7.

2 胰腺病理?yè)p傷

3.4胰腺組織炎癥因子和氧化應(yīng)激標(biāo)志物表達(dá)測(cè)定 取小鼠胰腺組織約50 mg，于2 mL RNA Trizol提取液中勻漿，提取胰腺組織總RNA。利用TransScript First-Strand cDNA Synthesis Supermix試劑盒將總RNA 反轉(zhuǎn)錄，獲得cDNA。實(shí)時(shí)定量PCR(real-time quantitative PCR)測(cè)定各胰腺組織中的IL-1β、TNF-α、MCP-1 和TGF-β1等炎癥因子以及NOX-4、SOD-1 mRNA 表達(dá)水平。每個(gè)樣品重復(fù)3 次，并以SYBR Green 作為熒光劑，結(jié)果以18S rRNA 的表達(dá)水平標(biāo)準(zhǔn)化。

現(xiàn)在，社會(huì)正處于一種“后買方時(shí)代”，在這種消費(fèi)環(huán)境中，消費(fèi)者的觀念一定會(huì)對(duì)企業(yè)的生產(chǎn)產(chǎn)生一定的影響力。從環(huán)保的角度看，很多高污染、高消耗、高排放的產(chǎn)品會(huì)被消費(fèi)者拒絕，這樣的產(chǎn)品在市場(chǎng)上自然沒(méi)有需求。[3]企業(yè)在這一大背景下，想要在市場(chǎng)上占據(jù)較大的市場(chǎng)份額就必須通過(guò)科技創(chuàng)新，替換掉不具備競(jìng)爭(zhēng)力的產(chǎn)品，同時(shí)，升級(jí)整個(gè)產(chǎn)業(yè)鏈，主動(dòng)尋求合作伙伴，力求將手頭的各種資源進(jìn)行優(yōu)化配置和有效利用。另外，企業(yè)還可以通過(guò)自身產(chǎn)品的影響力，借助新聞媒體的宣傳手段，積極引導(dǎo)消費(fèi)者改變?cè)械南M(fèi)習(xí)慣和模式，適應(yīng)時(shí)代的變化。

各組小鼠的胰腺相對(duì)重量見圖1。與NC組相比，AP組和GP預(yù)處理AP組的小鼠胰腺相對(duì)重量有增加趨勢(shì)，但2組間沒(méi)有顯著差異，表明GP并不影響AP時(shí)胰腺的相對(duì)重量。

所以從這個(gè)角度講，我就覺得這部戲格局確實(shí)小了。就是說(shuō)我們一定要把歷史上的改革、工業(yè)革命與今天中國(guó)所面臨的現(xiàn)實(shí)（這個(gè)現(xiàn)實(shí)既有國(guó)際的形勢(shì)，也有國(guó)內(nèi)工業(yè)發(fā)展存在的問(wèn)題）和今天改革開放工業(yè)革命所肩負(fù)的使命聯(lián)系起來(lái)。不見得寫得那么直白，但是這個(gè)精神一定要有，要站在今天這個(gè)歷史高度來(lái)看當(dāng)年的改革開放?，F(xiàn)在多少還有一點(diǎn)就當(dāng)年的改革開放寫那一段歷史現(xiàn)實(shí)的局限的問(wèn)題，我覺得思路還要打開。

Figure 2. Morphology and pathological scores of pancreatic tissues of the mice with different treatments (HE staining,×100). Mean±SEM.n=7.*P<0.05,**P<0.01 vs NC; #P<0.05 vs AP.

3 胰腺組織巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)情況

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示。組間差異比較采用單因素方差分析和SNK-q檢驗(yàn)。組織學(xué)評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)的組間比較采用Mann-WhitneyU秩和檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

Figure 3. Macrophage infiltration in the pancreatic tissues of mice from each group (Mac-2 immunohistochemical staining, ×100).

4 胰腺組織炎癥因子的表達(dá)

與NC組相比， AP組小鼠的胰腺組織炎癥因子MCP-1、TNF-α和IL-1β的mRNA表達(dá)上調(diào)，其中MCP-1和TNF-α的上調(diào)有顯著差異(P<0.05)，見圖4。GP預(yù)處理AP組小鼠的胰腺組織炎癥因子MCP-1和TNF-α mRNA表達(dá)較AP組有明顯的下調(diào)(P<0.05)。結(jié)果表明，葡萄多酚能夠明顯下調(diào)AP時(shí)炎癥因子的升高。

Figure 4. The expression of inflammatory factors, TNF-α (A), MCP-1 (B) and IL-1β (C), in the pancreatic tissues of the mice with different treatments.Mean±SEM.n=7.*P<0.05, **P<0.01 vs NC; #P<0.05, ##P<0.01 vs AP.

5 胰腺組織氧化應(yīng)激分子的表達(dá)

3.3胰腺組織病理學(xué)評(píng)分 對(duì)取得的各組小鼠胰腺組織進(jìn)行福爾馬林緩沖液固定、石蠟包埋和切片。對(duì)切片進(jìn)行HE染色。按照病理學(xué)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[13-14](表1)，對(duì)各胰腺組織的切片進(jìn)行雙人、雙盲的病理評(píng)分。對(duì)評(píng)分結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

3.1藥物預(yù)處理 ICR雌性小鼠共21只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組)、AP模型組(AP組)和藥物處理AP組(GP預(yù)處理AP組)，每組7只。各組小鼠給予相應(yīng)的處理：GP預(yù)處理AP組灌胃給予GP水溶液1.5 g/kg, NC組和AP組同法給予生理鹽水。各組均每天給藥1次，連續(xù)給藥7 d。同時(shí)給予普通飼料(chow diet)喂飼。

Figure 5. The expression of oxidative stress markers, SOD-1 (A), SOD-2 (B), NOX-2 (C) and HO-1 (D), in the pancreatic tissues of the mice with different treatments.Mean±SEM. n=7.*P<0.05,**P<0.01 vs NC; #P<0.05,##P<0.01 vs AP.

6 肺臟的MPO活性變化

與NC組相比，AP組小鼠肺臟組織MPO的活性明顯升高(P<0.05)。GP預(yù)處理AP組小鼠肺臟組織MPO的活性較AP組顯著降低(P<0.01)，見圖6。結(jié)果表明，葡萄多酚能夠明顯降低AP時(shí)中性粒細(xì)胞對(duì)遠(yuǎn)端組織的浸潤(rùn)。

討 論

AP 是發(fā)生在胰腺組織的急性炎癥性疾病，有時(shí)亦累及胰腺臨近臟器和遠(yuǎn)隔器官，其病理生理過(guò)程與許多因素有關(guān)，包括胰腺消化酶的激活、炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子的大量產(chǎn)生等[16]。Caerulein是CCK的類似物，有研究揭示它可與胰腺細(xì)胞的CCK-A低親和受體結(jié)合，引起胰酶分泌，大劑量時(shí)可誘導(dǎo)AP 發(fā)生，被廣泛應(yīng)用于AP的實(shí)驗(yàn)研究中[17]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，經(jīng)caerulein誘導(dǎo)建立的AP模型，胰腺組織出現(xiàn)明顯的病理改變，包括水腫，腺泡細(xì)胞的空泡、壞死，以及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等，與人類急性胰腺炎發(fā)病時(shí)胰臟組織病理改變相似。此外，caerulein誘導(dǎo)的AP模型小鼠胰腺組織炎癥因子MCP-1、TNF-α和氧化應(yīng)激分子SOD-1、SOD-2、HO-1、NOX-2的表達(dá)水平明顯升高。雖然SOD-1、SOD-2以及HO-1被廣泛認(rèn)為是抗氧化分子，對(duì)多種疾病具有保護(hù)作用。但是我們的研究發(fā)現(xiàn)，在caerulein誘導(dǎo)的AP模型上，上述3個(gè)分子的表達(dá)都是顯著上調(diào)的，這可能是由于AP時(shí)大量活性氧物質(zhì)產(chǎn)生，抗氧化分子的表達(dá)代償性增加。同時(shí)我們的研究結(jié)果顯示NOX-2的表達(dá)顯著增加，而NOX-2是活性氧產(chǎn)生過(guò)程中一個(gè)重要的NADPH氧化酶，這意味著AP時(shí)活性氧的大量產(chǎn)生是確定的，這也支持了抗氧化分子代償性增加的結(jié)論。

Figure 6. MPO activity in the lung tissues of the mice with different treatments.Mean±SEM.n=7.*P<0.05 vs NC; ##P<0.01 vs AP.

炎癥在AP發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中起著非常關(guān)鍵的作用，也是影響預(yù)后的重要指標(biāo)。AP時(shí)，細(xì)胞因子通過(guò)相互交叉、相互代償?shù)难装Y信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)作用，觸發(fā)炎癥介質(zhì)的級(jí)聯(lián)效應(yīng)，進(jìn)而引起炎癥擴(kuò)布，引起全身炎癥反應(yīng)，胰腺組織受損，病情加重。在眾多細(xì)胞因子中，TNF-α處于核心地位，主要由免疫細(xì)胞產(chǎn)生，是炎癥反應(yīng)的始動(dòng)因子，作為關(guān)鍵促炎因子與NF-кB相互作用，可在體內(nèi)啟動(dòng)連鎖反應(yīng)，募集中性粒細(xì)胞，產(chǎn)生過(guò)量的炎癥因子及氧自由基，在AP的病理生理發(fā)展過(guò)程中起到重要作用[18]。MCP-1作為AP 早期的主要炎癥介質(zhì)之一，由腺泡細(xì)胞和浸潤(rùn)的白細(xì)胞產(chǎn)生，同時(shí)在血清中有顯著升高，不僅能夠募集單核巨噬細(xì)胞到胰腺局部加重炎癥，而且也能使巨噬細(xì)胞移行，損傷肺臟等遠(yuǎn)隔器官，在AP的炎癥損傷和肺損傷中起著重要的作用[19]。文獻(xiàn)研究表明，將MCP-1阻斷、敲除或給予MCP-1的抑制劑后，都可以有效改善AP的各項(xiàng)病理指標(biāo)，包括胰腺病變，肺損傷等方面[20-22]。因此，通過(guò)對(duì)炎癥反應(yīng)通路中關(guān)鍵細(xì)胞因子(TNF-α和MCP-1)的調(diào)控，遏制炎癥介質(zhì)進(jìn)一步激活，理論上能夠減輕AP引起的炎癥反應(yīng)。多酚類物質(zhì)因其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)成為非常理想和有效的抗炎物質(zhì)。有實(shí)驗(yàn)研究表明[23]，茶多酚作為抑制NF-κB 活化的抗氧化劑，通過(guò)調(diào)控前炎癥因子的活化，抑制炎癥細(xì)胞因子的分泌，發(fā)揮抗炎作用，進(jìn)而改善和減輕AP的嚴(yán)重程度。本研究所應(yīng)用的葡萄多酚也起到了類似的作用。治療組TNF-α以及MCP-1 mRNA表達(dá)水平較AP模型組均顯著降低，表明葡萄多酚能夠明顯抑制AP時(shí)炎癥因子TNF-α、MCP-1的產(chǎn)生，從而減輕機(jī)體的炎癥，達(dá)到抑制AP進(jìn)展的作用。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，葡萄多酚預(yù)處理組胰腺組織的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)較AP模型組明顯減少。這和MCP-1的結(jié)果是一致的，趨化因子的表達(dá)減少，導(dǎo)致胰腺組織局部的巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)也減少。

AP時(shí)，浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞和腺泡細(xì)胞產(chǎn)生過(guò)量的活性氧物質(zhì)，其中過(guò)氧化氫、超氧化物是造成細(xì)胞損害的主要因素?；钚匝醪坏赏ㄟ^(guò)破壞細(xì)胞膜，裂解蛋白質(zhì)及核酸導(dǎo)致細(xì)胞壞死，而且可以損傷毛細(xì)血管內(nèi)皮，增加血管通透性，還可激活補(bǔ)體，促進(jìn)白細(xì)胞黏附、活化和遷移，引起微循環(huán)障礙，加重胰腺損傷。此外，活性氧物質(zhì)可以通過(guò)誘導(dǎo)IκB-α磷酸化激活NF-κB，上調(diào)炎癥介質(zhì)表達(dá)[24]，發(fā)揮協(xié)同作用，觸發(fā)共同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，導(dǎo)致炎癥的級(jí)聯(lián)放大，最終加重胰腺組織和遠(yuǎn)隔器官的損傷。研究表明，抗氧化劑能保護(hù)細(xì)胞核DNA、膜脂質(zhì)、胞質(zhì)蛋白等生物大分子免受氧化損傷，能有效地清除多種自由基，減輕多種物質(zhì)誘導(dǎo)的多種組織的氧化應(yīng)激反應(yīng)[25]，因此能夠有效地抑制AP時(shí)的氧化應(yīng)激水平，從而保護(hù)胰腺組織不受損傷。葡萄多酚中的有效成分具有超強(qiáng)的抗氧化能力，在很多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用，比如抗衰老、抗腫瘤、抗動(dòng)脈粥樣硬化、改善視覺功能等。本研究結(jié)果顯示，與AP模型組相比，葡萄多酚能夠顯著降低氧化應(yīng)激分子SOD-1、SOD-2和NOX-2的mRNA表達(dá)水平。由此可見，葡萄多酚的抗氧化活性是其減輕AP病理程度的一個(gè)重要方面。

遠(yuǎn)隔器官的損傷，例如肺損傷，是急性胰腺炎非常危險(xiǎn)的并發(fā)癥，也是影響AP結(jié)局和預(yù)后的關(guān)鍵因素。肺損傷主要是由于中性粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的激活和移行，引發(fā)炎癥介質(zhì)和氧化應(yīng)激分子大量產(chǎn)生而導(dǎo)致的。本研究結(jié)果表明，給予葡萄多酚預(yù)處理后，小鼠肺臟組織的MPO活性較AP模型組顯著降低，提示肺部中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)減少，炎癥減輕，肺損傷程度較輕。這一結(jié)果也與炎癥因子、氧化應(yīng)激分子表達(dá)水平降低的結(jié)果是一致的。

本研究所采用的葡萄多酚劑量為1.5 g/kg。該劑量的確定是基于本研究組前期對(duì)葡萄多酚降脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化作用的研究結(jié)果。我們發(fā)現(xiàn)該劑量條件下，葡萄多酚對(duì)于小鼠不僅安全，而且降脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化的效果最為顯著。因而，在本研究中我們采用該劑量研究葡萄多酚對(duì)雨蛙素誘導(dǎo)的小鼠急性胰腺炎的作用。結(jié)果表明，葡萄多酚能夠明顯減輕雨蛙素誘導(dǎo)的急性胰腺炎時(shí)小鼠胰腺組織的損傷。

綜上所述，葡萄多酚具有抗炎和抗氧化作用，通過(guò)下調(diào)炎癥因子和氧化應(yīng)激分子的表達(dá)，減輕AP時(shí)胰腺的病理改變程度，減少胰腺組織巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，降低肺組織MPO活性等，最終達(dá)到急性胰腺炎時(shí)對(duì)胰腺組織的保護(hù)作用。

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