張 雪,孫雨嬌，喬 圓，何永蘭，史傳林，陳 力，汪瑤菲，韓麗琴

(吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

·論 著·

仙人草中總黃酮體外抗氧化研究

張 雪,孫雨嬌，喬 圓，何永蘭，史傳林，陳 力，汪瑤菲，韓麗琴*

(吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

目的 研究仙人草中總黃酮提取及體外抗氧化活性。方法 采用超聲輔助醇提法提取黃酮，測定黃酮對鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的超氧陰離子自由基和羥自由基的清除率。結(jié)果 測定結(jié)果顯示，黃酮對超氧陰離子自由基和羥自由基的清除率分別為54.85%和96.95%。結(jié)論 黃酮對超氧陰離子自由基和羥自由基具有明顯的抗氧化作用。

仙人草；超聲；抗氧化

1 材料與方法

1.1 主要原料與儀器

仙人草(福建武平)，蘆丁標準品(F20060930，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)，鄰苯三酚、水楊酸、乙醇、石油醚、乙醚等均為分析純，實驗用水為重蒸水。RE-3000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，UV1800型紫外可見分光光度計，PHs-3CW微型酸度計。

1.2 仙人草黃酮類化合物提取

準確稱取仙人草粉末30 g于索氏提取器中，150 mL乙醚加熱回流6 h至無色。按1∶10(g/v)料液比加入70%乙醇并不斷攪拌，超聲(T=60 ℃，t=45 min，P=100 W)提取，趁熱抽濾得濾液呈棕紅色。濃縮液后加入等體積石油醚，萃取3次。準確量取濃縮后的提取液0.5 mL，紫外可見分光光度計在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃譜,得仙人草醇提物在286 nm波長處有最大吸收。

1.3 繪制蘆丁標準曲線

精密稱取干燥至恒重的蘆丁標準品0.076 0 g，用30%乙醇在超聲波40 kHz條件下溶解后，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，30%乙醇定容，搖勻備用。溶液濃度為0.304 0 mg/mL。準確移取上述蘆丁標準溶液0.00、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00 mL于25 mL容量瓶中，分別加入12.5、12.1、11.7、11.3、10.9、10.5 mL 30%乙醇，加入0.8 mL 5%的NaNO2溶液，放置5 min，加入0.8 mL 5%的Al(NO3)3溶液，放置6 min，加入5 mL 4%的NaOH溶液，30%乙醇定容至刻度線，放置10 min，紫外可見分光光度計于510 nm處測定吸光度，繪制標準曲線，得回歸方程：

A=0.011 64C+0.000 62，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9

1.4 仙人草總黃酮含量測定

準確移取稀釋后提取液0.5mL于25 mL容量瓶中，按標準曲線測定方法在510 nm處測定吸光度A。

1.5.1 鄰苯三酚自氧化最大吸收波長測定

在容量瓶中加入4 mL pH=8.2的50 mmol/L Tris-HCL緩沖液，加入1 mL蒸餾水，于25 ℃恒溫水浴中放置20 min，再加入0.1 mL 25mmol/L鄰苯三酚溶液，立即混勻于25 ℃恒溫水浴中反應(yīng)5 min，紫外可見分光光度計在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃譜得鄰苯三酚自氧化最大吸收波長在324 nm。

在容量瓶中加入4mL pH=8.2的50 mmol/L Tris-HCL緩沖液，加入1 mL蒸餾水，于25 ℃恒溫水浴中放置20 min，再加入0.1 mL 25mmol/L鄰苯三酚溶液， 25 ℃恒溫水浴中反應(yīng)5 min，立即加入1 mL 8 mol/L鹽酸終止反應(yīng)， 324 nm波長處測得吸光度A，即為A0；A1為加樣品后的吸光度；A2為不加鄰苯三酚溶液的樣品吸光度。以不加鄰苯三酚溶液和樣品試劑做空白[2]。

清除率%=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

1.6 ·OH清除率測定

1.6.1 ·OH最大吸收波長掃描

在容量瓶中加入1 mL 9 mmol/L FeSO4溶液和1 mL的30%H2O2溶液，混合均勻后加入2 mL 9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液和2 mL蒸餾水。在37 ℃恒溫水浴中反應(yīng)30 min，紫外可見分光光度計在400～600 nm波長范圍內(nèi)掃譜得·OH最大吸收波長為524 nm。

1.6.2 測定·OH清除率

在容量瓶中加入1mL 9mmol/L FeSO4溶液和1 mL的30% H2O2溶液，混合均勻后加入2 mL 9 mmol/L水楊酸-乙醇溶液和2 mL蒸餾水。在37 ℃恒溫水浴中反應(yīng)30min,然后以UV1800型紫外可見分光光度計在524 nm波長處測得吸光度值為A0值，A1為加入樣品的吸光度；A2為不加H2O2的吸光度。以蒸餾水為參比空白[2]。

清除率%=[A0-(A1-A2)]/A0×100%

2 結(jié) 果

仙人草黃酮對·OH的清除作用見圖2。由圖2可知，仙人草中黃酮類化合物對·OH具有相對較強的清除能力，隨濃度增加，清除率隨濃度的變化趨勢不平緩，反映二者之間良好的量效關(guān)系，而且在給定濃度范圍內(nèi)，·OH的清除率均達到50%以上。

圖 1 仙人草黃酮對的清除作用

圖 2 仙人草黃酮對·OH的清除作用

3 討 論

黃酮類化合物作為天然植物中主要的抗氧化成分[2-3]，在治療心血管疾病[4-5]、肝病[6-7]、腫瘤[8-9]、代謝及其他疾病時有很好的作用，還能夠發(fā)揮其抗氧化活性延緩衰老[10-11]。通過測定結(jié)果也證實仙人草中黃酮類化合物對超氧自由基和·OH表現(xiàn)了較強的清除活性。

[1] 劉志偉,吳和明,張 晨.酶法提取仙人草黃酮類化合物的研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,11(21):2903-2905.

[2] 秦海燕,楊 勇.黃芩醇提物的體外抗氧化活性[J].中國新技術(shù)新產(chǎn)品,2009(19):14.

[3] 孟良玉,蘭桃芳,盧佳琨,等.敗醬草中黃酮類化合物的提取及其抗氧化活性[J].食品科學(xué),2010,31(24):215.

[4] 鄭 敏,潘世斌,姜友定,等.大蒜多糖對肝損傷小鼠血清和肝組織ALT、AST的影響及其急性毒性實驗[J].咸寧學(xué)院學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2003,17(2):86-87.

[5] 黃秀蘭,周秋蘭,王 偉,等.淫羊藿總黃酮注射液保護缺血心肌的實驗研究[J].中國新藥雜志,2007,16(21):1754-1755.

[6] 楊慶偉,魯梅芳,金玉妍.灰樹花菌絲體多糖的硫酸酯化及其降血脂作用[J].天津科技大學(xué)學(xué)報,2009,24(4):25-27.

[7] 徐 慶,宋文娟,李麗亞,等.荔枝核總黃酮的抗鴨乙型肝炎病毒作用[J].世界華人消化雜志,2005,13(17):2082-2085.

[8] 劉小玲,李 艷,林 瑩,等.仙草保肝活性成分的分離純化與結(jié)構(gòu)探析[J].廣西大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2010,35(2):330-333.

[9] 蘇 敏,章志強,鄧玉清,等.腫節(jié)風總黃酮對S180小鼠肉瘤的抑瘤作用[J].西北藥學(xué)雜志,2009,24(4):273-274.

[10] 曹群華,瞿偉菁,牛 偉,等.沙棘黃酮對鏈脲佐菌素致糖尿病大鼠降糖作用[J].營養(yǎng)學(xué)報,2005,27(2):151-154.

[11] 簡 潔,李勇文,蔣偉哲,等.玉郎傘黃酮單體對自由基清除作用的實驗研究[J].中國老年學(xué)雜志,2009,29(8):2352-2354.

[12] 范慧新,朱希強,胡安國,等.復(fù)方銀杏葉黃酮治療痔瘡的藥效研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2004,21(3):170-172.

Study the antioxidant of total flavonoids in fairy grass

ZHANG Xue,SUN Yu-jiao,QIAO Yuan,HE Yong-lan,SHI Chuan-lin,CHEN Li,WANG Yao-fei,HAN Li-qin*

(School of Pharmacy,Jilin Medical College,Jilin 132013,China)

Objective To study the antioxidant activity of total flavonoids extraction from fairy grass in vitro. Methods The ultrasonic assisted ethanol extraction were used to extract flavonoids,the clearance effect of flavonoids on superoxide anion radical and hydroxyl radical produced in pyrogallol autoxidation were determination. Results The clearance rates of flavonoids on superoxide anion radical and hydroxyl radical were 54.85% and 96.95%. Conclusion Flavonoids has significant antioxidant effect.

fairy grass;ultrasound;antioxidant

1673-2995(2014)01-0026-03

吉林醫(yī)藥學(xué)院大學(xué)生科研課題(2011-10).

張 雪(1991-)，女(漢族)，在讀本科.

韓麗琴(1970-)，女(錫伯族)，教授，碩士.

R285

A

2013-10-27)