劉如沁　黃愛玲　索志榮

摘 要：采用抑菌圈實(shí)驗(yàn)和二倍稀釋法研究了香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果表明：香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著，當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長。

關(guān)鍵詞：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟樹屬的常綠喬木植物，其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油，它們不僅是醫(yī)藥上樟腦、龍腦的主要原料，還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發(fā)現(xiàn)，精油具有強(qiáng)烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2，3]。當(dāng)今在動植物病原菌對化學(xué)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性日漸加劇的形勢下，精油因具有自然揮發(fā)的特性，可作為一種有待開發(fā)的新型殺菌物質(zhì)進(jìn)行研究[4]。本實(shí)驗(yàn)采用試管二倍稀釋法聯(lián)合瓊脂平板法對香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌效果進(jìn)行了研究和探討，以便為進(jìn)一步開發(fā)治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據(jù)，也為開發(fā)香樟精油在天然消毒殺菌產(chǎn)品利用方面提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），購于中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

香樟精油不溶于水，以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震蕩搖勻，配置成50%的溶液，裝入棕色瓶作為母液，二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌懸液的制備

將供試菌種在斜面培養(yǎng)基上活化2代后，用接種環(huán)從斜面上輕刮菌苔一環(huán)，收集到內(nèi)盛10mL無菌水的三角瓶中，配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性測定

待培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基凝固后，在無菌條件下，取0.2ml菌懸液涂布到培養(yǎng)皿上。將D=6mm的無菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時，瀝干，平鋪在培養(yǎng)皿上，每平板鋪2片。以丙酮作為空白對照，以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽性對照，于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察，并測定抑菌圈的直徑。平行實(shí)驗(yàn)3次。抑菌圈試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)：濾紙片直徑為6mm時，抑菌圈直徑大于20mm，極敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌濃度（MIC）的測定[6]

將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養(yǎng)基中混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后，即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫線接種菌液，37℃培養(yǎng)1d。觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+），不生長菌體為陰性（-），以不生長菌的試驗(yàn)樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度（MIC），以丙酮作為陰性對照。重復(fù)2次。

2 結(jié)果與分析

香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性測定結(jié)果

表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

表2 香樟精油對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測定

“+”表示培養(yǎng)基有菌落生長，“-”表示培養(yǎng)基未出現(xiàn)菌落。

從表1、2看出，不同濃度香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大，為13.1mm，在10～15mm之間，屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分?jǐn)?shù)的增大而增強(qiáng)。最小抑菌濃度MIC值是測定抗菌物質(zhì)抗菌活性大小的指標(biāo)。當(dāng)濃度降到到12.5%時平板中沒有檢出菌落，6.25%時平板中檢出少量菌落，當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長，故其對金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

3 結(jié)束語

該實(shí)驗(yàn)表明香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm，金黃色葡萄球菌對香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛民[8]等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)香樟精油對金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗細(xì)菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟樹葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國亞熱帶綠闊葉林的主要樹種之一，資源豐富，加快其抑菌活性及機(jī)理的研究有利于開發(fā)香樟油的開發(fā)和利用。

參考文獻(xiàn)

[1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調(diào)味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]楊致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林業(yè)科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孫偉，肖家祁.中草藥精油對細(xì)菌生長抑制的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2005，39（10）：54-55.

[4]楊森艷，姚雷.檸檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大學(xué)學(xué)報，2005，23（4）：375-382.

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程3版[M].南京：東南大學(xué)出版社，1997.

[6]吳均，楊欽滟，趙曉娟，等.山蒼子油的抑菌活性及機(jī)理研究[J]，食品工業(yè)科技，2013，34（17）：119-125.

[7]馬英姿，譚琴，李恒熠，等.樟樹葉及天竺桂葉的精油抑菌活性研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報，2009，29（1）：36-40.

[8]李愛民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林業(yè)科技，2006，33（4）：121-123.

[9]劉亞，李茂昌，張永聰，等.香樟樹葉揮發(fā)油的化學(xué)成分研究[J].分析試驗(yàn)室，2008，27（1）：88-92.

[10]國家醫(yī)藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986.

作者簡介：秦海燕（1975-），女，碩士，講師，主要從事藥用植物活性研究。endprint

摘 要：采用抑菌圈實(shí)驗(yàn)和二倍稀釋法研究了香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果表明：香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著，當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長。

關(guān)鍵詞：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟樹屬的常綠喬木植物，其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油，它們不僅是醫(yī)藥上樟腦、龍腦的主要原料，還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發(fā)現(xiàn)，精油具有強(qiáng)烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2，3]。當(dāng)今在動植物病原菌對化學(xué)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性日漸加劇的形勢下，精油因具有自然揮發(fā)的特性，可作為一種有待開發(fā)的新型殺菌物質(zhì)進(jìn)行研究[4]。本實(shí)驗(yàn)采用試管二倍稀釋法聯(lián)合瓊脂平板法對香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌效果進(jìn)行了研究和探討，以便為進(jìn)一步開發(fā)治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據(jù)，也為開發(fā)香樟精油在天然消毒殺菌產(chǎn)品利用方面提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），購于中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

香樟精油不溶于水，以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震蕩搖勻，配置成50%的溶液，裝入棕色瓶作為母液，二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌懸液的制備

將供試菌種在斜面培養(yǎng)基上活化2代后，用接種環(huán)從斜面上輕刮菌苔一環(huán)，收集到內(nèi)盛10mL無菌水的三角瓶中，配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性測定

待培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基凝固后，在無菌條件下，取0.2ml菌懸液涂布到培養(yǎng)皿上。將D=6mm的無菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時，瀝干，平鋪在培養(yǎng)皿上，每平板鋪2片。以丙酮作為空白對照，以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽性對照，于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察，并測定抑菌圈的直徑。平行實(shí)驗(yàn)3次。抑菌圈試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)：濾紙片直徑為6mm時，抑菌圈直徑大于20mm，極敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌濃度（MIC）的測定[6]

將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養(yǎng)基中混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后，即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫線接種菌液，37℃培養(yǎng)1d。觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+），不生長菌體為陰性（-），以不生長菌的試驗(yàn)樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度（MIC），以丙酮作為陰性對照。重復(fù)2次。

2 結(jié)果與分析

香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性測定結(jié)果

表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

表2 香樟精油對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測定

“+”表示培養(yǎng)基有菌落生長，“-”表示培養(yǎng)基未出現(xiàn)菌落。

從表1、2看出，不同濃度香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大，為13.1mm，在10～15mm之間，屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分?jǐn)?shù)的增大而增強(qiáng)。最小抑菌濃度MIC值是測定抗菌物質(zhì)抗菌活性大小的指標(biāo)。當(dāng)濃度降到到12.5%時平板中沒有檢出菌落，6.25%時平板中檢出少量菌落，當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長，故其對金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

3 結(jié)束語

該實(shí)驗(yàn)表明香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm，金黃色葡萄球菌對香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛民[8]等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)香樟精油對金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗細(xì)菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟樹葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國亞熱帶綠闊葉林的主要樹種之一，資源豐富，加快其抑菌活性及機(jī)理的研究有利于開發(fā)香樟油的開發(fā)和利用。

參考文獻(xiàn)

[1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調(diào)味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]楊致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林業(yè)科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孫偉，肖家祁.中草藥精油對細(xì)菌生長抑制的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2005，39（10）：54-55.

[4]楊森艷，姚雷.檸檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大學(xué)學(xué)報，2005，23（4）：375-382.

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程3版[M].南京：東南大學(xué)出版社，1997.

[6]吳均，楊欽滟，趙曉娟，等.山蒼子油的抑菌活性及機(jī)理研究[J]，食品工業(yè)科技，2013，34（17）：119-125.

[7]馬英姿，譚琴，李恒熠，等.樟樹葉及天竺桂葉的精油抑菌活性研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報，2009，29（1）：36-40.

[8]李愛民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林業(yè)科技，2006，33（4）：121-123.

[9]劉亞，李茂昌，張永聰，等.香樟樹葉揮發(fā)油的化學(xué)成分研究[J].分析試驗(yàn)室，2008，27（1）：88-92.

[10]國家醫(yī)藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986.

作者簡介：秦海燕（1975-），女，碩士，講師，主要從事藥用植物活性研究。endprint

摘 要：采用抑菌圈實(shí)驗(yàn)和二倍稀釋法研究了香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌活性、最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果表明：香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性顯著，當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長。

關(guān)鍵詞：香樟；精油；抑菌香樟（Cinamomum Camphora （Linn.）Presl）系樟樹屬的常綠喬木植物，其根、木材、枝和葉均可提取香樟精油，它們不僅是醫(yī)藥上樟腦、龍腦的主要原料，還具有凈化有毒空氣的能力及抗癌功效[1]。近年的許多研究發(fā)現(xiàn)，精油具有強(qiáng)烈的抑制或殺死真菌等微生物的特性[2，3]。當(dāng)今在動植物病原菌對化學(xué)殺菌劑產(chǎn)生抗藥性日漸加劇的形勢下，精油因具有自然揮發(fā)的特性，可作為一種有待開發(fā)的新型殺菌物質(zhì)進(jìn)行研究[4]。本實(shí)驗(yàn)采用試管二倍稀釋法聯(lián)合瓊脂平板法對香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌效果進(jìn)行了研究和探討，以便為進(jìn)一步開發(fā)治療呼吸道疾病新的抗菌藥物提供理論依據(jù)，也為開發(fā)香樟精油在天然消毒殺菌產(chǎn)品利用方面提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

供試菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC26112），購于中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心。香樟油由西南科技大學(xué)天然藥物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 香樟精油稀釋液的制備

香樟精油不溶于水，以丙酮作為稀釋劑。精確量取5ml香樟精油，加入5ml丙酮，震蕩搖勻，配置成50%的溶液，裝入棕色瓶作為母液，二倍稀釋法配制一系列濃度梯度的精油溶液。

1.2.2 菌懸液的制備

將供試菌種在斜面培養(yǎng)基上活化2代后，用接種環(huán)從斜面上輕刮菌苔一環(huán)，收集到內(nèi)盛10mL無菌水的三角瓶中，配成終濃度為106CFU/mL的菌懸液，備用。

1.2.3 香樟油的抑菌活性測定

待培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基凝固后，在無菌條件下，取0.2ml菌懸液涂布到培養(yǎng)皿上。將D=6mm的無菌濾紙片在香樟油中浸泡2小時，瀝干，平鋪在培養(yǎng)皿上，每平板鋪2片。以丙酮作為空白對照，以1.0mg/ml氨芐青霉素作為陽性對照，于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h后觀察，并測定抑菌圈的直徑。平行實(shí)驗(yàn)3次。抑菌圈試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)：濾紙片直徑為6mm時，抑菌圈直徑大于20mm，極敏；15～20mm，高敏；10～15mm，中敏；7～9mm，低敏；小于7mm，不敏感[5]。

1.2.4 最小抑菌濃度（MIC）的測定[6]

將不同濃度梯度的香樟精油溶液各1mL加入融化的固體培養(yǎng)基中混合均勻，待培養(yǎng)基凝固后，即得含各濃度香樟油的供試樣品的平板。在平板上畫線接種菌液，37℃培養(yǎng)1d。觀察菌體生長情況，生長菌體為陽性（+），不生長菌體為陰性（-），以不生長菌的試驗(yàn)樣品的最低濃度為香樟油最低抑菌濃度（MIC），以丙酮作為陰性對照。重復(fù)2次。

2 結(jié)果與分析

香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性測定結(jié)果

表1 不同濃度香樟精油作用下金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑

表2 香樟精油對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度的測定

“+”表示培養(yǎng)基有菌落生長，“-”表示培養(yǎng)基未出現(xiàn)菌落。

從表1、2看出，不同濃度香樟精油對金黃色葡萄球菌抑菌活性不同。純精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈最大，為13.1mm，在10～15mm之間，屬中敏。精油抑菌圈的直徑隨體積分?jǐn)?shù)的增大而增強(qiáng)。最小抑菌濃度MIC值是測定抗菌物質(zhì)抗菌活性大小的指標(biāo)。當(dāng)濃度降到到12.5%時平板中沒有檢出菌落，6.25%時平板中檢出少量菌落，當(dāng)香樟精油的濃度大于12.5%時，可完全抑制金黃色葡萄球菌的生長，故其對金黃色葡萄球菌的MIC為12.5%。

3 結(jié)束語

該實(shí)驗(yàn)表明香樟精油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑為13.1mm，金黃色葡萄球菌對香樟精油中度敏感。馬英姿[7]、李愛民[8]等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)香樟精油對金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌效果。香樟油主要成分為樟腦、β-芳樟醇（24.09%）、桉油醇（15.72%）、α-松油醇（11.20%）、蛇床-6-烯-4-醇（5.724%）[9]，其中，芳樟醇具有抗細(xì)菌、抗真菌和抗病毒作用[10]，是樟樹葉精油中的主要抗菌成分。香樟是我國亞熱帶綠闊葉林的主要樹種之一，資源豐富，加快其抑菌活性及機(jī)理的研究有利于開發(fā)香樟油的開發(fā)和利用。

參考文獻(xiàn)

[1]史娟.香樟葉中精油的提取[J].江蘇調(diào)味副食品.2011，28（2）：16-19.

[2]楊致年，曾超，朱宗良，等.植物精油的抗菌性[J].四川林業(yè)科技，2000，21（3）：37-39.

[3]孫偉，肖家祁.中草藥精油對細(xì)菌生長抑制的實(shí)驗(yàn)研究[J].上海中醫(yī)藥雜志，2005，39（10）：54-55.

[4]楊森艷，姚雷.檸檬草精油抗菌性研究[J]，上海交通大學(xué)學(xué)報，2005，23（4）：375-382.

[5]中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程3版[M].南京：東南大學(xué)出版社，1997.

[6]吳均，楊欽滟，趙曉娟，等.山蒼子油的抑菌活性及機(jī)理研究[J]，食品工業(yè)科技，2013，34（17）：119-125.

[7]馬英姿，譚琴，李恒熠，等.樟樹葉及天竺桂葉的精油抑菌活性研究[J].中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報，2009，29（1）：36-40.

[8]李愛民，唐永勤，卿玉波.樟油的提取及其抑菌性研究[J].福建林業(yè)科技，2006，33（4）：121-123.

[9]劉亞，李茂昌，張永聰，等.香樟樹葉揮發(fā)油的化學(xué)成分研究[J].分析試驗(yàn)室，2008，27（1）：88-92.

[10]國家醫(yī)藥管理局中草藥情報中心站.植物藥有效成分手冊[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1986.

作者簡介：秦海燕（1975-），女，碩士，講師，主要從事藥用植物活性研究。endprint