李含薇，李詠梅，陳 曦，黃相道，李 東，郭 晶

(北華大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，吉林 吉林 132013)

·論 著·

溶劑萃取銀杏葉總黃酮的探討

李含薇，李詠梅，陳 曦，黃相道，李 東，郭 晶

(北華大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，吉林 吉林 132013)

目的 探討溶劑濃度對(duì)萃取銀杏葉總黃酮含量的影響因素。方法 對(duì)溶劑乙醇不同濃度在相同抽提時(shí)間下，萃取總黃酮含量進(jìn)行對(duì)比。 結(jié)果 隨著乙醇濃度的降低，銀杏葉提取物量、提取率、總黃酮含量也逐漸增高。結(jié)論 溶劑萃取銀杏葉獲得總黃酮含量，在同樣時(shí)間條件下，浸提溶劑濃度選擇20%的乙醇最為適宜。

溶劑；萃?。豢傸S酮

銀杏葉在我國(guó)特有，其藥用價(jià)值自古至今一直被重視，銀杏葉提取物(EGb)含有多種活性成分，包括銀杏黃酮、銀杏內(nèi)酯、銀杏酸等，EGb廣泛應(yīng)用于治療心腦血管等疾病。其中銀杏葉總黃酮(total flavone of ginkgo,TFG)因與抑制前列腺素E2和一氧化氮合成及脂質(zhì)過氧化有關(guān)，具有一定的抗炎作用[1]，對(duì)臨床治療炎癥性疾病具有很好的應(yīng)用前景。提取TFG的方法雖然比較多，但對(duì)TFG含量測(cè)定與萃取液的濃度的關(guān)系報(bào)道很少。本研究針對(duì)溶劑乙醇不同濃度和抽提時(shí)間對(duì)TFG萃取含量的影響做了研究，為進(jìn)一步獲取較高TFG含量奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料和設(shè)備

銀杏葉(2012年5月采集于吉林市林業(yè)局院內(nèi)新鮮銀杏葉)。

試劑：80%乙醇、60%乙醇、40%乙醇、20%乙醇。

儀器：索氏抽提器；HH恒溫水浴鍋(江蘇金壇中大儀器廠)；721分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)；ZFQ-5A真空干燥箱(天津玻璃儀器廠)。

1.2 銀杏葉提取工藝

新鮮銀杏葉→洗凈、晾干→粉碎→用不同濃度乙醇浸提→過濾→蒸餾濃縮→EGb浸膏→真空干燥→回收EGb干粉→分光光度計(jì)→檢測(cè)TFG含量。

準(zhǔn)確稱取已粉碎的干銀杏葉80 g，等量分稱20 g分別置于4個(gè)索氏抽提器濾紙筒內(nèi)，濾紙筒標(biāo)號(hào)為1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)和4號(hào)，分別用80%、60%、40%、20%乙醇等量充分溶解，均在80 ℃水浴箱抽提，時(shí)間48 h，得墨綠色浸膏，用中性濾紙(Φ12.5 cm)過濾，濾速為中速，型號(hào)為102，得棕褐色溶液，分別置于60 ℃恒溫水浴箱中干燥數(shù)天，再置于真空干燥箱，得棕褐色干粉，稱重，1號(hào)384.75 mg,2號(hào)835.27 mg,31248.23 mg,4號(hào)2321.1 mg。

計(jì)算銀杏葉提取率[2]:稱取已粉碎的干銀杏葉m(g)，提取后獲得的EGb凈重m1(g),銀杏葉提取率= m1(g)/m(g)×100%

1.3 對(duì)照溶液的制備

取蘆丁對(duì)照品20 mg,置于10 mL量筒中，加甲醇適量，置水浴箱上微熱充分溶解，自然冷卻，加甲醇到刻度，搖勻，精密量取10 mL，置于100 mL量筒中，加水到刻度，即得蘆丁(0.2 mg/mL)。

分別取亞硝酸鈉2.5 g、硝酸鋁5 g、NaOH 2 g分別置于50 mL量筒中，加蒸餾水至刻度，分別配制成5%、10%、4%的溶液。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

精密量取對(duì)照品溶液1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL，分別置于25 mL的量筒中，各加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6min，加4%NaOH溶液10 mL，再加水到刻度，搖勻，放置15 min，以相應(yīng)的試劑為空白對(duì)照，使用721分光光度計(jì)，在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖1)[3]。

圖 1 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

1.5 TFG含量測(cè)定

根據(jù)繪制曲線圖，TFG一般在24～26 mg之間，確定為25 mL，根據(jù)蘆丁20 mg計(jì)算，其最低和最高值分別是0.032 mg/mL、0.192 mg/mL。分別稱取4次提取的銀杏葉干粉末各10 mg，分別置于10 mL量筒中，在量筒上標(biāo)清樣品1、樣品2、樣品3、樣品4的字樣，用甲醇溶解，增容到10 mL，分別置于2個(gè)25 mL的量瓶中(標(biāo)注字樣同前)，各取1.2 mL，加蒸餾水增容到4.8 mL；對(duì)照組為一空白量筒，加蒸餾水6 mL。取亞硝酸鈉、硝酸鋁、NaOH的濃度和量及放置時(shí)間同上。測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出數(shù)值，并計(jì)算出TFG的含量。

2 結(jié) 果

取等量20 g干銀杏葉，分別進(jìn)行抽提，測(cè)定銀杏葉提取結(jié)果;目標(biāo)樣品1 mg/mL甲醇溶解，取6 mL加樣,測(cè)量總黃酮含量,結(jié)果見表1。

表 1 銀杏葉提取率及總黃酮含量

3 討 論

銀杏葉的提取工藝種類繁多，主要有溶劑提取法、超臨界流體萃取法、超聲波輔助提取法和微波法。其中超臨界流體萃取法由于設(shè)備較大，操作困難等問題難以用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)[4]。本實(shí)驗(yàn)采用有機(jī)溶劑乙醇提取法，抽提時(shí)間為48 h，從表1可以看出在同樣提取時(shí)間條件下，用高濃度(80%)乙醇溶解，得到的銀杏葉提取物量少(384.75 mg)，提取率低(1.92%),TFG含量較低(41.63 mg)。隨著乙醇濃度的降低，銀杏葉提取物量、提取率、TFG也逐漸增高。表中顯示乙醇濃度較低(20%)溶解，得到的銀杏葉提取物多(2321.10 mg)，提取率高(11.60%),TFG含量較高(83.33 mg)，分析認(rèn)為用低濃度的乙醇抽提，可以使被氧化的葉綠素形成的黑綠色黏稠物質(zhì)充分溶解，便于濾出。用低濃度的乙醇比高濃度的乙醇進(jìn)行抽提獲得總黃酮含量較高，用20%的乙醇作為提取劑比較適宜。此方法工藝流程簡(jiǎn)單，設(shè)備價(jià)格便宜，便于推廣，缺點(diǎn)是溶劑難回收，不足之處有待于進(jìn)一步研究改進(jìn)。

[1] 張 黎，陳志武，王 瑜，等.銀杏葉總黃酮抗炎作用及機(jī)制的探討[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001,36(5)：350-352.

[2] 盛建國(guó)，黃東余.銀杏葉提取工藝及其抑菌性的探討[J].糧油食品,2005,13(5):16-18.

[3] 劉峙嶸，俞自由，方裕勛，等.微波萃取銀杏葉黃酮類化合物[J].東華理工學(xué)院學(xué)報(bào)，2005,28(2)：151-154.

[4] 李 焰,楊小燕,林躍鑫,等.銀杏葉有效成分提取與抑菌效果研究[J].中國(guó)畜牧雜志，2006,42(15)：54-56.

Research about flavonoids of ginkgo biloba leaves through solventia extraction

LI Han-wei,LI Yong-mei,CHEN Xi,HUANG Xiang-dao,LI Dong,GUO Jing

(School of Stmatology,Beihua University,Jilin City，Jilin Province,132013，China)

Objective This paper is about the influencing factors of the flavonoid content of ginkgo biloba leaves from solventia extraction. Methods By comparing flavonoid extraction contents from ethanol solventia with different concentration at the same extracting time. Results With the decrease of the ethanol concentration,amount of ginkgo biloba extract,total content of flavonoids extraction yielded gradually increased. Conclusion For flavonoid content of Ginkgo biloba through solvent extraction under the condition of the same time,choice of 20% ethanol concentration is most appropriate.

solvent;extraction;flavonoids

1673-2995(2014)01-0012-03

吉林省教育廳“十二五”科研資助課題(2012163).

李含薇(1964-)，女(漢族)，副教授，碩士生導(dǎo)師.

R285.5

A

2013-10-11)