田瀚吉　王春利　張雙平

【摘要】目的：觀察HER-2及VEGF在賁門癌組織中的表達及其相關病理學因素。方法：選取我院2012年1月～2013年6月收治的所有賁門癌患者中隨機抽樣77例，在SP檢測法，也就是免疫組織化學檢測法對患者的賁門癌組織、癌旁組織及正常組織中的HER-2及VEGF的結(jié)果進行相應的表達。結(jié)果：①經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，癌旁組織中的中HER-2及VEGF的陽性表達率明顯低于賁門癌組織，說明賁門癌的發(fā)病原因和HER-2及VEGF的作用有一定的關系。②賁門癌中，腫瘤的生長位置、Lauren分型和分化的程度都會影響HER-2的陽性表達，而賁門癌的組織浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移和靜脈侵犯則會對VEGF表達產(chǎn)生影響。結(jié)論：HER-2及VEGF高表達參于賁門癌的生長、轉(zhuǎn)移及侵襲過程。

【關鍵詞】HER-2血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）；賁門癌

賁門屬于胃的一部分，其上界為EGJ即胃的入口，但其下界難于確定。賁門癌當屬于胃癌，以食管胃解剖學交界（EGJ）為分界線，位于其下5cm范圍內(nèi)者為賁門癌，按胃癌TNM分期。賁門癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，嚴重危害著我國人民的身體健康。該腫瘤轉(zhuǎn)移快，五年生存率低，已引起學者們的廣泛關注。HER-2蛋白是一種酪氨酸激酶受體，是表皮生長因子受體（EGFRs）的家族成員；而VEGF又叫做血管內(nèi)皮生長因子，是一種分裂原，通常會在內(nèi)皮細胞特異性的作用下發(fā)生，也是一種誘導因子，能夠促進體內(nèi)血管的生成。國外的學者對HER-2及VEGF在賁門癌組織中的表達進行了多方面的研究[1-2]，對HER-2及VEGF出現(xiàn)異常表達的原因進行了分析，最后的研究結(jié)果證明了，多種腫物的入侵和轉(zhuǎn)移，例如肺癌、胃腸癌、乳腺癌中的癌細胞的轉(zhuǎn)移程度都會影響到多種腫物的正常表達。本次研究主要采用了免疫組化法，對賁門癌中HER-2蛋白及VEGF的表達水平進行了詳細的分析，并對HER-2蛋白及VEGF表達在治療賁門癌中的病理學意義進行了深入探討。

資料與方法

一般資料：選取2012年1月～2013年6月山西省腫瘤醫(yī)院的77例賁門癌患者作為石蠟包埋標本，77例患者均符合賁門癌的疾病診斷標準，對腫瘤部位并進行了手術切除處理，其中男性69例，女性8例，年齡41～78歲，平均年齡48.6±1.7歲。按2009年第7版胃癌TNM分期標準，對77例患者進行分期，均為初治患者。

試劑抗體分別為HER2（（ZM-0065）、VEGF（ZM-0265）。即用型SP免疫組化檢測試劑盒及濃縮型二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒。

方法：先對患者進行甲醛固定，然后進行石蠟包埋處理，最后經(jīng)過HE染色組織學的原理來對患者的腫瘤組織進行確定，這就是賁門癌確診的方法。鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法染色步驟，可以根據(jù)相關的產(chǎn)品說明進行操作，在使用OlympusDp70圖像采集分析儀的基礎上收集鏡下圖像的數(shù)據(jù)，并對數(shù)據(jù)進行相應的分析。

診斷標準：對病變細胞的相關位置進行免疫組織化學檢測法進行檢驗，如果細胞出現(xiàn)黃黃棕色現(xiàn)象，則表明該反應為陽性。因為HER-2陽性表達的主要表現(xiàn)就是細胞膜中會出現(xiàn)棕黃色的沉淀物，且沉淀物的呈現(xiàn)出顆粒狀形態(tài)。對于VEGF的陽性表達來說，它的主要特征就是在細胞漿內(nèi)也可以顯示出棕黃色的顆粒狀物質(zhì)。另外，本研究按照陽性細胞的數(shù)量對染色的等級進行了劃分，即陽性細胞的數(shù)量超過一半時程度最重，用（+++）進行標示，陽性細胞的數(shù)量超過10%，低于50%時，則程度稍輕，用（++）進行表示；陽性細胞額數(shù)量小于10%時，則程度更輕，可以用（+）進行標示，陽性細胞數(shù)量為零，則可以用（-）進行表示。

統(tǒng)計學意義：采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用兩個（或多個）樣本率比較的檢驗，其中不滿足檢驗條件時，采用fisher確切概率法，計數(shù)資料的相關性則采用spearman進行分析，當P<0.5時就表示差異具有統(tǒng)計學意義。

結(jié)果

賁門癌組織中HER-2、VEGF的表達水平：受檢患者賁門癌組織中HER-2及VEGF的表達水平均為陽性，結(jié)果分別為41/77（53.2%），45/77（58.4%）。

HER2、VEGF陽性表達與賁門癌臨床病理的關系：賁門癌中，腫瘤的生長位置、Lauren分型和分化的程度都會影響HER-2的陽性表達（P<0.05）；賁門癌的組織浸潤深度、TNM分期、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移和靜脈侵犯則會對VEGF表達產(chǎn)生影響（P<0.05），見表1。

討論

Houldsworth證實賁門癌中有擴增的DNA序列為HER-2/neu[3]，也即C-erbB-2基因。Slaman等曾報道C-erbB-2基因擴增及過度表達與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后有關[4]。HER-2是具有酪氨酸蛋白激酶活性的受體，其單體并無活性，必須形成二聚體才能產(chǎn)生活化信號。當該蛋白處于激活狀態(tài)下時，就表明它受到了某些致癌物質(zhì)的影響，使得腫瘤能夠進行活性轉(zhuǎn)移，這就意味著細胞發(fā)生了惡性轉(zhuǎn)化[5]。因為在正常的狀態(tài)下，該蛋白是以一種非激活的狀態(tài)存在的。當HER-2被機會之后，可通過參與激活Ras/Raf/Mek/ERK/MAPK、P13K/PDK1/Akt（PKB）、PLC7、JAK/STAT等細胞信號通路[6]，從而介導細胞分化、生存、遷移、侵襲、黏附、損傷修復等重要功能。另有相關研究發(fā)現(xiàn)[7-8]，EGFR高表達于腫瘤的發(fā)生、增殖和轉(zhuǎn)移。不管是從結(jié)構上來說，還是從功能上來說，HER-2與EGFR都有很多相似的地方。如果將這二者的表達結(jié)合起來，就能對賁門癌的轉(zhuǎn)移起到一定的協(xié)作影響。以前的很多研究都證明了，HER-2的表達值越高，那么和惡性腫瘤的聯(lián)系性就越強。美國的一個科學家Rastelli F發(fā)現(xiàn)，HER-2的基因擴張和過度表達的現(xiàn)象最早都是在乳腺癌的檢測中被發(fā)現(xiàn)的，并且具有10%～34%的發(fā)生概率。大多數(shù)情況下，如果HER-2在賁門癌組織中的表達過高，就表示為腫瘤的預后效果不是很理想，內(nèi)分泌治療和化學治療的效果并不明顯[9]。在一些比較常見的癌癥中，例如結(jié)腸癌、宮頸癌、乳腺癌等惡性腫瘤中，HER-2的基因擴張現(xiàn)象都非常明顯，而且表達值都很高。所以說，血管的生成是腫瘤細胞增殖和轉(zhuǎn)換的前提條件。

研究證明作用最強的促血管生成因子就是VEGF，它是一種同源二聚體的糖蛋白，它的相對分子質(zhì)量為（35～42）×103。VEGF主要有四個方面的作用。第一，促進血管生成。第二，有助于內(nèi)皮細胞的增生和轉(zhuǎn)移。第三，增加血管的滲透性，尤其是微小血管的滲透性。因為血管滲透能力的提高能夠讓血漿中的大分子物質(zhì)滲透出來，從而在血管的外基質(zhì)進行沉積，能夠促進腫瘤細胞的生長，并能建立新的毛細血管網(wǎng)。第四，能夠增強部分蛋白水解酶的分解作用，實現(xiàn)對基質(zhì)的降解作用。通過這些作用，能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤血管的再生和轉(zhuǎn)移，而且新的血管反過來也可以促進腫瘤細胞的生長，就會導致體內(nèi)VEGF的數(shù)量增加。

本實驗發(fā)現(xiàn)，HER-2在賁門癌組織中的陽性表達率為41/77（53.2%）。HER-2高表達于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程，是賁門癌預后的一項重要的評價標準。目前，HER-2的高表達對乳腺癌患者的治療已獲得巨大成果，主要的方法就是HER-2蛋白靶向抗體曲妥珠單抗，但在賁門癌的臨床應用并不多。由此推斷，有望應用HER-2的高表達水平中靶向藥物的治療來抑制HER-2的過度表達從而限制賁門癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，隨著我們對HER-2基因機制中的轉(zhuǎn)錄激活進行深入的了解，那么對腫瘤進行靶向治療的方法一定具有非常廣闊的發(fā)展前景。

研究發(fā)現(xiàn)賁門癌組織中VEGF陽性表達率為45/77（58.4%），細胞的分化程度和陽性的表達呈反比例關系，即細胞分化的程度越高，那么陽性率就越低。同時，細胞的分化程度還和腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移呈正比例關系，即細胞分化的程度越高，那么腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移你速度就越快。VEGF的受體的表達程度高低與腫瘤的惡性程度及發(fā)展速度呈正相關。當人體處于正常狀態(tài)時，VEGF的表現(xiàn)水平就會很低，而當人體內(nèi)出現(xiàn)惡性腫瘤，也就是我們常說的癌癥時，VEGF的表現(xiàn)則會提高[10]。這說明，與其它的惡性腫瘤一樣，VEGF在賁門癌的生長、轉(zhuǎn)移和侵襲等發(fā)展中具有重要作用，這與文獻報道一致[11-12]。

在進行賁門癌預后效果的判斷時可以將HER-2及VEGF的表達水平最為主要的依據(jù)，實現(xiàn)對高危轉(zhuǎn)移患者的篩選。除此之外，將HER-2及VEGF的表達進行聯(lián)合分析，還可為賁門癌的分子靶向藥物的選擇提供理論科學的證據(jù)。二者的聯(lián)合檢測在賁門癌惡性程度及評估預后將有待研究。

參考文獻

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[9]Bu W，Tang ZY，Sun FX，et a1.Effeets of matrix metalloproteinase inhibitor BB-94 on liver cancer growth and metastasis in a patient-like orthotopic model LCI-D20[J].Hepatogastroenterology：1998，45（22）：1056-1061.

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[12]Kang SM，Maeda K，Onoda N，et al.Combined analysis of p53 and vascular endothelial growth factor expression in colorectal carcinoma for determination of tumor vascularity and liver metastasis[J].Int J Cancer，1997，74（5）：502-507.

研究證明作用最強的促血管生成因子就是VEGF，它是一種同源二聚體的糖蛋白，它的相對分子質(zhì)量為（35～42）×103。VEGF主要有四個方面的作用。第一，促進血管生成。第二，有助于內(nèi)皮細胞的增生和轉(zhuǎn)移。第三，增加血管的滲透性，尤其是微小血管的滲透性。因為血管滲透能力的提高能夠讓血漿中的大分子物質(zhì)滲透出來，從而在血管的外基質(zhì)進行沉積，能夠促進腫瘤細胞的生長，并能建立新的毛細血管網(wǎng)。第四，能夠增強部分蛋白水解酶的分解作用，實現(xiàn)對基質(zhì)的降解作用。通過這些作用，能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤血管的再生和轉(zhuǎn)移，而且新的血管反過來也可以促進腫瘤細胞的生長，就會導致體內(nèi)VEGF的數(shù)量增加。

本實驗發(fā)現(xiàn)，HER-2在賁門癌組織中的陽性表達率為41/77（53.2%）。HER-2高表達于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程，是賁門癌預后的一項重要的評價標準。目前，HER-2的高表達對乳腺癌患者的治療已獲得巨大成果，主要的方法就是HER-2蛋白靶向抗體曲妥珠單抗，但在賁門癌的臨床應用并不多。由此推斷，有望應用HER-2的高表達水平中靶向藥物的治療來抑制HER-2的過度表達從而限制賁門癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，隨著我們對HER-2基因機制中的轉(zhuǎn)錄激活進行深入的了解，那么對腫瘤進行靶向治療的方法一定具有非常廣闊的發(fā)展前景。

研究發(fā)現(xiàn)賁門癌組織中VEGF陽性表達率為45/77（58.4%），細胞的分化程度和陽性的表達呈反比例關系，即細胞分化的程度越高，那么陽性率就越低。同時，細胞的分化程度還和腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移呈正比例關系，即細胞分化的程度越高，那么腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移你速度就越快。VEGF的受體的表達程度高低與腫瘤的惡性程度及發(fā)展速度呈正相關。當人體處于正常狀態(tài)時，VEGF的表現(xiàn)水平就會很低，而當人體內(nèi)出現(xiàn)惡性腫瘤，也就是我們常說的癌癥時，VEGF的表現(xiàn)則會提高[10]。這說明，與其它的惡性腫瘤一樣，VEGF在賁門癌的生長、轉(zhuǎn)移和侵襲等發(fā)展中具有重要作用，這與文獻報道一致[11-12]。

在進行賁門癌預后效果的判斷時可以將HER-2及VEGF的表達水平最為主要的依據(jù)，實現(xiàn)對高危轉(zhuǎn)移患者的篩選。除此之外，將HER-2及VEGF的表達進行聯(lián)合分析，還可為賁門癌的分子靶向藥物的選擇提供理論科學的證據(jù)。二者的聯(lián)合檢測在賁門癌惡性程度及評估預后將有待研究。

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研究證明作用最強的促血管生成因子就是VEGF，它是一種同源二聚體的糖蛋白，它的相對分子質(zhì)量為（35～42）×103。VEGF主要有四個方面的作用。第一，促進血管生成。第二，有助于內(nèi)皮細胞的增生和轉(zhuǎn)移。第三，增加血管的滲透性，尤其是微小血管的滲透性。因為血管滲透能力的提高能夠讓血漿中的大分子物質(zhì)滲透出來，從而在血管的外基質(zhì)進行沉積，能夠促進腫瘤細胞的生長，并能建立新的毛細血管網(wǎng)。第四，能夠增強部分蛋白水解酶的分解作用，實現(xiàn)對基質(zhì)的降解作用。通過這些作用，能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤血管的再生和轉(zhuǎn)移，而且新的血管反過來也可以促進腫瘤細胞的生長，就會導致體內(nèi)VEGF的數(shù)量增加。

本實驗發(fā)現(xiàn)，HER-2在賁門癌組織中的陽性表達率為41/77（53.2%）。HER-2高表達于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程，是賁門癌預后的一項重要的評價標準。目前，HER-2的高表達對乳腺癌患者的治療已獲得巨大成果，主要的方法就是HER-2蛋白靶向抗體曲妥珠單抗，但在賁門癌的臨床應用并不多。由此推斷，有望應用HER-2的高表達水平中靶向藥物的治療來抑制HER-2的過度表達從而限制賁門癌的侵襲和轉(zhuǎn)移，隨著我們對HER-2基因機制中的轉(zhuǎn)錄激活進行深入的了解，那么對腫瘤進行靶向治療的方法一定具有非常廣闊的發(fā)展前景。

研究發(fā)現(xiàn)賁門癌組織中VEGF陽性表達率為45/77（58.4%），細胞的分化程度和陽性的表達呈反比例關系，即細胞分化的程度越高，那么陽性率就越低。同時，細胞的分化程度還和腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移呈正比例關系，即細胞分化的程度越高，那么腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移你速度就越快。VEGF的受體的表達程度高低與腫瘤的惡性程度及發(fā)展速度呈正相關。當人體處于正常狀態(tài)時，VEGF的表現(xiàn)水平就會很低，而當人體內(nèi)出現(xiàn)惡性腫瘤，也就是我們常說的癌癥時，VEGF的表現(xiàn)則會提高[10]。這說明，與其它的惡性腫瘤一樣，VEGF在賁門癌的生長、轉(zhuǎn)移和侵襲等發(fā)展中具有重要作用，這與文獻報道一致[11-12]。

在進行賁門癌預后效果的判斷時可以將HER-2及VEGF的表達水平最為主要的依據(jù)，實現(xiàn)對高危轉(zhuǎn)移患者的篩選。除此之外，將HER-2及VEGF的表達進行聯(lián)合分析，還可為賁門癌的分子靶向藥物的選擇提供理論科學的證據(jù)。二者的聯(lián)合檢測在賁門癌惡性程度及評估預后將有待研究。

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