程斯倩，趙麗晶，于馨洋，李海雪，張 赫，郭二勤，劉 歡，李宗洲

(吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

·論 著·

葛根異黃酮對大鼠前列腺增生的影響

程斯倩，趙麗晶*，于馨洋，李海雪，張 赫，郭二勤，劉 歡，李宗洲

(吉林醫(yī)藥學(xué)院，吉林 吉林 132013)

目的 探討葛根異黃酮對丙酸睪酮誘導(dǎo)的去勢大鼠前列腺增生的抑制作用及其發(fā)生機制。方法 雄性Wistar大鼠，隨機分為6組?？瞻捉M大鼠行假手術(shù)(其余均行去勢手術(shù))。飼養(yǎng)7 d后，除空白組注射生理鹽水外，其余5組均皮下注射丙酸睪酮10 mg/(kg·d)，連續(xù)注射10 d，復(fù)制前列腺增生模型。隨后隔兩日一次皮下注射丙酸睪酮維持，陽性對照組灌胃非那雄胺1.0 mg/(kg·d)，葛根異黃酮高、中、低劑量組按照180、120、60 mg/(kg·d)灌胃，其余兩組給予生理鹽水，連續(xù)給藥35 d。取血清，測定前列腺特異性酸性磷酸酶活力；分離前列腺組織，稱重，計算前列腺指數(shù)(PI)；用足趾容積測量儀測前列腺體積的變化；光鏡下觀察前列腺組織形態(tài)的變化。結(jié)果 各劑量組葛根異黃酮對大鼠前列腺濕重、體積及PI相對模型組有明顯影響(P<0.05)。組織形態(tài)學(xué)觀察,不同劑量的葛根組均可緩解由丙酸睪酮所致的大鼠前列腺增生的癥狀，表現(xiàn)為上皮變薄，腺腔內(nèi)分泌物減少，間質(zhì)減少等。結(jié)論 葛根異黃酮對大鼠前列腺增生有一定抑制作用。

良性前列腺增生；葛根異黃酮；去勢

良性前列腺增生(benign prostatic hyperlasia，BPH)[1-2]是常見的中老年男性進(jìn)行性疾病[3]，多在40歲左右開始發(fā)病。據(jù)統(tǒng)計，45歲以上的男性發(fā)病率為42%～90%[4]，并隨年齡增長而逐年增高，到80歲可高達(dá)70%～80%[5]。主要癥狀有夜尿、尿急、尿頻、排尿困難等，此疾病嚴(yán)重影響了中老年人的生活質(zhì)量和身心健康。葛根異黃酮是葛根中的主要有效成分，包括葛根素、3-羥基葛根素、3-甲氧基葛根素、葛根素-木糖苷、大豆苷元、大豆苷、芒柄花素、染料木苷、染料木素等，其中葛根素占主體[6]。葛根異黃酮具有降低血糖、降低血脂、增強免疫、抗氧化、雌激素樣作用[7]等，現(xiàn)在臨床上葛根異黃酮中的葛根素主要應(yīng)用于心血管疾病[8]的治療，而其對前列腺增生的抑制作用尤其是其治療機制的研究等方面國內(nèi)外報道尚少。本研究建立在前期工作的基礎(chǔ)上，初步探討葛根異黃酮對前列腺增生的抑制作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

丙酸睪酮注射液由上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號：090303)；非那雄胺片(5mg/片)由杭州默沙東制藥有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號:120101)；葛根異黃酮由西安天一生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)(純度60%～90%)；前列腺特異性酸性磷酸酶(PACP)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 儀 器

電子分析天平，上海奕宇電子衡器有限公司；FA(N)/JA(N)系列電子天平，上海民橋精密儀器有限公司；GT10-2高速臺式離心機，北京時代北利離心機有限公司；ZH-YLS-7A型足趾容積測量儀，安徽省淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司；722可見分光光度計，上?，F(xiàn)科儀器有限公司。

1.3 實驗方法

72只雄性Wistar大鼠由吉林大學(xué)動物實驗中心提供,編號SCXK-(右)2008-0005,隨機分為6組，每組各12只，即空白組、模型組、陽性對照組和葛根異黃酮高劑量組、中劑量組、低劑量組。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d后，空白組大鼠行假手術(shù)，其余5組大鼠均行去勢手術(shù)，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。將空白組大鼠皮下注射生理鹽水10 mg/(kg·d)，其余組大鼠均皮下注射丙酸睪酮10 mg/(kg·d)，連續(xù)注射10 d后。隨后隔兩日皮下注射原劑量丙酸睪酮(空白組注射生理鹽水)的同時，將空白組和模型組大鼠1.0 mg/(kg·d)生理鹽水灌胃，陽性對照組給予非那雄胺1.0 mg/(kg·d)灌胃，葛根異黃酮高劑量組180 mg/(kg·d)、葛根異黃酮中劑量組120 mg/(kg·d)、葛根異黃酮低劑量組60 mg/(kg·d)分別灌胃相應(yīng)劑量的葛根異黃酮，連續(xù)進(jìn)行35 d。

1.4 指標(biāo)檢測

測定血清前列腺特異性酸性磷酸酶活力(PAP)：末次給藥后，禁食水24 h，稱重，以10%水合氯醛3 mL/kg麻醉，于腹主動脈取血，將血液離心10 min(2 500 r/min)，取上層血清按試劑盒說明測定PAP活力。

前列腺指數(shù)計算：分離前列腺組織，稱量其濕重(mass)，并計算前列腺指數(shù)(PI)[PI =前列腺濕重(mg)/體重(g)]。用足趾容積測量儀測前列腺體積。

HE染色觀察前列腺組織形態(tài)學(xué)改變：將前列腺組織放入10%的福爾馬林溶液中固定，經(jīng)石蠟包埋、連續(xù)4 μm切片、常規(guī)HE染色，光鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)變化。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 前列腺指數(shù)及血清PAP活力測定結(jié)果

與空白組相比,模型組PI及前列腺質(zhì)量均增高，且有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。與模型組相比，葛根異黃酮中劑量組、低劑量組的前列腺質(zhì)量和PI均降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，高劑量組PI降低，有顯著差異(P<0.01)，但葛根異黃酮高、中、低劑量組PAP差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；與模型組相比，葛根異黃酮高、中劑量組和陽性對照組的前列腺體積均降低，有顯著差異(P<0.01),見表1。

2.2 大鼠前列腺組織形態(tài)學(xué)觀察

空白組(圖1)前列腺腺腔大小、細(xì)胞核大小、形態(tài)較一致，擴(kuò)張不明顯，被覆單層立方或矮柱狀上皮，基底膜完整，腺上皮較光滑，排列規(guī)則，無乳頭狀結(jié)構(gòu)，管腔內(nèi)見淡粉染均質(zhì)狀物，間質(zhì)內(nèi)未見血管充血、炎細(xì)胞浸潤和纖維結(jié)締組織增生，無壞死。

表 1 各組大鼠中前列腺質(zhì)量、前列腺指數(shù)、前列腺體積和PAP水平的變化±s，n=12)

與對照組相比，△P<0.01;與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01

模型組(圖2)前列腺腺腔大小不一，腺體增生，腺腔擴(kuò)張明顯，腺上皮呈柱狀及高柱狀，排列較為紊亂,呈乳頭狀向腺腔內(nèi)凸出,顯示腺體上皮組織增生活躍,腔內(nèi)充滿粉色濃染均質(zhì)狀物，間質(zhì)增寬，其內(nèi)血管高度擴(kuò)張充血，并可見淋巴、單核細(xì)胞浸潤及纖維結(jié)締組織增生，局部見變性、壞死。證明造模成功。

與模型組(圖2)相比，陽性對照組(圖6)腺體成分減少，呈萎縮樣改變，間質(zhì)明顯減少；葛根異黃酮高劑量組(圖3)腺上皮較光滑，排列規(guī)整，間質(zhì)減少，組織學(xué)形態(tài)更接近空白組；葛根異黃酮中劑量組(圖4)乳頭狀結(jié)構(gòu)減少;而低劑量組(圖5)組織形態(tài)無明顯改變。

與陽性對照組(圖6)相比，葛根異黃酮高劑量組(圖3)組織形態(tài)無明顯差異；葛根異黃酮中劑量組(圖4)呈現(xiàn)一定增生狀態(tài)。

圖 1 空白組(HE 300×) 圖 2 模型組(HE 300×)

圖 3 高劑量組(HE 300×) 圖 4 中劑量組(HE 300×)

圖 5 低劑量組(HE 300×) 圖 6 陽性組(HE 300×)

3 討 論

目前，前列腺增生的確切病因與發(fā)病機制不明，國內(nèi)外學(xué)者經(jīng)過大量研究提出了多種學(xué)說：上皮-間質(zhì)細(xì)胞相互作用學(xué)說、內(nèi)分泌激素作用學(xué)說、細(xì)胞凋亡學(xué)說、生長因子學(xué)說等[9]。其中內(nèi)分泌激素作用學(xué)說是闡述較為詳盡的一種學(xué)說。下面著重就內(nèi)分泌激素作用學(xué)說方面進(jìn)行說明。

雄激素是影響前列腺生長的主要物質(zhì)，人體前列腺內(nèi)的雄激素90%來自睪丸，10%來自腎上腺素。雄激素本身不能直接對前列腺發(fā)揮作用，需在5α-還原酶作用下生成雙氫睪酮(DHT)[10]，前列腺間質(zhì)細(xì)胞核膜上主要存在5α-還原酶Ⅱ型，生成的DHT與前列腺腺上皮細(xì)胞核膜上的雄性激素受體(AR)結(jié)合成DHT-AR復(fù)合物，入胞后作用于特異性的DNA結(jié)合位點，促進(jìn)雄性激素依賴性基因的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和蛋白合成，同時DHT-AR復(fù)合物刺激間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生各種生長因子[11]，后者經(jīng)自分泌、旁分泌的方式發(fā)揮它們對上皮細(xì)胞的促分裂原作用。

雌激素作為前列腺基質(zhì)細(xì)胞的刺激劑與雄激素協(xié)同導(dǎo)致BPH：循環(huán)血中的雌激素與性激素結(jié)合蛋白(SHBG)結(jié)合入間質(zhì)細(xì)胞，與間質(zhì)細(xì)胞核膜上的雌激素受體結(jié)合入核，調(diào)節(jié)DNA復(fù)制、蛋白質(zhì)合成，同時雌激素還可上調(diào)AR水平[12-13]。

隨著年齡的增長男性體內(nèi)雄激素水平下降，雄激素/雌激素比下降,雌激素促進(jìn)前列腺基質(zhì)細(xì)胞增殖的作用增強，導(dǎo)致了前列腺增生[14]。以往實驗研究表明植物雌激素在腸道菌群的作用下主要代謝為腸二醇和腸內(nèi)脂(ENL)，ENL通過與底物競爭雄烯二酮，抑制雄激素的合成[15]；植物雌激素還能抑制人體組織中5α-還原酶活性[16]，減少DHT的產(chǎn)生。另外，植物雌激素還可與身體各系統(tǒng)、器官、組織細(xì)胞表面的雌激素受體搶先結(jié)合，拮抗機體內(nèi)雌激素發(fā)揮效應(yīng)[17]。葛根異黃酮是目前在分子結(jié)構(gòu)上與人體自身分泌的雌激素最為相似的一種植物雌激素。

本實驗研究結(jié)果中葛根異黃酮高劑量組可以抑制大鼠前列腺增生，且療效較接近陽性對照組。HE染色顯示，葛根異黃酮高劑量組腺上皮較光滑，排列規(guī)整，間質(zhì)減少，接近空白組和陽性對照組；葛根異黃酮中劑量與模型組相比乳頭狀結(jié)構(gòu)減少；而低劑量組組織與模型組相比形態(tài)無明顯改變，與陽性對照組相比，呈現(xiàn)一定增生狀態(tài)。統(tǒng)計學(xué)顯示，與空白組相比，模型組PI及前列腺質(zhì)量均增高，且有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；與模型組相比，葛根異黃酮中劑量組、低劑量組質(zhì)量和PI均降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，高劑量組PI降低,有顯著差異(P<0.01)；與模型組相比，葛根異黃酮高、中劑量組和陽性對照組的前列腺體積均降低，有顯著差異(P<0.01)，但葛根異黃酮高、中、低劑量組PAP差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。故葛根異黃酮可能通過改善體內(nèi)性激素水平來達(dá)到治療前列腺增生的目的。

總之，葛根異黃酮對良性前列腺增生的作用機制有待于進(jìn)一步研究，而本實驗通過研究葛根異黃酮對大鼠前列腺增生模型的影響，為開發(fā)植物性前列腺增生藥物奠定了一定的實驗基礎(chǔ)。此外,在各種植物中，葛根內(nèi)葛根異黃酮含量最高，而葛根是我國南方一些省區(qū)的一種常食蔬菜，開發(fā)和利用葛根將帶來良好的經(jīng)濟(jì)和社會效益。

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The influence of puerariae isoflavones on benign prostatic hyperplasia in emasculated rat

CHENG Si-qian,ZHAO Li-jing*,YU Xin-yang,LI Hai-xue,ZHANG He,GUO Ee-qin,LIU Huan,LI Zong-zhou

(Jilin Medical College,Jilin City，Jilin Province,132013，China)

Objective To study the inhibitory effect of pueraria isoflavones on prostate hyperplasia induced by testosterone in emasculated rats and clarify its mechanism. Methods 72 male Wistar rats were randomly divided into 6 groups,the control group(only Normal Saline，NS),the finasteride group[1.0 mg/(kg·d)],the model group,the pueraria isoflavones group[180,120,60mg/(kg·d) respectively].The rats in the control group underwent sham operation，the rest were emasculated operation.From the 8th day,except the blank control group,rats in the above-mentioned 5 groups were given Testosterone Propionate [10 mg/(kg·d)] by subcutaneous injection for continuous 10 days to copy prostatic hyperplasia model.Then maintaining with subcutaneous injection once every two days,the blank control group and model group were given normal saline[1.0 mg/(kg·d)],the finasteride group was given finasteride [1.0 mg/(kg·d)],the pueraria isoflavones groups were given for 35 days.On the 36th day,serum was taken and the PAP vitality was determined.Then the prostate was separated,and weighed,the index was calculated,prostate volume change using the toe volumetric measuring instrument and the histology and morphology of the prostate was observed. Results Pueraria isoflavone in different dose groups had significant effect on wet weight,volume and index of rat prostate (P<0.05).And alleviated the change of prostate caused by Testosterone Propionate:epithelium thinning,luminal secretion and interstitial substance decreased. Conclusion Pueraria isoflavone had inhibitory effect on benign prostatic hyperplasia in rats.

pueraria isoflavone;benign prostatic hyperplasia;emasculated

1673-2995(2014)01-0017-04

吉林醫(yī)藥學(xué)院大學(xué)生科研基金項目(201101).

程斯倩(1991-)，女(滿族)，在讀本科.

趙麗晶(1971-)，女(漢族)，副主任醫(yī)師，本科.

R285

A

2013-08-17)