胡玲，谷磊，劉蓓蓓，高成城

論著·臨床

抗核抗體和自身免疫性肝病相關(guān)抗體檢測(cè)在原發(fā)性膽汁性肝硬化診斷中的價(jià)值

胡玲，谷磊，劉蓓蓓，高成城

目的探討抗核抗體(ANA)和自身免疫性肝病相關(guān)抗體聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性膽汁性肝硬化診斷中的價(jià)值。方法選取2012年7月—2013年12月住院的原發(fā)性膽汁性肝硬化患者40例作為觀察組，86例非自身免疫性肝病患者為對(duì)照組。采用間接免疫熒光法檢測(cè)患者血清ANA，采用免疫印跡法檢測(cè)抗線粒體抗體(AMA)、SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210，分析其診斷價(jià)值。結(jié)果觀察組患者AMA檢出率為95.00%(38/40)，明顯高于對(duì)照組的5.81% (5/86)(χ2=6.25，P<0.05)。ANA中的著絲點(diǎn)型、核膜型及核多點(diǎn)型檢出率分別為35.00%(14/40)、30.00%(12/40)和22.50%(9/40)，明顯高于對(duì)照組的11.63%(10/86)、5.81%(5/86)和3.49%(3/86)(χ2=2.725、6.780、2.876，P<0.05)。觀察組SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210檢出率明顯高于對(duì)照組(分別為30.00%、22.50%、17.50%、10.00%、15.00% vs. 3.49%、1.16%、4.65%、2.33%、3.49%，均P<0.05)。ANA檢測(cè)觀察組靈敏度和特異度及符合率分別為92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)，明顯高于對(duì)照組的84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。結(jié)論臨床采用ANA和自身免疫性肝病相關(guān)抗體譜聯(lián)合檢測(cè)，可提高原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床檢出率，為其診斷和治療提供重要的參考價(jià)值。

抗核抗體；肝硬化，原發(fā)性，膽汁性；自身免疫性肝病相關(guān)抗體

自身免疫性肝病主要是一組因患者自身抗體存在而導(dǎo)致的肝組織特異性病理損傷的慢性疾病，目前對(duì)其發(fā)病機(jī)制及相關(guān)致病因素還不明確[1，2]，臨床一般認(rèn)為其與自身免疫存在一定關(guān)系。臨床上將其分為原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)、自身免疫性肝炎(AIH)及原發(fā)性硬化性膽管炎(PSC)。這3種疾病可表現(xiàn)為嚴(yán)重肝臟病變，甚至可發(fā)展為肝硬化。隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，這類人群的臨床檢出率不斷增加?，F(xiàn)探討抗核抗體(ANA)和自身免疫性肝病相關(guān)抗體在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中的診斷價(jià)值，為臨床診斷和治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012年7月—2013年12月于我院住院的原發(fā)性膽汁性肝硬化患者40例作為觀察組，按照美國肝病學(xué)會(huì)2000年制定的PBC診斷標(biāo)準(zhǔn)確診[3]。其中男17例，女23例；年齡 52～75 歲，中位年齡62.0歲；病程1.1～3.4年，中位病程2.0年；基礎(chǔ)病：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎12例，強(qiáng)直性脊柱炎10例，病毒性乙型肝炎10例，系統(tǒng)性硬化病8例；合并癥：糖尿病14例，高血壓17例，股骨頭壞死9例。非自身免疫性肝病患者86例為對(duì)照組，患者超聲及膽管造影檢查提示肝管正常。膽汁淤積生化指標(biāo)堿性磷酸酶升高。其中男48例，女38例；年齡 49～74歲，中位年齡61.5歲；病程1.2～3.7年，中位病程2.4年；基礎(chǔ)?。侯愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎15例，強(qiáng)直性脊柱炎12例，病毒性乙型肝炎9例，系統(tǒng)性硬化病4例；合并癥：糖尿病17例，高血壓13例，股骨頭壞死10例。2組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。入選患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 觀測(cè)指標(biāo)與方法 于早上9∶00，患者處于空腹下使用專用血凝真空管采集靜脈血液。以稀釋液稀釋、輕搖調(diào)勻，并置于抗凝管中，然后于采血后1 h內(nèi)檢測(cè)完成，采用SYSMEX XS-800i血液分析儀，按照全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀標(biāo)準(zhǔn)操作程序檢測(cè)，稀釋液、溶血素、清洗液全部為儀器配套試劑以及美國貝克曼公司生產(chǎn)的質(zhì)控液，抗凝劑用濃度為80 g/L的EDTA-K2溶液。觀察組與對(duì)照組均采用間接免疫熒光法檢測(cè)患者血清ANA，分別采用鼠腎、猴肝為抗原基質(zhì)進(jìn)行操作[4]。自身免疫性肝病自身抗體譜用免疫印跡法檢測(cè)：包括抗線粒體抗體(AMA)和抗核顆?？贵w(SP100)、抗肝—胰抗體與抗可溶性肝抗原抗體(SLA/LP)、抗肝細(xì)胞溶質(zhì)抗原I型(LC-1)、抗肝腎微粒體抗體(LK-M)、抗核膜糖蛋白抗體(gp-210)。免疫印跡法：采集患者血清，然后按照1∶100比例稀釋，再利用歐蒙滴定平板技術(shù)，將抗原帶位置固定好，用肉眼判斷檢測(cè)結(jié)果[5]。陽性：觀察特定區(qū)條帶，清晰可見強(qiáng)著色帶。其中TS-型轉(zhuǎn)移脫色搖床(由江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司生產(chǎn))，自身免疫性肝病自身抗體譜試劑盒由德國歐蒙公司提供并嚴(yán)格按照德國歐蒙公司提供操作說明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 AMA及ANA陽性檢出情況比較 觀察組患者AMA檢出率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；ANA中的著絲點(diǎn)型、核膜型及核多點(diǎn)型檢出率均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 2組AMA及ANA陽性檢出情況比較 [例(%)]

2.2 自身免疫性肝病相關(guān)抗體陽性檢出情況比較 觀察組SP100、SLA/LP、LC-1、LK-M、gp-210檢出率均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 2組自身免疫性肝病相關(guān)抗體陽性檢出情況比較 [例(%)]

2.3 診斷試驗(yàn) 觀察組ANA檢測(cè)靈敏度和特異度及符合率分別為92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)，明顯高于對(duì)照組的84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。

3 討 論

在診斷自身免疫性肝病時(shí)，自身抗體檢測(cè)也具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值[6]。但大多數(shù)患者自身抗體并無器官特異性或者種屬性，同時(shí)還無疾病特異性[7]。雖然自身抗體為自身免疫性肝病的血清檢測(cè)標(biāo)志物，但在丙型肝炎和藥物性肝炎等患者人群中均可檢測(cè)到。自身免疫性肝病主要有PBC、AIH及PSC，目前臨床上非常關(guān)注其發(fā)病機(jī)制和診斷及治療方法[8]。AIH一般發(fā)病于女性人群，根據(jù)患者血清中所出現(xiàn)的自身抗體類型，將其分為I型：血清中抗平滑肌抗體和抗核抗體陽性；II型：血清中抗腎微?？贵w1陽性；III型：主要表現(xiàn)為抗可溶性肝抗原/肝胰抗體陽性[9]。

臨床上，PBC屬于一種慢性肝內(nèi)膽汁淤積性疾病，這種疾病大多發(fā)生于中老年女性人群中，且大多數(shù)患者在晚期階段才得以確診。經(jīng)2000年美國肝病學(xué)會(huì)所制定的PBC診斷指南[10]，這種疾病較為重要的免疫學(xué)診斷指標(biāo)為抗線粒體抗體陽性，有95.0%～98.0%的PBC患者抗線粒體抗體表現(xiàn)為陽性[11]。本研究中，PBC患者的抗線粒體抗體陽性檢出率為95.00%，與相關(guān)報(bào)道一致。

SP100抗體是一種可溶性酸性磷酸化核蛋白，其在AMA陰性PBC患者中的陽性檢出率約為60.0%，明顯高于AMA陽性患者的20.0%[12]。所以SP100抗體對(duì)AMA陰性PBC患者的診斷具有非常重要的意義。本研究發(fā)現(xiàn)，在PBC患者核多點(diǎn)型ANA陽性檢出率為22.50%，明顯高于非自身免疫性肝病患者的3.49%(P<0.05)?？筭p-210抗體所識(shí)別的表位主要是gp-210羥基末端上15個(gè)氨基酸殘基，其自身抗體則被認(rèn)為是PBC患者高度特異性抗體，特異性大約為95.00%。大約有50.0%AMA陰性PBC患者血清中可檢測(cè)到抗gp-210抗體，說明患者預(yù)后較差，同時(shí)其還可作為PBC患者預(yù)后判斷標(biāo)準(zhǔn)。在ANA中，抗gp-210主要表現(xiàn)為核膜型，本研究中，PBC患者的ANA核膜型陽性檢出率為30.00%，明顯高于非自身免疫性肝病患者的5.81%(P<0.05)。著絲點(diǎn)型抗體主要是系統(tǒng)性硬化癥患者的一種亞型，而PBC常常會(huì)與其存在10.00%～15.00%的重疊率。本研究發(fā)現(xiàn)，PBC患者著絲點(diǎn)型ANA陽性檢出率為35.00%，明顯高于非自身免疫性肝病患者的11.63%(P<0.05)。SP100抗體、AMA及gp210抗體對(duì)PBC的臨床診斷和預(yù)后判斷具有十分重要的參考價(jià)值。聯(lián)合檢測(cè)可提高其臨床診斷特異性，降低或避免發(fā)生漏診情況。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組ANA檢測(cè)靈敏度和特異度及符合率分別為92.50%(37/40)、87.50%(35/40)、95.00%(38/40)明顯高于對(duì)照組84.88%(73/86)、77.91%(67/86)、87.21%(75/86)(P<0.05)。由此而說明采用ANA和自身免疫性肝病相關(guān)抗體檢測(cè)具有較高靈敏度和特異度，進(jìn)而可提高臨床檢出率，并且患者檢測(cè)符合率較高。

AIH一般發(fā)病于中青年女性人群，主要表現(xiàn)為肝臟炎癥性疾病，極易發(fā)展為肝硬化，且患者病死率較高。采用免疫抑制劑治療具有較好的治療效果，因此需及早診斷和及時(shí)治療。采用ANA診斷AIH的診斷率為100.00%。而SLA/LP為AIH最特異性的檢測(cè)指標(biāo)，其陽性檢出率在10.00%～30.00%，但是其陽性預(yù)測(cè)值接近100.00%，因此對(duì)AIH具有較高的特異性。此外，其在病毒性肝炎患者中主要表現(xiàn)為陰性反應(yīng)。本研究中。在AIH發(fā)病機(jī)制中，LKM-1抗體的作用并不明確，同時(shí)在慢性丙型肝炎患者的血清中，其陽性率大約為6.00%。然在AIH患者中，LKM-1抗體的滴度要明顯高于慢性丙型肝炎患者。本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組SP100、LSA/LP、LC-1、LK-M、gp-210檢出率均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。

總之，ANA和自身免疫性肝病相關(guān)抗體檢測(cè)可提高臨床原發(fā)性膽汁性肝硬化的診斷率。對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化的診斷、治療及預(yù)后判斷均具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值。所以，對(duì)于存在肝臟功能損害和血清肝炎病毒感染指標(biāo)為陰性者，尤其是女性人群，均需及時(shí)進(jìn)行自身抗體檢測(cè)，以及早診斷，及時(shí)治療，改善預(yù)后，進(jìn)而提高患者生活質(zhì)量，降低臨床病死率。

1 譚立明,王園園,李華,等.161例自身免疫性肝病患者相關(guān)自身抗體檢測(cè)的臨床研究[J].免疫學(xué)雜志,2012,28(12):1061-1064.

2 陸俊忠,張迎梅,陳瑩,等.自身免疫性肝病譜線與抗核抗體聯(lián)合檢測(cè)在肝硬化診斷中的意義[J].江蘇醫(yī)藥,2013,39(1):117-118.

3 高志遠(yuǎn),何新穎,徐湘江,等.原發(fā)性膽汁性肝硬化合并系統(tǒng)性硬化癥1例[J].世界華人消化雜志,2013,21(2):195-197.

4 錢金花,徐慶武,馬麗蘋.不同亞型自身免疫性肝病患者隱匿性乙型肝炎病毒感染調(diào)查[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2013,23(12):2932-2934.

5 劉金濤.自身抗體在臨床自身免疫性肝病中的作用和診斷意義[J].中國免疫學(xué)雜志,2013,29(6):669-672.

6 唐劼,盧潔,閆惠平.自身免疫性肝病相關(guān)自身抗體譜的檢測(cè)和臨床意義[J].世界華人消化雜志,2013,21(25):2544-2550.

7 王振威,王穎,王炳元,等.自身免疫性肝病的臨床特點(diǎn)[J].世界華人消化雜志,2011,19(15):1568-1573.

8 翁厚光,曹維克,張迎梅,等.肝功能異?；颊哐遄陨砜贵w檢測(cè)對(duì)診斷自身免疫性肝病的意義[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(11):1885-1887.

9 范琪,包金,姚迪,等.丙型肝炎病毒感染者血清自身抗體檢測(cè)及臨床意義研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,41(2):311-313, 316.

10 陳陽,陳京,張尉華.自身免疫性肝病的臨床與病理特點(diǎn)[J].中國老年學(xué)雜志,2013,33(24):6307-6308.

11 王波,丁楠,常波.乙型肝炎后肝硬化自身抗體檢測(cè)及其對(duì)肝功能影響的研究[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2013,17(11):2022-2025.

12 劉向東.自身免疫性肝病的自身抗體檢測(cè)技術(shù)[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2014,32(3):161-164.

EvaluationofANAandautoimmuneliverdiseaseassociatedantibodiesindiagnosisofprimarybiliarycirrhosis

HULing*,GULei,LIUBeibei,GAOChengcheng.

*DepartmentofLaboratory,HuaianHospitalofNanjingMedicalUniversity,JiangsuProvince,Huaian223300,China

ObjectiveTo investigate the anti-nuclear antibody (ANA) and autoimmune hepatitis antibodies in detection of primary biliary cirrhosis.MethodsFrom July 2012 to December 2013, hospitalized patients with primary biliary cirrhosis of 40 cases were enrolled as the observation group, 86 patients with non-autoimmune liver disease patients as control group. Anti-nuclear antibodies in the sera of patients were detected by indirect immunofluorescence (ANA), Western blot was used to detect anti mitochondrial antibody (AMA), SP100,SLA/LP,LC-1, LK-M, gp-210, analyzed the diagnostic value of them.ResultsIn the observation group, AMA positive rate was 95.00% (38/40), significantly higher than that in the control group of 5.81% (5/86) (χ2=6.25,P<0.05), ANA’s the centromere type, nuclear membrane and nuclear multi point detection rates were 35.00% (14/40), 30.00% (12/40) and 22.50% (9/40), significantly higher than the control group with 11.63% (10/86), 5.81% (5/86) and 3.49% (3/86) (χ2=2.725、6.780、2.876，P<0.05). The observation group’s SP-100,SLA/LP,LC-1, LK-M, gp-210 positive rate were obviously higher than those of the control group (30.00%, 22.50%, 17.50%, 10.00%, 15.00% vs. 3.49%, 1.16%, 4.65%, 2.33%, 3.49%,P<0.05). The observation group’s sensitivity, specificity and coincidence rate was 92.50% (37/40), 87.50% (35/40), 95.00% (38/40), which were significantly higher than the control group with 84.88% (73/86), 77.91% (67/86), 87.21% (75/86) (P<0.05).ConclusionClinical application of ANA and autoimmune hepatitis antibody spectrum joint detection can improve the detection rate of clinical primary biliary cirrhosis, provides important reference value for the diagnosis and treatment.

Anti-nuclear antibody; Liver cirrhosis,primary,biliary; Autoimmune liver disease associated antibodies

223300 南京醫(yī)科大附屬淮安第一醫(yī)院檢驗(yàn)科(胡玲、谷磊、劉蓓蓓)，消化科(高成城)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2014.11.007

2014-06-13)